Микропрепарат амилоидоз селезенки: Амилоидоз селезенки («Саговая селезенка»).

Амилоидоз селезенки («Саговая селезенка»).

Данный препарат – селезенка. Размеры и масса увеличены и плотная. Имеются на разрезе желтовато-серые участки, напоминающие зерна саго; преимущественно в лимфоидных фолликулах.

Описание патологического процесса: В селезенке амилоид откладывается в лимфатических фолликулах или же равномерно по всей пульпе. В первом случае амилоидно измененные фолликулы на разрезе имеют вид полупрозрачных зерен, напоминающих зерна саго

Осложнения: Амилоидоз селезенки ведет к ее функциональной недостаточности и атрофии. Удаление органа способно улучшить клиническую картину, снизить уровень выработки амилоида.

Заключение: данные морфологические изменения свидетельствуют о образовании саговой селезенки.

Диагноз: Саговая селезенка.

Амилоидоз и некроз почки.

Данный макропрепарат – почка. Форма органа сохранена, масса и размеры значительно увеличены. Орган пестрый. На разрезе видны корковое и мозговое вещество. В мозговом веществе значительные отложения оранжевого цвета, среди которых располагаются отграниченные соединительно-тканные сосуды. Корковое вещество состоит из участков 2х1 см. и более мелких участков белесоватого цвета, которые отграничены друг от друга темно-бурыми полосами, которые размытыми краями врезаются в светлые участки.

Описание патологических изменений:

Данные патологические изменения могли развиться в результате мутационных изменений на фоне длительной антигенной стимуляции при ряде инфекций и аутоимунных заболеваниях. Мутация макрофагов приводит к усилению выброса ими интерлейкина 1, который стимулирует синтез SAA в крови – повышается поглощение SAA макрофагами, которые не успевают их разрушать и накапливают. На фоне синтеза ACD идет сборка F-фибрина и присоединение Р-компонента (в результате плазморрагии) при слабом имунном ответе организма. Так как амилоид строится из белков организма, имунный ответ слабый и амилоидоз прогрессирует. Амилоид накапливается по ходу ретикулярных и кологеновых волокон: стенки сосудов, в капиллярных петлях и мезангии-клубочков, в базальной мембране канальцев и строме, капсуле за амилоидозом развивается склероз.

Распространяется амилоидоз последовательно:

1) в латентной стадии – в пирамидах;

2) в протеинурической – в клубочках и артериолах;

3) в нефротической – по ходу базальной мембраны канальцев;

4) в азотемической – гибель большинства нефронов и образование амилоидно-сморщенной почки. Белые участки на разрезе – амилоид, бурые – кровоизлияния в следствии атрофии стенок сосудов.

Исход:

1) благоприятный: резорбция амилоида в начале процесса;

2) неблагоприятный:

а) смерть в следствии хронической почечной недостаточности и уремии;

б) острая почечная недостаточность;

в) инфекция;

г) нефрогенная артериальная гипертензия и ее последствия.

Заключение: данные морфологические изменения свидетельствуют о мутационном повреждении макрофагов на фоне длительной антигенной стимуляции, что приводит к амилоидозу почек.

Диагноз: Амилоидоз и некроз почки.

Сальная селезенка.

Селезёнка сальная (селезенка ветчинная) — увеличенная плотная селезенка, поверхность разрезов которой суховата и имеет характерный сальный блеск; наблюдается при диффузном отложении амилоида

Причины: диффузное отложение амилоида

Диагноз: Амилоидоз почки

Лимфогранулематоз селезенки.

Селезенка увеличена, форма сохранена, обнаруживаются клетки Рида-Березовского-Штернберга. Лимфоидные узлы увеличены

Причины: Лимфогранулематоз

Септическая селезенка.

увеличенная дряблая селезенка, на разрезе которой можно получить обильный соскоб пульпы; морфологический признак сепсиса, обусловленный гиперплазией лимфоидной ткани, полнокровием синусов и скоплением в них лейкоцитов септическая селезенка — увеличена в 3—4 раза, с резко напряженной капсулой; на разрезе рисунок строения стерт, пульпа малинового цве-та

Причины: сепсис, гиперплазия лимфоидной ткани.

Гиалиноз капсулы селезенки. Глазурная селезенка.

Данный макропрепарат – селезенка. Массы и размеры органа не увеличены, форма сохранена. Цвет капсулы – белый, она крупнобугристая, причем бугристость более выражена спереди. Углубления более и менее крупные. Заметен участок диаметром 0,5 см. на передней поверхности органа желтого цвета. Сзади и со стороны с капсулой спаяны участки ткани желтоватого цвета.

Описания патологических изменений.

Данные патологические изменения могли развиться в результате деструкции волокнистых структур и повышения тканево-сосудистой проницаемости (плазморрагия) в связи с ангионевротическими метаболическими и иммуно-патологическими процессами. Плазморрагии – пропитывание ткани белками плазмы, их абсорбция на волокнистых структурах, преципитация и образование гиалина. Гиалиноз может развиться в исходе плазматического пропитывания, фиброноидного набухания, воспаления, некроза, склероза. В капсуле селезенки гиалиноз развивается как исход склероза. Соединительная ткань набухает, теряет фибрилярность, ее пучки сливаются в однородную плотную, хрящевидную массу, клетки сдавливаются, атрофируются. Ткань становиться плотной, белесоватой, полупрозрачной. На ряду с гиалинозом соединительной ткани в селезенке может присутствовать как физиологическое явление местный гиалиноз артериол. При этом образуется простой гиалин (вследствие пропотевания неизмененных или малоизмененных компонентов плазмы крови).

Исход:

взрилавпщилапщзлищпзлищапзил – Docsity

федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования «Тюменский государственный медицинский университет» Министерства здравоохранения Российской Федерации (ФГБОУ ВО Тюменский ГМУ Минздрава России) Кафедра патологической анатомии и судебной медицины Альбом для практических работ по дисциплине «Патологическая анатомия» 1 Преподаватель______________________________ Студент___________________ группа №_______ 2 Занятие № 1.1.2. «Амилоидоз, нарушение обмена сложных белков и хромопротеидов» Микропрепарат № 14 «Амилоидоз почки» Окраска конго-рот. Увеличение малое. 1. .Отложение амилоида в клубочках 2. Отложение амилоида в канальцах 3. Отложение амилоида в кровеносных сосудах 4. Расширенный, заполненный цилиндрами каналец Микропрепарат № 15 «Амилоидоз печени». Окраска конго-рот. Увеличение малое. 1. Отложение амилоида между печеночными балками 2. Сдавленные, атрофированные балки печени 3. Отложение амилоида между печеночными балками 4. Отложение амилоида в стенке сосуда Микропрепарат № 18 «Гемосидероз печени». Окраска по Перлсу. Увеличение малое. 1. Отложение гемосидерина в клетках Купфера Микропрепарат № 16 «Амилоидоз селезенки». Окраска конго-рот. Увеличение малое. Описать. __________________________________________________________________ __________________________________________________________________ __________________________________________________________________ __________________________________________________________________ ________________________ Микропрепарат № 19 «Гемомеланоз печени». Окраска гематоксилином и эозином. Увеличение малое. Описать. __________________________________________________________________ __________________________________________________________________ __________________________________________________________________ __________________________________________________________________ ________________________ Описать макропрепараты: А. «Амилоидоз почки2″ Б. «Амилоидоз печени» 1. ___________________________________ -размер- _____________________________________ 2._____________________________________- цвет – ____________________________________ 3._________________________________-консистенция-_________________________________ 4. ______________________________.-места отложения-________________________________ 5.________________________________- поверхность -___________________________________ 6.__________________________________ – исход -______________________________________ 4. 5. Исход – _________________________________________________________________________ В. «Камень в почечной лоханке» 1.Локализация камня – ______________________________________________________________ 2. Форма – _________________________________________________________________________ 3. Цвет – __________________________________________________________________________ 4. Размер- _________________________________________________________________________ 5. Состояние окружающих тканей – __________________________________________________ __________________________________________________________________________________ 6. Вторичные изменения лоханки, чашечек и паренхимы почек -____________________________ __________________________________________________________________________________ 7. Исход-__________________________________________________________________________ Занятие № 1.1.4. «Некроз. Апоптоз. Общая смерть» Микропрепарат № 27 «Ишемический инфаркт почки». Окраска гематоксилином и эозином. Увеличение малое. 1. Неизмененная ткань почки 2. Зона некроза 3. Зона демаркационного воспаления 4. Лейкоцитарная инфильтрация 5. Гиперемированные сосуды Микропрепарат № 28 «Казеозный некроз при туберкулезе». Окраска гематоксилином и эозином. Увеличение малое. 1. 3она казеозного некроза 2. Лимфоидная ткань 3. Кариорексис Микропрепарат № 26 «Некротический нефроз». Окраска гематоксилином и эозином. Увеличение малое. Описать. __________________________________________________________________ __________________________________________________________________ __________________________________________________________________ ____________ Описать макропрепараты: А. «Гангрена кишечника» 1.Цвет – __________________________________________________________________________ 2. Консистенция кишечной стенки -___________________________________________________ 3. Исход -_________________________________________________________________________ Б. «Инфаркт почки» 1. Цвет-___________________________________________________________________________ 2. Форма – _________________________________________________________________________ 3. Консистенция- ___________________________________________________________________ 4. Границы – _______________________________________________________________________ 5. Причина некроза – ________________________________________________________________ 6. Исход-__________________________________________________________________________ Занятие № 1.1.6. «Расстройства кровообращения. Стаз. Тромбоз. ДВС- синдром. Эмболия. Ишемия. Инфаркт» Микропрепарат № 5 «Смешанный тромб». Окраска гематоксилином и эозином. Увеличение малое. 1. Стенка сосуда 2. Тромботические массы в просвете сосуда 3. Эритроциты 4. Фибрин 5. Очаг организации Микропрепарат № 6 «Жировая эмболия легкого». Окраска Суданом 3. Увеличение малое. 1. Альвеолы 2. Капли жира в капиллярах межальвеолярных перегородок Микропрепарат № 8 «Геморрагический инфаркт легкого». Окраска гематоксилином и эозином. Увеличение малое. 1. Участки легкого с венозной гиперемией 2. Участки инфаркта Описать макропрепараты: А. «Геморрагический инфаркт легкого» 1. Механизм возникновения – _________________________________________________________ 2. Размеры – _______________________________________________________________________ 3. Форма – _________________________________________________________________________ 4.Цвет – __________________________________________________________________________ 5. Отграниченность от окружающих тканей – ________________________________________ 6. Исход-__________________________________________________________________________ Б. «Пристеночный тромб» 1 Цвет тромба – ___________________________________________________________________ 2. Форма – ________________________________________________________________________ 3. Размеры – _______________________________________________________________________ 4. Характер поверхности – __________________________________________________________ 5. Отношение к стенке аорты – ______________________________________________________ 6. Исход – _________________________________________________________________________ _________________________________________________________________________________ Модульная единица 1.2. «Воспаление. Регенерация. Опухолевый рост» Занятие № 1.2.1. «Общее учение о воспалении. Экссудативное воспаление» Микропрепарат № 32 «Фибринозный перикардит». Окраска гематоксилином и эозином. Увеличение малое. 1. Эпикард 2. Миокард 3. Фибринозная пленка 4. Сосуды, лейкоциты Микропрепарат № 33 «Гангренозный цистит». Окраска гематоксилином и эозином. Увеличение малое. 1. Некроз слизистой оболочки 2. Лейкоцитарная инфильтрация мышечной части стенки пузыря 3. Тромбоз сосудов 4. Лейкоцитарная инфильтрация наружной оболочки пузыря Микропрепарат № 34 «Гнойный сальпингит». Окраска гематоксилином и эозином. Увеличение малое. 1. Слизистая оболочка 2. Стенка трубы Занятие № 1.2.2. «Хроническое воспаление. Продуктивное воспаление» Микропрепарат № 44 «Туберкулезные гранулемы в лимфоузле». Окраска гематоксилином и эозином. Увеличение малое. 1. Творожистый некроз 2. Эпителиоидные клетки 3. Клетки Пирогова-Лангганса 4.Лимфоциты Микропрепарат № 45 «Сифилитический мезаортит». Окраска гематоксилином и эозином. Увеличение малое. 1.Стенка аорты 2.Гуммозные инфильтраты 3. Очаги склероза в среднем слое аорты Описать макропрепараты: А. «Милиарный туберкулез селезенки» 1.Форма – _________________________________________________________________________ 2.Цвет – __________________________________________________________________________ 3. Размеры – _______________________________________________________________________ 4. Отграниченность – _______________________________________________________________ 5. Исход – _________________________________________________________________________ Б. «Сифилитический мезаортит» 1. Форма аневризмы – _______________________________________________________________ 2. Размеры – _______________________________________________________________________ 3.Локализация – ____________________________________________________________________ 4. Вид интимы аорты – _____________________________________________________________ 5. Исход – _________________________________________________________________________ Занятие № 1.2.3. «Регенерация, гипертрофия, гиперплазия, метаплазия» Микропрепарат № 48 «Грануляционная ткань». Окраска гематоксилином и эозином. Увеличение малое. 1. Сосуды 2. Эритроциты 3. Лейкоциты 4. Фибробласты 5. Лимфоциты 6. Коллагеновые волокна Микропрепарат № 52 «Метаплазия эпителия желез предстательной железы». Окраска гематоксилином и эозином. Увеличение малое. . 1. Неизмененные железы 2. Многослойный плоский эпителий в железах 3. Секрет в просвете желез 4. Коллагеновые волокна между железами Микропрепарат № 54а «Железистая гиперплазия эндометрия». Окраска гематоксилином и эозином. Увеличение малое. 1. Железы эндометрия 2. Строма эндометрия 3. Размеры предстательной железы – ________________________________________________ 4. Вид гипертрофии – _______________________________________________________________ 5. Исход – _________________________________________________________________________ Занятие № 1.2.4. «Опухоли: определение, номенклатура, классификация. Опухоли из мезенхимы» Микропрепарат № 58 «Лейомиома». Окраска по Ван-Гизону. Увеличение малое. 1. Пучки коллагеновых волокон 2. Гладкомьшечные клетки Микропрепарат № 61 «Фибросаркома из веретеновидных клеток». Окраска гематоксилином и эозином. Увеличение большое. 1. Веретеновидные клетки 2. Строма опухоли Микропрепарат № 59 «Кавернозная гемангиома». Окраска гематоксилином и эозином. Увеличение малое. 1. Кавернозные полости 2. Соединительнотканные стенки кавернозных полостей Микропрепарат № 56 «Фиброма». Окраска гематоксилином и эозином Увеличение малое. Описать.___________________________________________________________ __________________________________________________________________ __________________________________________________________________ __________________________________________________________________ __________________________________________________________________ ____________________ Микропрепарат № 56а «Липома». Окраска гематоксилином и эозином. Увеличение малое. Описать. __________________________________________________________________ __________________________________________________________________ __________________________________________________________________ __________________________________________________________________ ________________ Описать макропрепараты : А. «Фибромиома матки» 1.Локализация узла – ________________________________________________________________ 2. Размер узла – ____________________________________________________________________ 3. Консистенция – __________________________________________________________________ 4. Вид на разрезе – __________________________________________________________________ 5. В каком возрасте чаще всего возникает опухоль? – ____________________________________ 6. Исход – _________________________________________________________________________ Б. «Саркома» 1. Характеристика опухолевого узла – _________________________________________________ 2. Размеры – _______________________________________________________________________ Микропрепарат № 68 «Плоскоклеточный рак без ороговения». Окраска гематоксилином и эозином. Увеличение малое. Описать.___________________________________________________________ __________________________________________________________________ __________________________________________________________________ __________________________________________________________________ ________________ Микропрепарат № 69 «Плоскоклеточный ороговевающий рак». Окраска гематоксилином и эозином. Увеличение малое. 1. Гнезда раковых клеток 2. Очаги ороговения 3. Строма опухоли Микропрепарат № 76 «Тератома». Окраска гематоксилином и эозином. Увеличение малое. 1. Железистый эпителий 2. Многослойный плоский эпителий 3. Хрящевая ткань 4. Костная ткань Микропрепарат № 736 «Глиобластома». Окраска гематоксилином и эозином. Увеличение малое. 1. Опухолевые клетки, их полиморфизм 2. Псевдорозеточные структуры 5. Место локализации – ______________________________________________________________ 6. Исход – _________________________________________________________________________ Модульная единица 1.3. «Частная патологическая анатомия – 1» Занятие № 1.3.1. «Болезни сердечно-сосудистой системы. Атеросклероз. Гипертоническая болезнь» Микропрепарат № 77 «Атеросклероз аорты». Окраска гематоксилином и эозином. Увеличение малое. 1. Липиды 2. Стенка аорты Микропрепарат № 79 «Инфаркт миокарда». Окраска гематоксилином и эозином. Увеличение малое. 1. Мышечные волокна 2. Очаг некроза 3. .Грануляционная ткань Микропрепарат № 80 «Кардиосклероз». Окраска гематоксилином и эозином. Увеличение малое. 1. Мышечные волокна 2.Коллагеновые волокна Микропрепарат № 81 «Нефроангиосклероз». Окраска гематоксилином и эозином. Увеличение малое. 1. Гиалиноз артериолы 2. Гиалинизированнный клубочек 3. Склероз межуточной ткани 4. Нормальный клубочек 5. Гипертрофированный клубочек Микропрепарат № 78 «Атеросклероз коронарной артерии». Окраска гематоксилином и эозином, суданом 3. Увеличение малое. Описать. __________________________________________________________________ __________________________________________________________________ __________________________________________________________________ ____________ Описать макропрепараты: А. «Атеросклероз аорты» 1. Внешний вид – ___________________________________________________________________ 2. Наблюдаемые стадии атеросклеротических изменений – _______________________________ 3. Локализация поражения в пределах стенки сосуда – ___________________________________ 4.На каком уровне поражение сосуда выражено сильней – ________________________________ Б. «Аневризма аорты» 1.Форма аневризмы – _______________________________________________________________ Занятие № 1.3.2. «Ревматические болезни. Ревматизм. Врожденные и приобретенные пороки сердца» Микропрепарат № 82 «Возвратно-бородавчатый эндокардит». Окраска гематоксилином и эозином. Увеличение малое. 1. Склерозированный клапан 2. Тромботические наложения Микропрепарат № 84»Ревматическая гранулема». Окраска гематоксилином и эозином. Увеличение малое. 1. Сердечная мышца 2. Межуточная ткань сердца 3. Эндокард 4. Скопление гистиоцитов (гранулема) Микропрепарат № 13»КМПС в створке клапана при ревматизме». Окраска альциановым синим. Увеличение малое. Описать.___________________________________________________________ __________________________________________________________________ __________________________________________________________________ __________________________________________________________________ ________________ Описать макропрепарат «Бородавчатый эндокардит» 1.Характер изменений створок митрального клапана, хордальных нитей, сосочковых мышц и пристеночного эндокарда – ______________________________________________________ __________________________________________________________________ ____2. Величина бородавок, цвет, локализация – _____________________________________________ __________________________________________________________________ ____3.0 каком виде порока можно думать при данной форме поражения клапана – ____________ __________________________________________________________________ ____4. Толщина стенки левого желудочка. Причина его гипертрофии – _______________________ __________________________________________________________________ ____ Занятие № 1.3.3. «Болезни органов дыхательной системы. Острые пневмонии» Микропрепарат № 31 «Крупозная пневмония». Окраска гематоксилином и эозином. Увеличение малое. 1. Альвеолы 2. Межальвеолярные перегородки 3. Фибрин в просвете альвеол 4. Лейкоциты в просвете альвеол 5. Гиперемия в межальвеолярных перегородках Микропрепарат № 88 «Бронхопневмония». Окраска гематоксилином и эозином. Увеличение малое. 1. Бронх 2. Альвеолы 3. Гнойный экссудат в просвете бронха 4. Лейкоцитарная инфильтрация стенки бронха 5. Лейкоциты в межальвеолярных перегородках и в просвете альвеол Описать макропрепараты: А. «Крупозная пневмония» 1. Размеры органа -_________________________________________________________________ 2. Вес органа – _____________________________________________________________________ 3. Консистенция – __________________________________________________________________ Описать макропрепараты: А. «Бронхоэктазы легкого» 1. Вид на разрезе -__________________________________________________________________ 2. Состояние просвета и стенки бронха -______________________________________________ 3.Изменения окружающей легочной ткани – ____________________________________________ 4. Исход -__________________________________________________________________________ Б. «Пневмосклероз» 1.Вид с поверхности – _______________________________________________________________ 2. Вид на разрезе – __________________________________________________________________ 3. Состояние стенки сосудов и бронхов – ______________________________________________ 4. Консистенция – __________________________________________________________________ 5. Исход – _________________________________________________________________________ В. «Буллезная эмфизема легких» 1. Размеры органа – _________________________________________________________________ 2. Цвет – __________________________________________________________________________ 3. Консистенция – __________________________________________________________________ 4. Наличие булл – ___________________________________________________________________ 5.Их размеры – _____________________________________________________________________ 6. Осложнения процесса – ___________________________________________________________ 7. Исход – _________________________________________________________________________ Г. «Легочное сердце» 1.Размеры – _______________________________________________________________________ 2. Толщина стенок правого и левого желудочков – _______________________________________ 3. Причины возникновения патологии-_________________________________________________ 4. Исход-__________________________________________________________________________ Д. «Силикоз легкого» 1.Цвет -___________________________________________________________________________ 2. Консистенция – __________________________________________________________________ 3. Размеры узелков – ________________________________________________________________ 4. Их цвет – _______________________________________________________________________ 5. Степень развития соединительной ткани – __________________________________________ 6. Указать формы силикоза – _______________________________________________________ 7. Осложнения – ____________________________________________________________________ 8. Исход – _________________________________________________________________________ Микропрепарат № 99 «Печень при лимфолейкозе» Окраска гематоксилином и эозином. Увеличение малое. Описать. Локализация лейкемической инфильтрации_____________________________________ __________________________________________________________________ ____ ее выраженность________________________________________________________ состояние печеночных клеток_______________________________________________ __________________________________________________________________ ____ Описать макропрепараты: А. «Селезенка при миелолейкозе» 1. Размеры – _______________________________________________________________________ 2.Вес – ____________________________________________________________________________ 3.Характер поверхности – ___________________________________________________________ 4. Наличие инфарктов – _____________________________________________________________ 5. Их размеры – ____________________________________________________________________ 6. Форма – _________________________________________________________________________ 7. Цвет с поверхности – _____________________________________________________________ 8. Цвет на разрезе – ________________________________________________________________ 9. Исход – _________________________________________________________________________ Б. «Лимфоузлы при лимфолейкозе» 1. Форма – ________________________________________________________________________ 2. Цвет -__________________________________________________________________________ 3. Размеры – _______________________________________________________________________ 4. Исход – _________________________________________________________________________ В. «Порфирная селезенка» 1. Цвет -__________________________________________________________________________ 2. Рисунок – ________________________________________________________________________ 3. Размеры некрозов – _______________________________________________________________ 4. Исход – ________________________________________________________________________ Занятие № 2.1.2. «Болезни пищеварительной системы. Язвенная болезнь желудка и 12-перстной кишки. Аппендицит» Микропрепарат № 93 «Хроническая язва желудка». Окраска гематоксилином и эозином. Увеличение малое. 1. Язвенный дефект 2. Некротический слой 3. Грануляционная ткань 4. Эрозированный сосуд Микропрепарат № 94 «Флегмонозно-язвенный аппендицит». Окраска гематоксилином и эозином. Увеличение малое. 1. Изъязвленная слизистая оболочка 2.Лейкоцитарная инфильтрация 3. Полнокровные сосуды Микропрепарат № 95 «Хронический аппендицит». Окраска гематоксилином и эозином. Увеличение малое. 1. Атрофированная слизистая оболочка 2. Разросшаяся соединительная ткань 3.Жировая ткань 4.Лимфо-лейкоцитарная инфильтрация Занятие № 2.1.3. «Болезни печени, желчного пузыря и желчных путей. Гепатиты. Цирроз. Желчнокаменная болезнь» Микропрепарат № 98 «Подострая токсическая дистрофия печени». Окраска гематоксилином и эозином. Увеличение малое. 1. Белковая и жировая дистрофия печеночных клеток 2. Разрастание соединительной ткани 3. Лимфогистиоцитарная инфильтрация 4. Некроз печеночных клеток Микропрепарат № 97 «Портальный атрофический цирроз печени». Окраска пикрофуксином по Ван Гизону. Увеличение малое. 1. Разросшаяся соединительная ткань 2. Ложные печеночные дольки 3. Склероз сосудов Микропрепарат № 97а «Билиарный цирроз печени». Окраска гематоксилином и эозином. Увеличение малое. Описать. __________________________________________________________________ __________________________________________________________________ __________________________________________________________________ __________________________________________________________________ ________________ Описать макропрепараты: А. «Постнекротический цирроз печени» 1.Характер поверхности органа [крупно- или мелкобугристый] – __________________________ 2. Цвет -__________________________________________________________________________ .?. Размеры узлов-регенератов – ______________________________________________________ 4. Причины возникновения – __________________________________________________________ 5. Осложнения – ____________________________________________________________________ 6. Исход -__________________________________________________________________________ Б. «Портальный цирроз печени» 1. Характер поверхности органа – ____________________________________________________ 2. Цвет – __________________________________________________________________________ 3. Размер узлов-регенератов – ________________________________________________________ 4.Причины возникновения- ___________________________________________________________ 5. Осложнения – ____________________________________________________________________ 6. Исход – _________________________________________________________________________ В. «Рак печени на фоне описторхоза» 1.Локализация – ____________________________________________________________________ 2. Размеры – _______________________________________________________________________ 3. Границы опухоли – _______________________________________________________________ 5. Состояние желчных протоков – ____________________________________________________ 6. Состояние паренхимы печени – _____________________________________________________ 7.Исход – __________________________________________________________________________ Микропрепарат № 14 «Амилоидный нефроз». Окраска конго-рот, гематоксилином. Увеличение малое. 1. Амилоид в клубочке 2. Амилоид под базальной мембраной 3. Амилоид по ходу сосудов 4. Амилоид в строме Микропрепарат № 104а «Хронический пиелонефрит». Окраска гематоксилином и эозином. Увеличение малое. 1. Склероз стромы 2. Воспалительная инфильтрация межуточной ткани 3. Склероз сосудов 4. Расширение канальцев 5. Цилиндры в канальцах Микропрепарат № 26 «Некротический нефроз». Окраска гематоксилином и эозином. Увеличение малое. 1. Некроз эпителия канальцев почки 2. Отечность стромы органа 3. Расширенные венозные сосуды 4. Кровоизлияния Описать макропрепараты: А. «Вторично сморщенная почка» 1. Размер почки – ___________________________________________________________________ 2. Консистенция – __________________________________________________________________ З. Вид с поверхности – ______________________________________________________________ 4. Состояние перилоханочной жировой клетчатки – _____________________________________ 6. Исход – _________________________________________________________________________ Б. «Большая пестрая почка» 1. Размер почки – ___________________________________________________________________ 2. Вид с поверхности – ______________________________________________________________ 3.Цвет органа – ____________________________________________________________________ 4.Исход- __________________________________________________________________________ В. «Амилоидоз почек» 1. Величина органа – ________________________________________________________________ 2. Консистенция – __________________________________________________________________ З. Вид на разрезе – __________________________________________________________________ 4. Исход – _________________________________________________________________________ Г. «Некротический нефроз» 1. Величина органа – ________________________________________________________________ 2. Консистенция – __________________________________________________________________ З. Вид на разрезе – __________________________________________________________________ 4. Вид с поверхности – ______________________________________________________________ Модульная единица 2.2. «Частная патологическая анатомия – 3» Занятия № 2.2.1, 2.2.2. «Болезни половых органов. Патология беременности» Микропрепарат № 106 «Псевдоэрозия шейки матки». Окраска гематоксилином и эозином. Увеличение малое. 1.Многослойный плоский эпителий 2. Цилиндрический эпителий 3. Воспалительные инфильтраты 4. Эрозионные железы Микропрепарат № 109 «Хорионэпителиома». Окраска гематоксилином и эозином. Увеличение большое. 1. Клетки Лангганса 2. Синцитиальные элементы 3. Кровоизлияния 4. Очаги некроза Микропрепарат № 109а «Пузырный занос». Окраска гематоксилином и эозином. Увеличение малое. Описать. __________________________________________________________________ __________________________________________________________________ __________________________________________________________________ ____________ Занятие № 2.2.3. «Перинатальная патология» Микропрепарат № 131 «Гиалиновые мембраны». Окраска гематоксилином и эозином. Увеличение малое. 1. .Бронхи 2. Просвет альвеол 3. Гиалиновые мембраны 4. Указать какое состояние ребенка способствует развитию данной патологии и почему? _____________________________ _____________________________ _____________________________ _____________________________ _____________________________ ____________________ Микропрепарат № 135 «Аспирация околоплодных вод». Окраска гематоксилином и эозином. Увеличение малое. 1. Межальвеолярные перегородки 2. Просветы альвеол 3. Полнокровные сосуды легкого 4. Аспирационные массы в просвете альвеол и бронхов 5. Частицы мекония в содержимом дыхательных путей 6. Указать какие еще структурные элементы могут обнаруживаться в дыхательных путях при аспирации околоплодных вод? _____________________________ _____________________________ _____________________________ _____________________________ _____________________________ ____________________ Занятие № 2.2.4. «Патология, связанная с факторами окружающей среды» Микропрепарат № 40 «Альвеококкоз легкого». Окраска гематоксилином и эозином. Увеличение малое. 1. .Легочная ткань 2. Очаги некроза 3. Пузырьки паразита 4. 4.Лейкоцитарная воспалительная инфильтрация 5. Разрастание соединительной ткани Микропрепарат № 41 «Описторхоз печени». Окраска гематоксилином и эозином. Увеличение малое. 1. Расширенный желчный проток 2. Описторхис в просвете протока 3. Перидуктальный склероз 4. Аденоматоз эпителия 5. Папилломатоз эпителия Микропрепарат № 42 «Актиномикоз». Окраска гематоксилином и эозином. Увеличение большое. 1. Друза лучистого гриба 2. Гнойный экссудат 3. Соединительная ткань Модульная единица 2.3. «Инфекционные болезни» Занятие № 2.3.1. «Кишечные инфекции. Брюшной тиф. Дизентерия. Сыпной тиф» Микропрепарат № 111 «Лимфоузел при брюшном тифе». Окраска гематоксилином и эозином. Увеличение малое. 1. Гиперплазия ретикулярных клеток 2. Макрофаги 3. Макрофагальная гранулема Микропрепарат № 112 «Сыпнотифозный энцефалит». Окраска гематоксилином и эозином. Увеличение малое. 1. Перицеллюлярный отек 2. Периваскулярный отек 3. Гиперемированные сосуды 4. Сыпнотифозная гранулема Микропрепарат № 134 «Дифтеритический колит при дизентерии». Окраска гематоксилином и эозином. Увеличение малое. 1. Некроз слизистой оболочки 2. Фибринозный экссудат в зоне некроза и лейкоциты 3. Гиперемия, отек и воспалительная инфильтрация в мышечном слое кишечника Микропрепарат № 110 «Пейерова бляшка при брюшном тифе» Окраска гематоксилином и эозином. Увеличение малое. Описать. __________________________________________________________________ __________________________________________________________________ __________________________________________________________________ __________________________________________________________________ _____________ Описать макропрепараты: А. «Пейеровы бляшки при брюшном тифе в стадии мозговидного набухания» 1. Форма – _________________________________________________________________________ 2. Величина – _______________________________________________________________________ 3. Цвет – __________________________________________________________________________ 4.Локализация патологии – __________________________________________________________ 5. Сущность изменений в бляшке – ____________________________________________________ 6. Исход – _________________________________________________________________________ Б. «Колит при дизентерии» 1. Толщина стенки – ________________________________________________________________ 3. Консистенция – __________________________________________________________________ 4. Кровенаполнение – ________________________________________________________________ 5. Вид слизистой оболочки – __________________________________________________________ 6. Форма язв – _____________________________________________________________________ 7.Локализация язв – _________________________________________________________________ 8. Величина язв – ___________________________________________________________________ 9.Исход – __________________________________________________________________________ ____ Б. “Некротическая ангина при скарлатине” 1. Внешний вид зева и миндалин- ______________________________________________________ 2.Характер поражения [вид воспаления] – _____________________________________________ 3.Характер поражения слизистой оболочки языка [вид языка] – ___________________________ 4.Глубина поражения зева и миндалин, возможные пути распространения поражения – _______ __________________________________________________________________ ____ 5. Исходы – ________________________________________________________________________ __________________________________________________________________ ____ Занятие № 2.3.3. «Первичный и гематогенный туберкулез. Вторичный туберкулез» Микропрепарат № 121 «Милиарный туберкулез». Окраска гематоксилином и эозином. Увеличение большое. 1. Легочная ткань 2. Туберкулезная гранулема 3. Очаг некроза 4. Гигантские клетки Пирогова- Лангганса 5. Эпителиоидные клетки Микропрепарат № 122 «Туберкулезный менингит». Окраска гематоксилином и эозином. Увеличение малое. 1. Вещество мозга 2. Мозговые оболочки 3. Очаги некроза 4. Лимфоидная инфильтрация 5. Клетки Пирогова-Лангганса Микропрепарат № 124 «Фиброзно-очаговый туберкулез». Окраска гематоксилином и эозином. Увеличение малое. 1. Легочная ткань 2. Туберкулезный очаг с творожистым некрозом 3. Многоядерные гигантские клетки Пирогова-Лангганса 4. Фиброзная ткань вокруг очага поражения Микропрепарат № 128 «Туберкулема» Окраска гематоксилином и эозином. Увеличение малое. 1. Творожистый некроз 2. Очаги обызвествления 3. Фиброзная капсула 4. Легочная ткань с воспалительной инфильтрацией Описать макропрепараты: А. «Первичный туберкулезный комплекс» 1.Локализация первичного аффекта – __________________________________________ 2. Размеры – _____________________________________________________________ 3. Цвет – _______________________________________________________________ 4. Форма – ______________________________________________________________ 5. Наличие лимфоаденита – __________________________________________________ 6.Локализация – __________________________________________________________ 7. Размеры лимфоузлов – ____________________________________________________ 8. Цвет на разрезе – _______________________________________________________ 9.Исход – _______________________________________________________________ __________________________________________________________________ __________________________________________________________________ ________________ __________________________________________________________________ ____ Описать макропрепараты: А. «Септическая селезенка» 1. Размеры – __________________________________________________________________ 2. Форма – ____________________________________________________________________ 3. Консистенция – _____________________________________________________________ 4. Состояние капсулы – _________________________________________________________ 5. Цвет на разрезе – ___________________________________________________________ 6.Наличие соскоба пульпы – _____________________________________________________ 7. Отличие септической гиперплазии селезенки от сепсис-лента – ____________________ _____________________________________________________________________________ Б. «Полипозно-язвенный эндокардит аортального клапана» 1.Локализация – _______________________________________________________________ 2. Наличие полипозно-язвенного эндокардита – _____________________________________ 3. Цвет – _____________________________________________________________________ 4. Форма – ____________________________________________________________________ 5. Размеры – __________________________________________________________________ 6.Деформация – ________________________________________________________________ 7. Обызвествление створок клапанов – ___________________________________________ 8. Исход – _______________________________________________________________

Амилоидоз селезенки: причины, симптомы, лечение

Селезенка – лимфоидный орган, участвующий в процессах кроветворения.

К функциям селезенки относятся:

  1. Образование лимфоцитов
  2. Продукция антител
  3. Дифференцировка эритроцитов и разрушение поврежденных форм
  4. Накопление тромбоцитов

Амилоидоз – заболевание системного характера, в основе которого лежит нарушение обмена белков, а также патология функции иммунитета. При данном заболевании образуется амилоид – гликопротеид, приводящий к нарушениям функции органов и тканей, в которых он образуется. Процесс поражает разные органы: легкие, сердце, почки, кожу, скелет, органы желудочно-кишечного тракта. Встречается как самостоятельное (идиопатическое) или вторичное заболевание.

Виды амилоида

Выделяют два основных вида амилоидов, различных по своей структуре, составу, способу образования.

Является продуктом расщепления сывороточного белка амилоида А, который в норме находится в крови некоторое время, а затем разрушается. Но при наличии воспаления его концентрация резко увеличивается и сохраняется продолжительное время.

Является аномалией иммуноглобулинов.

Классификация причин амилоидоза

  1. Первичный

Патология в данном случае является самостоятельным заболеванием. Ее причину установить сложно. Как правило, поражаются клетки иммунной системы с образованием AL-амилоида.

  1. Вторичный

Клинически может не проявляется несколько лет. Поражается тот орган, где наиболее выражено отложение амилоида. Возникает на фоне других заболеваний.

К ним относятся:

  • инфекционные
  • гнойные
  • онкология крови
  • ревматологические

Заболевание опасно развитием множества симптомов различной степени выраженности, вплоть до формирования полиорганной недостаточности, а в дальнейшем летальным исходом.

  1. Наследственный
  2. Старческий

Люди старше 80 лет находятся в группе риска образования амилоида. Это происходит из-за сопутствующей патологии. Чаще всего амилоид откладывается в головном мозге и в сердце.

  1. Онкопатология

При данной причине происходит поражение органа системным заболеванием, где уже имеется онкологическая патология.

Симптомы амилоидоза селезенки

При поражении селезенки амилоидозом происходит увеличение размера органа. Выявить спленомегалию на первичном осмотре помогает пальпация. В норме селезенка не пальпируется. При увеличении орган становится плотным, но безболезненным.

Амилоидоз селезенки характеризуется появлением следующих симптомов:

В анализе крови выявляется снижение количества эритроцитов, гемоглобина. Клинические проявления заключаются в слабости, одышке при привычной физической нагрузке, бледности кожи, упадке сил.

Симптом проявляется понижением числа лейкоцитов в крови. Пациент может предъявлять жалобы на учащенные инфекционные заболевания.

  • Тромбоцитопения

Количество тромбоцитов крови заметно уменьшается. Клинически это проявляется кровоизлияниями на коже, частыми кровотечениями из носа и десен, что связано с нарушением свертываемости крови.

Стадии развития амилоидоза селезенки

  1. Саговая селезенка. Размеры органа при этом нормальные. Макропрепарат в разрезе имеет сероватые участки, что может свидетельствовать об отложении белка в лимфоидных фолликулах.
  2. Сальная селезенка. Происходит спленомегалия, орган становится плотным. Макропрепарат селезенки характеризуется сальным блеском и сухостью.

Диагностика

Диагноз выставляется на основании проведения объективного осмотра пациента, сбора жалоб, лабораторной и инструментальной диагностики.

При первичном осмотре при пальпации селезенки можно выявить спленомегалию. Далее врач назначает лабораторные исследования, куда входят:

  1. Клинический анализ крови

Для диагностики поражения селезенки обращают внимание на снижение эритроцитов, гемоглобина крови, лейкоцитов и тромбоцитов.

  1. Общий анализ мочи

Помогает выявить поражение почек.

  1. Биохимический анализ крови

Помогает при исследовании причин амилоидоза, выявляет нарушения функций тех или иных органов.

К инструментальным методам диагностики амилоидоза относятся:

Данный вид исследования позволяет выявить увеличение селезенки, а также определить поражение других внутренних органов, нарушение кровотока.

Относится к «золотому стандарту» исследования. На проверку берется биоматериал (ткань селезенки). Затем проводится исследование биоптата с использованием красителей. При наличии амилоидоза препарат окрашивается в сине-фиолетовый или зеленый цвет. Микроскопически заболевание выглядит как образования палочковидного характера, расположенные в произвольном порядке.

Лечение

В связи с тем, что патология выявляется на поздних стадиях, лечение носит симптоматический характер, а при развитии осложнений (например, почечной недостаточности) поддерживающий. Выявленное увеличение селезенки является показанием для госпитализации.

Лечение амилоидоза проводится комплексно с использованием медикаментов, диетотерапии. В некоторых случаях возможно оперативное лечение.

Можно выделить следующие пути воздействия при лечении:

  • Воздействие на факторы, участвующие в развитии амилоида
  • Замедление развития амилоида
  • Ускорение процессов, отвечающих за рассасывание амилоида

Медикаментозная терапия

Для лечения данного заболевания применяются следующие группы препаратов:

  1. Противоопухолевые (приводят к нарушению образования белка и распространения клеток, что приводят к замедлению формирования амилоида)
  2. Противоподагрические (замедляет образование лейкоцитов)
  3. Стероидные противовоспалительные (кроме противовоспалительного действия, препараты данной группы влияют на иммунные процессы, замедляют лимфоцитопоэз)
  4. Аминохинолиновые (замедляют синтез ДНК)

Диета

Специального меню, способствующего лечению, нет. Диета назначается исключительно с целью профилактики почечной недостаточности, являющейся основным осложнением заболевания. Необходимо придерживаться следующих принципов питания:

  • Дробное питание
  • Ограничение потребления соли и жидкости
  • Исключение из употребления алкоголя, кофе, сухофруктов, выпечки, газированных напитков
  • Добавление в рацион овощей и фруктов
  • Разрешено выпивать некрепкие напитки (чай), соки, молочную продукцию

Оперативное лечение

Является симптоматическим методом лечения. При развитии недостаточности органа показано его пересадка. Возможно пересадить почку, сердце, кожу и ткань печени. Опасность состоит в том, что пересаженный орган может не прижиться.

Профилактика амилоидоза

Эффективность профилактики зависит от вида амилоидоза. Первичный вид не подлежит профилактике, потому что неизвестны причины возникновения заболевания. Наследственную форму необходимо выявлять на уровне внутриутробного развития ребенка. При наличии генов, ответственных за развитие патологии, рекомендуется прерывание беременности. Генетическое обследование помогает выявить заболевание, если в анамнезе кто-то из родственников страдал от патологии.

Для осуществления профилактики вторичного вида патологии, необходимо своевременно лечить хронические заболевания.

Прогноз

Из-за выявления амилоидоза на поздней стадии и наличия серьезных осложнений прогноз неблагоприятный. Средняя продолжительность жизни после постановки диагноза зависит от формы процесса и степени нарушений функции внутренних органов.

Тесты для самоконтроля, вопросы и список микропрепаратов для сдачи экзамена

И.И.Бабиченко, А.Л.Владимирцева, Н.М.Харченко

РУКОВОДСТВО

К ЛАБОРАТОРНЫМ ЗАНЯТИЯМ

ПО ПАТОЛОГИЧЕСКОЙ АНАТОМИИ

ПО СПЕЦИАЛЬНОСТИ – СТОМАТОЛОГИЯ

Москва

Издательство Российского университета

дружбы народов
2004


У т в е р ж д е н о

РИС Ученого совета


Российского университета дружбы народов

А в т о р ы:

И.И.Бабиченко, А.Л.Владимирцева, Н.М.Харченко
Руководство к лабораторным занятиям по патологической анатомии по специальности – стоматология / Авт. И.И.Бабиченко, А.Л.Владимирцева, Н.М.Харченко. – М.: Изд-во РУДН, 2004. – 368с.

Руководство включает краткий теоретический материал, аннотации макроскопических и микроскопических препаратов, тесты для самоконтроля, вопросы и список микропрепаратов для сдачи экзамена.

Предназначено для выполнения лабораторных работ по общему и частному курсу патологической анатомии студентами III курса медицинского факультета по специальности – стоматология.

© Бабиченко И.И., Владимирцева А.Л., Харченко Н.М. (авт.), 2003

© Издательство Российского университета дружбы народов, 2003

ОБЩАЯ ПАТОЛОГИЧЕСКАЯ АНАТОМИЯ
ТЕМА I.
БЕЛКОВЫЕ ДИСТРОФИИ.
Д и с т р о ф и я – сложный патологический процесс, в основе которого лежат нарушения метаболизма клеток и который ведет к структурно-функциональному повреждению клеток и тканей.

По виду обмена дистрофии делятся на: белковые, жировые, углеводные и минеральные.

По локализации дистрофии подразделяются на: паренхиматозные, мезенхимальные и смешанные.

Дистрофии бывают приобретенного и врожденного происхождения.

В зависимости от распространенности патологического процесса выделяют системные и местные дистрофии.

Основными механизмами развития дисторофий являются:

декомпозиция, инфильтрация, резорбция, блокада механизмов выделения и извращенный синтез.

Внутриклеточные (паренхиматозные) белковые дистрофии: зернистая, гиалиново-капельная и вакуольная.

Внеклеточные (мезенхимальные) белковые дистрофии: мукоидное набухание, фибриноидное набухание, гиалиноз и амилоидоз.

В основе мукоидного набухания лежит пропитывание плазменными белками соединительной ткани, деполимеризация гликозамингликанов соединительной ткани (ГАГ) с освобождением кислых продуктов – хондроитинсерной и глюкуроновой кислот, которые образуют соединения с белками плазмы крови. При этом основное вещество соединительной ткани, при окраске толуидиновым синим, меняет цвет с голубого на красноватый (метахромазия).

Метахромазия- изменение цвета красителя в процессе гистологической окраски тканей.

Фибриноидное набухание связано с иммунокомплексным повреждением микроциркуляторного русла и соединительной ткани, сопровождается деструкцией коллагеновых волокон и проникновением в соединительную ткань иммуноглобулинов и фибриногена. Продукты деполимеризации ГАГ соединяются с фибриногеном и образуется плотное эозинофильное вещество – фибриноид.

Гиалиноз – вид мезенхимальной белковой дистрофии, для которой характерно образование внеклеточного гиалина – однородных полупрозрачных плотных масс, напоминающих гиалиновый хрящ. Гиалиноз является результатом соединения продуктов деполимеризации ГАГ со всеми компонентами плазмы крови, за счет плазморрагии.

Мукоидное набухание, фибриноидное набухание и гиалиноз – являются стадиями процесса дезорганизации соединительной ткани при иммунном воспалении, характерном для различных аутоиммунных заболеваний.

Амилоидоз – стромально – сосудистый диспротеиноз, связанный с образованием в соединительной ткани сложного гликопротеида – амилоида, вытесняющего и замещающего паренхиматозные элементы.

Выделяют следующие формы амилоидоза: первичный, наследственный, вторичный, старческий и связанный с гемодиализом при хронической патологии почек.

Основные заболевания, приводящие к вторичному амилоидозу: бронхоэктатическая болезнь, остеомиелит, туберкулез, сифилис, лепра, ревматоидный артрит, злокачественные новообразования.

Амилоидоз кожи – отложение амилоида в дерме кожи по периколлагеновому типу. Различают локализованный и системный, первичный и вторичный амилоидоз.

Первичный системный амилоидоз характеризуется высыпаниями на коже лица, шеи и туловища в виде бляшек, бородавчатых разрастаний, узелков. Возможна макрохейлия, макроглоссия, ксеростомия.

Опухолевидный амилоидоз – опухолевидные образования чаще на лице, груди, в области гениталий. Болеют чаще пожилые мужчины, отмечается наследственный фактор. Для диагностики вводят внутрикожно или подкожно 1,5% раствор конго-рот. Участки с амилоидом краснеют через 24-48 часов.
ИЗУЧИТЬ МАКРОПРЕПАРАТЫ:
314. Гиалиноз капсулы селезенки.

Капсула селезенки утолщена, белесоватая, полупрозрачная, напоминает глазурь – “глазурная” селезенка.
66. Гиалиноз соединительнотканных волокон в саркоме.

Саркома (злокачественная опухоль), на ее разрезе видны белесоватые, полупрозрачные волокна.
481. Гиалиноз и склероз створок митрального клапана. (Митральный стеноз).

Створки митрального клапана сердца утолщены, плотные, белесоватого цвета, сращены между собой.
2, 143. Амилоидоз селезенки.

Селезенка увеличена в размерах, уплотнена, на разрезе сального вида, амилоид располагается в красной пульпе – “сальная” селезенка.
451. Амилоидоз почки.

Почка увеличена, плотная, малокровная, на разрезе сального вида – “сальная” почка (сальный блеск).
333. Амилоидоз почки с начальными явлениями сморщивания.

Почка увеличена, плотная, малокровная, поверхность почки неровная, бугристая, на разрезе почка “сального” вида.
23. Бронхоэктазы в легком.

Просветы бронхов расширены, стенка утолщена. Причина приобретенного (вторичного) амилоидоза.
82. Фиброзно-кавернозный туберкулез легких.

На разрезе легкого видны крупные полости. Причина приобретенного вторичного амилоидоза.
430. Туберкулезный спондилит.

Один из позвонков разрушен, на его месте рыхлые, творожистые массы некроза. Причина вторичного амилоидоза.
226. Солитарная сифилитическая гумма печени (пластина).

Причина вторичного амилоидоза.
30. Муляж. Проказа (лепра).

Воспалительные инфильтраты на коже кисти. Причина вторичного амилоидоза.
ИЗУЧИТЬ МИКРОПРЕПАРАТЫ:
22. Паренхиматозная (зернистая) дистрофия почки.

Эпителий проксимальных извитых канальцев набухший, в его цитоплазме видны розовые белковые зерна. Просветы канальцев сужены, граница эпителия, обращенная в просвет канальцев, смазана. (Смотреть под большим увеличением).


Указать на рисунке:

1 –

нефроциты,

2 –

эозинофильные зерна,

3 –

просвет канальцев.

31. Гидропическая дистрофия печени.

Объем гепатоцитов увеличен, они представляют собой наполненные жидкостью клетки.


Указать на рисунке:



вакуоли в цитоплазме гепатоцитов.

93а. Мукоидное набухание стенки аорты.

Соединительная ткань интимы аорты набухшая, гомогенная, базофильная (синеватого цвета вследствие поглощения гематоксилина).


Указать на рисунке:



набухшая интима.

97Б. Мукоидное набухание соединительной ткани ушка сердца при ревматизме (окраска толуидиновым синим).

Коллагенровые волокна миокарда набухшие, метахроматичные (фиолоетово-розового цвета) за счет накопления ГАГ.
145а. Гиалиноз сосудов головного мозга при гипертонической болезни.

Стенки артериол и мелких артерий утолщены, гомогенны – вследствие отложения в них плотных белковых масс, в ткани мозга диапедезные кровоизлияния.


Указать на рисунке:



гиалин-уплотненный дегидрированный белок.

25в. Амилоидоз почки (Окраска конго-рот).

Отложение амилоида – розового цвета.


Указать на рисунке

1 –

в клубочках,

четыре локализации амилоида:

2 –

под базальными мембранами канальцев,

3 –

в стенках сосудов,

4 –

в строме мозгового вещества почки.

27. “Сальная” селезенка. (Окраска конго-рот).

Диффузное отложение амилоида в красной пульпе и в стенках сосудов. Лимфоидные фолликулы уменьшены, амилоида в них нет.
26в. “Саговая” селезенка. (Окраска конго-рот).

Отложение амилоидных масс розового цвета в белой пульпе – в лимфоидных фолликулах. Красная пульпа свободна. Макроскопически селезенка имеет вид “саговой” (с белыми зернами).

26г. Биопсия слизистой оболочки десны при амилоидозе. (Окраска конго-рот). Демонстрация.

Коллагеновые волокна окрасились в красный цвет.

А т л а с (рисунки):

1 – зернистая дистрофия почечных канальцев,

21, 22 –мукоидное набухание стенки артерии и клапана сердца,

29 – гиалиноз артерии мозга,

37 – амилоидоз почек (окраска конго-рот).
Т е с т ы: выбрать правильные ответы.
1.Как классифицируются дистрофии по локализации?


  1. органные

  2. паренхиматозные

  3. смешанные

  4. клеточные

  5. тканевые

  6. мезенхимальные

2. Выберете основные механизмы, лежащие в основе проявления паренхиматозных дистрофий.


  1. декомпозиция

  2. инфильтрация

  3. трансформация

  4. резорбция

  5. извращенный синтез

  6. все перечисленное верно

3. Укажите наиболее частые причины развития паренхиматозных дистрофий.


  1. гипоксия

  2. интоксикация

  3. тезаурисмозы

  4. переутомление

  5. прекращение кровообращения

  6. все перечисленное верно

4. В каких органах чаще встречаются зернистые дистрофии?


  1. почках

  2. селезенке

  3. печени

  4. желудке

  5. сердце

  6. во всех перечисленных

5. Каковы микроскопические характеристики зернистой дистрофии?


  1. появление небольших вакуолей

  2. наличие в цитоплазме клеток эозинофильных зерен

  3. потеря тонких структур

  4. стертость клеточных границ

  5. все перечисленное

6. Как макроскопически выявляется зернистая дистрофия?


  1. не выявляется

  2. орган имеет мутный или тусклый вид

  3. уменьшением размера органа

  4. изменение окраски органа

7. Как макроскопически выявляется гиалиново-капельная дистрофия?


  1. не выявляется

  2. орган имеет мутный или тусклый вид

  3. уменьшением размера органа

  4. изменение окраски органа

8. При каких заболевания в почках встречается гиалиново-капельная дистрофия?


  1. пиелонефрите

  2. гломерулонефрите

  3. отравлениях ртутью и свинцом

  4. мочекаменной болезни

9.Последствия каких видов паренхиматозных белковых дистрофий являются необратимыми?


  1. зернистой

  2. гиалиново-капельной

  3. вакуольной

  4. гиалиноза

10.Как микроскопически выявляется вакуольная дистрофия в цитоплазме клеток?


  1. по вакуолям наполненным жидкостью

  2. вакуолям с жировыми включениями

  3. вакуолям с эозинофильной зернистостью

11.При каких заболеваниях чаще всего встречаются белковые мезенхимальные дистрофии?


  1. острых пневмониях

  2. ревматических болезнях

  3. инфарктах

  4. атеросклерозе

12. Какие процессы лежат в основе мукоидного набухания?


  1. накопление в паренхиме органа гидрофильных ГАГ

  2. накопление в строме органа гидрофильных ГАГ

  3. распад коллагеновых и ретикулярных волокон

  4. пропитывание стромы белками плазмы крови

13.Что такое метахромазия?


  1. отложение метахромазина в соединительной ткани

  2. изменение окраски в результате отложения хромотропных веществ

  3. распад соединительной ткани

14.Какие мезенхимальные белковые дистрофии обратимы?


  1. мукоидное набухание

  2. фибриноидное набухание

  3. гиалиноз

  4. амилоидоз

15.Какие процессы лежат в основе фибриноидного набухания?


  1. разрушение коллагена и приобретение им свойств фибрина

  2. иммунокомплексное повреждение соединительной ткани

  3. проникновение в соединительную ткань фибриногена

  4. деполимеризация ГАГ

16.Что является исходом фибриноидного набухания?


  1. мукоидное набухание

  2. амилоидоз

  3. фибриноидный некроз

  4. гиалиноз

17.При каких заболеваниях встречается гиалиноз?


  1. гипертоническая болезнь

  2. инфаркт миокарда

  3. ревматизм

  4. опухоли соединительной ткани

  5. опухоли из эпителия

18.Что такое амилоидоз?


  1. паренхиматозный диспротеиноз

  2. стромальный диспротеиноз

  3. мезенхимальный липидоз

  4. паренхиматозный липидоз

19.Основные макроскопические характеристики пораженных органов при амилоидозе.


  1. бледность

  2. сальный вид

  3. уплотнение

  4. покраснение

  5. мутный оттенок

20.Химический состав амилоида.


  1. гликопротеиды плазмы крови

  2. фибриллярные белки из амилоидобластов

  3. фибриллярные белки соединительной ткани

  4. продукты дезорганизации ГАГ

21.Какие органы чаще поражаются при первичном амилоидозе?


  1. почки

  2. сердце

  3. надпочечники

  4. нервно-мышечная система

  5. селезенка

  6. печень

22.Какие органы чаще поражаются при вторичном амилоидозе?


  1. почки

2- сердце

3- надпочечники

4- нервно-мышечная система

5- селезенка


  1. печень

23.Какие органы чаще поражаются при старческом амилоидозе?


  1. почки

  2. мозг

  3. сердце

  4. печень

  5. артерии

  6. поджелудочная железа.

24.При каких заболеваниях встречается вторичный амилоидоз?


  1. остеомиелиты

  2. гепатиты

  3. туберкулез

  4. хронические бронхиты

  5. лимфогранулематоз

25. Какие стадии амилоидоза выделяют при поражении почек?


  1. доклиническая

  2. клиническая

  3. протеинурическая

  4. амилоидно-липоидный нефроз

5- нефросклероз
26. Отложение амилоида в дерме кожи идет по:
1- периневральному типу,

2- периколлагеновому типу,

3- периретикулярному типу.
27. У женщины 38 лет на коже лица и шеи высыпания в виде бляшек, бородавчатых разрастаний и узелков с развитием ксеростомии. Назовите вид амилоидоза:

1) опухолевидный,

2) первичный системный,

3) вторичный.
28. У пожилого мужчины на груди опухолевидное образование. Для диагностики подкожно ввели 1,5% раствор конго-рот, через сутки опухолевидное образование покраснело. Диагноз:

1) фиброма,

2) липома,

3) опухолевидный амилоидоз,

4) первичный системный амилоидоз.

Селезенка – амилоид – неопухолевые поражения Атлас

Селезенка – амилоид у самцов мышей B6C3F1/N из хронического исследования. Амилоидный белок (стрелка) окружает и инфильтрирует белую пульпу, которая атрофирована (стрелка).

Рисунок 1 из 2

Селезенка – амилоид у самцов мышей B6C3F1/N из хронического исследования (большее увеличение на рис. 1).Амилоидный белок присутствует в маргинальной зоне и красной пульпе (стрелки).

Рисунок 2 из 2

комментарий:

Амилоидоз — системное заболевание, характеризующееся внеклеточным отложением аморфного белкового материала во многих тканях, включая селезенку, печень и почки. В селезенке мышей амилоид откладывается в красной пульпе и прилегает к белой пульпе (краевая зона) ( Рисунок 1 и фигура 2 , стрелки).Когда это поражение тяжелое, оно может привести к атрофии белой пульпы ( Рисунок 1 , наконечник стрелы). Амилоид можно идентифицировать по яблочно-зеленому двойному лучепреломлению при окрашивании конго красным и визуализировать в поляризованном свете, или его можно обнаружить иммуногистохимически. Амилоидоз редко встречается у мышей и крыс B6C3F1. Заболеваемость спонтанным амилоидозом у мышей увеличивается с возрастом и может зависеть от различных факторов, включая происхождение породы, диету, окружающую среду и воспаление. У мышей спонтанный возрастной (сенильный) амилоидоз был связан с отложением амилоидного аполипопротеина А2 (АпоА2), тогда как воспалительный амилоидоз коррелировал с сывороточным амилоидом А (белком острой фазы).ApoA2 является основным компонентом сывороточного липопротеина высокой плотности у мышей.

Рекомендация:

При наличии амилоида в селезенке следует диагностировать и присвоить ему степень тяжести. Поскольку амилоидоз является системным заболеванием, другие ткани, такие как печень и почки, также должны быть проверены на наличие амилоида. Вторичные поражения, такие как некроз или дегенерация паренхиматозных клеток, не должны диагностироваться отдельно, за исключением случаев, когда это оправдано тяжестью или важно для интерпретации результатов исследования, но должны быть описаны в описании патологии.

ссылок:

Ge F, Yao J, Fu X, Guo Z, Yan J, Zhang B, Zhang H, Tomozawa H, Miyazaki J, Sawashita J, Mori M, Higuchi K. 2007. Амилоидоз у трансгенных мышей, экспрессирующих мышиный амилоидогенный аполипопротеин A-II. (Апоа2с). Лаборатория Инвест 87:633-643. Резюме: http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/17468778

Харада Т., Эномото А., Бурман Г.А., Маронпот Р.Р. 1999. Печень и желчный пузырь. В: Патология мыши (Maronpot RR, изд.). Cache River Press, Вена, Иллинойс, 119–183.

Национальная программа по токсикологии. 2010. НТП ТР-558. Исследования токсикологии и канцерогенеза 3,3′,4,4′-тетрахлоразобензола (TCAB) [CAS № 14047-09-7] у крыс Harlan Sprague-Dawley и мышей B6C3F1 (исследования через зонд). НТП, Исследовательский Треугольник Парк, Северная Каролина. Резюме: http://ntp.niehs.nih.gov/go/33564

Сатти А.В. 2006. Гистопатология селезенки. Токсикол Патол 34:466-503. Полный текст: http://tpx.sagepub.com/content/34/5/466.full.pdf

Уорд Дж.М., Манн П.С., Моришима Х., Фрит Ч.1999. Тимус, селезенка и лимфатические узлы. В: Патология мыши (Maronpot RR, изд.). Cache River Press, Вена, Иллинойс, 333-360.

Селезенка – Метаплазия адипоцитов

Что показывают гистологические данные при обследовании спленомегалии?

Автор

Ниту Радхакришнан, MD  Онколог, Kettering Cancer Care

Ниту Радхакришнан, MD является членом следующих медицинских обществ: Американский колледж врачей, Американское общество клинической онкологии, Американское общество гематологов

Раскрытие информации: ничего не раскрывается .

Соавтор (ы)

Рональд А. Захер, MBBCh, FRCPC, DTM&H Профессор внутренней медицины и патологии, директор Центра крови Хоксворта, Академический медицинский центр Университета Цинциннати

Рональд А. Захер, MBBCh, FRCPC, DTM&H является членом следующих медицинских обществ : Американская ассоциация развития науки, Американская ассоциация банков крови, Американская ассоциация клинических и климатологических исследований, Американское общество клинической патологии, Американское общество гематологов, Колледж американских патологов, Международное общество переливания крови, Международное общество тромбоза и гемостаза, Королевский колледж врачей и хирургов Канады

Раскрытие информации: Нечего раскрывать.

Главный редактор

Emmanuel C Besa, MD  Почетный профессор, медицинский факультет, отделение гематологических злокачественных новообразований и трансплантации гемопоэтических стволовых клеток, Онкологический центр Kimmel, Медицинский колледж Джефферсона Университета Томаса Джефферсона

Emmanuel C Besa, MD является членом следующих медицинских общества: Американская ассоциация онкологического образования, Американское общество клинической онкологии, Американский колледж клинической фармакологии, Американская федерация медицинских исследований, Американское общество гематологии, Нью-Йоркская академия наук,

Раскрытие информации: Нечего раскрывать.

Дополнительные участники

Джина М. Матасия-Мерфи, доктор медицины  Научный сотрудник в области гематологии/онкологии, Медицинский колледж Университета Цинциннати

Джина М. Матасия-Мерфи, доктор медицинских наук, является членом следующих медицинских обществ: Американское общество клинической онкологии

Раскрытие информации: ничего раскрывать.

Благодарности

Wadie F Bahou, MD Заведующий отделением гематологии, директор стипендии гематологии/онкологии, профессор кафедры внутренних болезней Государственного университета Нью-Йорка в Стоуни-Брук

Wadie F Bahou, MD, является членом следующих медицинских обществ: Американское общество гематологов

Раскрытие информации: Нечего раскрывать.

Дэвид Коффман, доктор медицинских наук , научный сотрудник отделения хирургии, отделения травматологии и интенсивной терапии, Медицинский факультет Йельского университета

Раскрытие информации: Нечего раскрывать.

Марсель Э. Конрад, доктор медицины Заслуженный профессор медицины (на пенсии), Медицинский колледж Университета Южной Алабамы

Марсель Э. Конрад, доктор медицинских наук, является членом следующих медицинских обществ: Альфа-Омега-Альфа, Американская ассоциация содействия развитию науки, Американская ассоциация банков крови, Американское химическое общество, Американский колледж врачей, Американское физиологическое общество, Американское общество клинических исследований. Исследование, Американское общество гематологов, Ассоциация американских врачей, Ассоциация военных хирургов США, Международное общество гематологов, Общество экспериментальной биологии и медицины и Юго-западная онкологическая группа

Раскрытие информации: Отсутствие финансовых интересов Нет Нет

Эммануэль Н. Дессиприс, доктор медицины Профессор медицины Медицинского колледжа Вирджинии; Начальник медицинской службы, Медицинский центр Министерства по делам ветеранов Хантера Холмса Макгуайра

Эммануэль Н. Дессиприс, доктор медицинских наук, является членом следующих медицинских обществ: Американской ассоциации содействия развитию науки, Американского колледжа врачей, Американского общества гематологии, Нью-Йоркской академии наук, Общества экспериментальной биологии и медицины и Южного общества Клиническое исследование

Раскрытие информации: Нечего раскрывать.

Дэвид Дж. Дрейпер, доктор медицинских наук , научный сотрудник отделения гематологии/онкологии, Университетская больница, Медицинский колледж Университета Цинциннати

Раскрытие информации: Нечего раскрывать.

Льюис Дж. Каплан, доктор медицинских наук, FACS, FCCM, FCCP Директор отделения интенсивной терапии интенсивной терапии и стажировки в области хирургической интенсивной терапии, доцент кафедры хирургии, секция травм, хирургической интенсивной терапии и неотложной хирургической помощи, Медицинский факультет Йельского университета

Льюис Дж. Каплан, доктор медицинских наук, FACS, FCCM, FCCP, является членом следующих медицинских обществ: Американская ассоциация хирургии травм, Американский колледж хирургов, Ассоциация академической хирургии, Ассоциация хирургического образования, Медицинское общество штата Коннектикут, Восточное Ассоциация хирургии травм, Международное общество травматологической анестезии и интенсивной терапии, Общество развития управления кровью, Общество реаниматологии и Общество хирургических инфекций

Раскрытие информации: Нечего раскрывать.

Франсиско Талавера, PharmD, PhD Адъюнкт-профессор, Фармацевтический колледж Медицинского центра Университета Небраски; Главный редактор Medscape Drug Reference

Раскрытие информации: Заработная плата Medscape

NORD (Национальная организация по изучению редких заболеваний)

УЧЕБНИКИ
Beers MH, Berkow R., eds. Руководство Merck, 17-е изд. Станция Уайтхаус, Нью-Джерси: исследовательские лаборатории Merck; 1999: 219-220.

Берков Р., изд. Руководство Merck – Домашнее издание.Станция Уайтхаус, Нью-Джерси: исследовательские лаборатории Merck; 1997:690-91.

Бенсон, Мэриленд. Амилоидоз. В: Scriver CR, et al., ред. Метаболические и молекулярные основы наследственных заболеваний. 7-е изд. Нью-Йорк, штат Нью-Йорк; Макгроу-Хилл Компани, Инк; 1995:4159-91.

Кэткарт ЕС. Амилоидоз. В: Kelley WN, et al., ред. Учебник ревматологии. 4-е изд. Филадельфия, Пенсильвания: WB. Компания Сондерс; 1993:1413-28.

СТАТЬИ В ЖУРНАЛЕ
Stoppini M, Bellotti V. Системный амилоидоз: уроки В2-микроглобулина.Дж. Биол. Хим. 2015; 290:9951-9958.

Gertz MA, Benson MD, Dyck PJ, et al. Диагностика, прогноз и терапия транстиретинового амилоидоза. J Am Coll Кардиол. 2015;66:2451-2466.

Mahmoud S, Palladini G, Sanchorawala V, Wechalekar A. Новые данные о лечении амилоидоза легких цепей. Гематология. 2014;99:209-221.

Фальк Р.Х., Дабрей Ю.В. Амилоидная болезнь сердца. Прогресс сердечно-сосудистых заболеваний. 2010;52:347-361.

Коменцо RL. Как я лечу амилоидоз. Blood 2009;114:3147-57

Палладини Г., Мерлини Г.Современное лечение AL-амилоидоза. Гематология 2009; 94:1044-1048.

Дембер Л. Заболевание почек, связанное с амилоидозом. Варенье. соц. Нефрол. 2006; 17:3458-3471.

Герц М.А., Лейси М.К., Диспензиери А., Хейман С.Р. Амилоидоз. Лучшая практика и исследования клинической гематологии. 2005 г.; 18(4):709-727.

Бенсон М. Наследственные амилоидозы. Передовая практика и исследования клинической ревматологии. 2003; 17: 909-927.

Парк К.И., Оуредник Дж., Оуредник В. и др. Глобальные стратегии замены генов и клеток с помощью стволовых клеток.Джин Тер. 2002;9:613-24.

Rocken C, Shakespeare A. Патология, диагностика и патогенез АА-амилоидоза. Арка Вирхова. 2002; 440:111-22.

Гринберг С.М. Церебральная амилоидная ангиопатия и сосудистая дисфункция. Цереброваскулярная дис. 2002;13 (прил. 2):42-47.

Gertz MA, Lacy MQ, Dispenzieri A. Амилоидоз легкой цепи иммуноглобулина и почки. почки инт. 2002;61:1-9.

Jaikaran ET, Clark A. Островковый амилоид и диабет 2 типа; от неправильной молекулярной укладки до патофизиологии островков.Биохим Биофиз Акта. 2001;1537:179-203.

Санчоравала В., Райт Д.Г., Селдин Д.К. и др. Обзор использования высоких доз мелфалана с аутологичной трансплантацией стволовых клеток для лечения AL-амилоидоза. Пересадка костного мозга. 2001; 28:637-42.

Скиннер М., Санчоравала В., Селдин Д.К., Дембер Л.М., Фальк Р.Х., Берк Дж.Л., Андерсон Дж.Дж., О’Хара С.Дж., Финн К.Т., Либби К.А., Висман Дж., Куиллен К., Свон Н., Райт Д.Г.: Высокая доза мелфалана и трансплантация аутологичных стволовых клеток у пациентов с AL-амилоидозом: 8-летнее исследование.Annals Int Med.2004;140:85-93.

Seldin DC, Anderson JJ, Sanchorawala V, Malek K, Wright DG, Quillen K, Finn KT, Berk JL, Dember LM, Falk RH, Skinner M: Улучшение качества жизни пациентов с AL-амилоидозом, получавших высокие дозы мелфалана и аутологичной трансплантации стволовых клеток. Кровь.2004;104:1888-1893.

Хан М.Ф., Фальк Р.Х. Амилоидоз. Postgrad Med J. 2001;77:686-93.

Добсон СМ. Сворачивание белков и его связь с болезнями человека. Симпозиумы Biochem Soc. 2001;68:1-26.

Adams D. Наследственные и приобретенные амилоидные невропатии. Дж Нейрол. 2001; 248:647-57.

Сарайва М.Ж. Транстиретиновый амилоидоз: история слабых взаимодействий. ФЭБС лат. 2001;498:201-203.

Флёге Дж., Шаффер Дж., Кох К.М. Сцинтиграфические методы выявления бета2-микроглобулинассоциированного амилоидоза (Abeta2-микроглобулиновый амилоидоз). Трансплантация нефролового циферблата. 2001;16 (доп.4):12-16.

Walker LC, LeVine H. Церебральные протеопатии: нейродегенеративные нарушения конформации и сборки белков.Мол Нейробиол. 2000;21:83-95.

Эль-Шанти HE. Семейная средиземноморская лихорадка. Saudi Med J. 2001; 22:104-9.

Cunnane G. Предшественники амилоида и амилоидоз при воспалительном артрите. Курр Опин Ревматол. 2001;13:67-73.

Plante-Bordeneuve V, Said G. Знакомая амилоидная полиневропатия, связанная с транстиретином. Карр Опин Нейрол. 2000;13:569-73.

Герц М.А., Коменцо Р., Фальк Р.Х. и др. Определение поражения органов и ответа на лечение при амилоидозе легких цепей иммуноглобулина (AL): консенсусное мнение 10-го Международного симпозиума по амилоиду и амилоидозу.Являюсь. Дж. Гематол. 2005;79:319-328.

ИНТЕРНЕТ
ОСВЕДОМЛЕННОСТЬ ОБ АМИЛОИДОЗЕ: Для пациентов и их сети поддержки, включая врачей, медсестер и студентов-медиков. Группы поддержки амилоидоза. Октябрь 2013 г. http://www.amyloidosissupport.com/AmyloidAware_Booklet.pdf По состоянию на 24 октября 2018 г.

Basu A, Bogdan CA, Matute R. Бета-2m-амилоидоз, связанный с диализом. Медскейп. Обновлено: 3 февраля 2017 г. Доступно по адресу: http://emedicine.medscape.com/article/246542-overview По состоянию на 24 октября 2018 г.

Что такое амилоидоз? Программа лечения и исследования амилоида Бостонского университета. http://www.bu.edu/amyloid/about/what/ По состоянию на 24 октября 2018 г.

Амилоидоз. Фонд Мэйо по медицинскому образованию и исследованиям. 07 июля 2017 г. http://www.mayoclinic.com/health/amyloidosis/DS00431 По состоянию на 24 октября 2018 г.

Исследование, проведенное на быстрой мышиной модели АА-амилоидоза

Abstract

АА амилоидоз представляет собой системное заболевание, которое развивается вторично по отношению к хроническим воспалительным заболеваниям. Макрофаги часто обнаруживаются вблизи отложений амилоида и считаются играющими роль как в образовании, так и в деградации амилоидных фибрилл.В селезенке находятся как минимум три типа макрофагов: макрофаги красной пульпы (RPM), макрофаги маргинальной зоны (MZM), металлофильные макрофаги маргинальной зоны (MMZM). MMZM и MZM расположены в маргинальной зоне и экспрессируют уникальный набор рецепторов-мусорщиков, которые участвуют в поглощении частиц крови. Мышиная модель амилоида АА, которая напоминает человеческую форму заболевания, использовалась для изучения эффектов амилоида на различные популяции макрофагов. Амилоид индуцировали внутривенной инъекцией фактора, усиливающего амилоид, и подкожными инъекциями нитрата серебра, а макрофаги идентифицировали с помощью специфических антител.Мы показываем, что MZM очень чувствительны к амилоиду и постепенно уменьшаются в количестве с увеличением амилоидной нагрузки. Общая площадь MMZM не затрагивается амилоидом, но клетки активируются и мигрируют в белую пульпу. В группе мышей макрофаги селезенки были истощены внутривенной инъекцией липосом, наполненных клодронатом. Последующие инъекции AEF и нитрата серебра показали устойчивое развитие амилоида. RPM, составляющие большинство макрофагов селезенки, оказываются нечувствительными к амилоиду и не участвуют в образовании амилоида.

Образец цитирования: Лундмарк К., Вахдат Шариатпанахи А., Вестермарк Г.Т. (2013) Истощение макрофагов селезенки задерживает развитие амилоида AA: исследование, проведенное на быстрой мышиной модели амилоидоза AA. ПЛОС ОДИН 8(11): е79104. https://doi.org/10.1371/journal.pone.0079104

Редактор: Колетт Канеллопулос-Ланжевен, Медицинская школа Ксавье Биша, INSERM-CNRS – Université Paris Diderot, France

Поступила в редакцию: 1 3 мая 2000 г. ; Принято: 18 сентября 2013 г.; Опубликовано: 13 ноября 2013 г.

Авторское право: © 2013 Lundmark et al.Это статья с открытым доступом, распространяемая в соответствии с лицензией Creative Commons Attribution License, которая разрешает неограниченное использование, распространение и воспроизведение на любом носителе при условии указания оригинального автора и источника.

Финансирование: Финансирование предоставлено Шведским исследовательским советом (GTW5343), Советом графства Эстергётланд, исследовательским фондом Магнуса Бергваллса, исследовательским фондом Ингрид Свенссон, исследовательским фондом Bröderna Karlssons и исследовательским фондом Хильдур Петтерсонс.Спонсоры не участвовали в разработке исследования, сборе и анализе данных, принятии решения о публикации или подготовке рукописи.

Конкурирующие интересы: Авторы заявили об отсутствии конкурирующих интересов.

Введение

АА амилоидоз — системное заболевание, развивающееся у больных с хроническими инфекционно-воспалительными заболеваниями, например ревматоидный артрит, семейная средиземноморская лихорадка и туберкулез [1] с почечной недостаточностью в качестве основного клинического исхода.Основной амилоидной составляющей при этой форме амилоидной болезни являются N-концевые фрагменты [2], [3] острофазового реагента, сывороточного амилоида А (САА) [4]. SAA продуцируется гепатоцитами в ответ на воспалительные цитокины (TNF-α, IL-1 и IL-6) и циркулирует в плазме, связанной с липопротеинами высокой плотности (ЛПВП) [5], [6]. Макрофаги часто обнаруживаются в непосредственной близости от амилоида и считаются важными как для образования, так и для деградации агрегатов. Эти процессы, по-видимому, не зависят от амилоидного белка.Совместная локализация SAA/AA в лизосомах моноцитоидных клеток у мышей с реактивным амилоидозом указывает на роль лизосом в образовании амилоида [7], [8] и Исследования in vitro показали, что SAA, эндоцитированный макрофагами, накапливается во внутриклеточных везикулах. и превращаются в амилоид [9]. Гигантские клетки, образующиеся в AL-амилоиде, часто содержат амилоидные фибриллы [10], а клетки Купфера фагоцитируют AA-амилоид во время клиренса амилоида [7], [11], [12]. Инъекции макрофагального колониестимулирующего фактора в головной мозг трансгенных мышей, у которых развилась болезнь Альцгеймера, приводили к увеличению количества микроглии и уменьшению количества отложений Aβ [13].

Амилоид состоит из белковых фибрилл, образование которых происходит посредством многоступенчатого процесса. Начальным этапом является агрегация мономеров в очаги, которые действуют как отправная точка для роста фибрилл. Индивидуальная фибрилла растет, когда к свободным концам присоединяются мономеры, а когда длинные фибриллы обрываются, это приводит к увеличению числа свободных концов [14], [15], [16]. Формирование очага, вероятно, является этапом, определяющим время, и процесс образования амилоида может быть ускорен с недель до дней путем посева небольшого количества предварительно сформированных фибрилл, часто называемого фактором усиления амилоида (AEF).Это хорошо работает для экспериментальной индукции АА-амилоидоза у мышей, хомяков и норок [17], [18], [19]. У мышей отложение амилоида начинается в селезенке, затем в печени, после чего происходит общее распределение. В селезенке ранние отложения можно обнаружить в маргинальных зонах уже через 48 ч после индукции [7], [20], [21].

Селезенка

имеет уникальную архитектуру и сочетает в себе функцию фильтрации крови, врожденного и адаптивного иммунитета [22]. Белая пульпа (БП) содержит Т-лимфоциты, локализованные в периартериальных лимфоидных листках, и В-лимфоциты, созревающие в герминативном центре.WP окружен маргинальной зоной (МЗ), образованной различными типами специализированных клеток, среди которых макрофаги маргинальной зоны (МЗМ) и металлофильные макрофаги маргинальной зоны (ММЗМ) [23]. MZM локализованы во внешней части маргинальной зоны и характеризуются экспрессией лектина С-типа SIGNR1 и рецептора-скавенджера I типа MARCO [24]. MMZM локализованы во внутренней части маргинальной зоны в непосредственном контакте с WP и экспрессируют молекулу адгезии SIGLEC1 [25]. Две популяции макрофагов разделены краевым синусом.Маргинальные зоны окружены красной пульпой (RP), содержащей макрофаги красной пульпы (RPM). RPM локализованы в тяжах красной пульпы и экспрессируют F4/80 [26]. Ни MZM, ни MMZM не выражают F4/80.

Текущие исследования были предприняты для изучения значения различных популяций селезеночных макрофагов в амилоидогенезе АА. Результаты показывают, что MZM очень чувствительны к амилоиду и постепенно снижаются с увеличением амилоидной нагрузки. MMZM остаются незатронутыми амилоидом. Истощение макрофагов липосомами, содержащими клодронат (CL), приводит к значительному снижению образования амилоида.Случайным открытием является то, что CL оказывает эффект AEF у воспаленных мышей.

Результаты и обсуждение

Индукция амилоида

Насколько нам известно, это первое исследование образования амилоида в селезенке, которое указывает на значение различных макрофагов селезенки. Эффекты амилоида AA на макрофаги селезенки изучали с использованием модели быстрых мышей, как показано на рисунке 1.I. Образцы селезенки, печени и сыворотки собирали и хранили при -80°C до использования. Замороженные срезы (10 мкм) селезенки окрашивали на амилоид щелочным конго красным.Амилоидную нагрузку оценивали в соответствии со следующей схемой, адаптированной из Lundmark et al. [27]: 0 — нет амилоида; 1+ — минимальные скопления амилоида в одиночных краевых зонах; 2+ — небольшие отложения амилоида, занимающие часть маргинальной зоны в нескольких лимфоидных фолликулах; 3+ — умеренные отложения амилоида вокруг большинства или всех фолликулов; 4+, обширные отложения амилоида вокруг большинства или всех фолликулов с непрерывными отложениями в красной пульпе.

Рис. 1. На рисунке показаны группы животных, схемы лечения и сроки, использованные в двух исследованиях.

В разделе I описано «Влияние амилоида на макрофаги селезенки», а в разделе II описано «Влияние истощения макрофагов на образование амилоида». Заглавная буква указывает экспериментальную группу, стрелки указывают моменты времени для инъекций, Sac указывают моменты времени, когда мышей умерщвляли, а n указывает количество мышей.

https://doi.org/10.1371/journal.pone.0079104.g001

Мыши в контрольных группах не получали лечения (группа А, n = 12) или получали 1 или 3 инъекции AgNO 3 и умерщвлялись через 4 и 16 дней соответственно (группы B, n = 11 и C, n = 8).Амилоид индуцировали у 40 самок мышей NMRI с помощью инъекций AEF и AgNO 3 , и животных умерщвляли в разные моменты времени. На протяжении многих лет мы наблюдали изменения в индукции амилоида и приписывали это улучшению здоровья животных и ухода за ними. Поэтому мы начали определять начальный момент времени для образования амилоида, и мышей убивали через 1 день (группа D, n = 4) и 2 дня (группа E, n = 5) после индукции. В срезах селезенки 4 мышей в группе D амилоид не был обнаружен, в то время как амилоид был обнаружен у 1 из 5 мышей в группе E (таблица 1).У мышей, убитых через 4 дня после индукции, амилоид был обнаружен в краевых зонах у 17 из 18 мышей (группа F). Амилоидная нагрузка варьировала и оценивалась от 1+ до 4+ (таблица 1). Все мыши, убитые через 16 дней после индукции (группа G), имели амилоид, а обширные отложения (4+) были обнаружены у 11 из 13 мышей (таблица 1). Амилоид был также обнаружен в печени у 11 из 17 мышей с амилоидом селезенки из группы F и у всех мышей из группы G.

Мы пришли к выводу, что при данных обстоятельствах амилоидогенез начинается почти за 2 дня до того, как амилоид может быть продемонстрирован в кросс-поляризованном свете после окрашивания конго красным.Поскольку только животные с отложениями в селезенке обнаруживали амилоид печени (группы F и G), маргинальная зона селезенки, по-видимому, является начальным местом отложения амилоида. Наши результаты согласуются с результатами более ранних исследований с использованием этой быстрой мышиной модели АА-амилоидоза [17].

Отложение амилоида сопровождается изменениями макрофагов

об/мин.

Мы изучали эффекты амилоида на RPM, MMZM и MZM с использованием специфических антител против F4/80, MOMA1 или ER-TR9 соответственно (см. материалы и методы) в сочетании с конго красным.Селезенки, полученные от необработанных мышей (группа А), использовали в качестве эталона нормального содержания и распределения макрофагов. Маркировка RPM F4/80 выявила равномерное распределение этих клеток в красной пульпе у необработанных мышей (рис. 2 RPM-A). Области, отмеченные F4/80, измеряли на срезах не менее 3 случайно выбранных мышей из групп A–G. В группах B–G площадь RPM увеличивалась на 22–35% (табл. 1). Срезы животных в группах A, B и D окрашивали маркером пролиферации Ki67, и индекс мечения Ki67 ( Ki67 LI) рассчитывали как процент Ki67-положительных клеток от общего числа RPM/2000 мкм 2 . Ki67 LI составил 76±19, 96±3 и 94±8 в группах A, B и D соответственно. Это означает, что наблюдаемое увеличение зависит от пролиферации и, скорее всего, является реакцией острой фазы, вызванной AgNO 3 и не зависящей от образования амилоида. В начале отложения амилоида наблюдалось расстояние между амилоидом в маргинальной зоне и RPM (рис. 2 RPM-F). Когда амилоидная масса увеличилась, был замечен прямой контакт с RPM (рис. 2 RPM-G). Скопление RPM в маргинальных зонах с обширными отложениями амилоида может быть результатом расширения маргинальной зоны или, что более интересно, миграции RPM в сторону амилоида.Роль RPM в амилоидозе сложна, и F4/80-позитивные макрофаги, как было показано, превращают SAA в AA-амилоид in vitro [28], а также расщепляют амилоид [7], [11], [12], [29]. Однако наблюдаемое расстояние между RPM и амилоидом в маргинальной зоне на ранней стадии отложения амилоида свидетельствует против RPM как клеток-мишеней для амилоидогенеза в этой модели AA-амилоида. Кроме того, минимальные внутриклеточные отложения амилоида можно было обнаружить в нескольких RPM на поздних стадиях отложения амилоида (группа G), и в этом контексте они, скорее всего, были результатом фагоцитоза и свидетельствовали о деградации (рис. 3, RPM).

Рисунок 2. Отложение амилоида сопровождалось изменениями селезеночных макрофагов.

Группа A необработанный контроль, группа F получала AEF и AgNO 3 в день 0 и была умерщвлена ​​в день 4, группа G получала AEF и AgNO 3 в день 0, дополнительные инъекции AgNO 3 в день 7 и 14, и был умерщвлен на 16-й день. На левой панели двойная стрелка указывает на расстояние между RPM и амилоидом в группе F, которое не сохраняется в группе G. На средней панели изображены MMZM, смешанные с амилоидом в группах F (белая стрелка) и G.На правой панели стрелка указывает на начальную потерю MZM в группе F и полную потерю MZM в маргинальных зонах с обширными отложениями амилоида в группе G. Заглавная буква относится к экспериментальной группе, красный амилоид, зеленый цвет макрофагов, * белый цвет. область пульпы и полоса = 100 мкм.

https://doi.org/10.1371/journal.pone.0079104.g002

Рисунок 3. Внутриклеточный амилоид был обнаружен в RPM, MMZM и MZM.

Замороженные срезы из группы G, обработанные AEF и AgNO 3 в 0-й день и дополнительные инъекции AgNO 3 в 7-й и 14-й дни, умерщвленные на 16-й день были иммуномечены F4/80 для обнаружения RPM, с MOMA-1 для обнаружения MMZM или с ERTR-9 для обнаружения MZM.Амилоид был обнаружен путем инкубации в растворе конго красного B. Амилоид показан красным, макрофаги – зеленым, а белая пунктирная линия окружает клетки, содержащие амилоид. Бар = 20 мкм.

https://doi.org/10.1371/journal.pone.0079104.g003

ММЗМ и МЗМ.

MMZM и MZM показали сильную цитоплазматическую экспрессию своих специфических маркеров MOMA-1 и ER-TR9 соответственно. В селезенке мышей, не получавших лечения (группа А), маргинальная зона выглядела как непрерывная кольцеобразная структура с ММЗМ во внутреннем крае, прилегающем к белой пульпе, и МЗМ во внешнем крае, прилегающем к красной пульпе (рис. 2, ММЗМ-А). и МЗМ-А).

На общую площадь меченых MMZM не влияли AgNO 3 или отложения амилоида (табл. 1). В маргинальных зонах с амилоидом MMZM оказались частично перемешанными с отложениями (Рис. 2, MMZM-F и MMZM-G), а незначительные количества амилоида можно было обнаружить в нескольких клетках (Рис. 3, MMZM).

Интересно, что мы наблюдали миграцию MMZM из маргинальной зоны в белую пульпу в селезенке, восстановленной через 16 дней после индукции амилоида (рис. 2, MMZM-G). АА-амилоидоз у мышей связан с появлением аутоантител против белка АА.Возможно, мигрирующие MMZM инициируют образование таких антител [12]. Эта миграция не наблюдалась в маргинальных зонах без амилоида, что указывает на то, что это реакция на амилоид. Аналогичное явление было описано после инъекции Listeria monocytogenes , и предполагалось, что это активирует хемокиновый рецептор CXCR5, ответственный за привлечение В-клеток белой пульпы [30].

Площадь

МЗМ увеличивалась в ответ на воспалительную стимуляцию AgNO 3 на 7–9% в группах Б и С (табл. 2).Введение AgNO 3 и АЭФ в группах D, E и F приводит к дальнейшему увеличению площади МЗМ до 66% (группа D, табл. 2). Количественное определение клеточных ядер в зонах МЗМ показало, что также имело место увеличение количества клеток на 4, 35, 18 и 15% в группах Б, Г, Е и Е соответственно. Это предполагает заметную пролиферацию клеток, особенно в ответ на AEF. Доверие к MZM резко изменилось, когда амилоид начал формироваться, а в маргинальных зонах с амилоидом увеличивающаяся нагрузка амилоида привела к прогрессивному снижению MZM (группы E-G.В группе G 5 из 11 мышей с показателем амилоида 4+ были полностью лишены MZM (таблица 2, рисунок 2 MZM-G), в то время как остальные 6 животных с показателем 4+ содержали лишь небольшое количество MZM, все с обильным внутриклеточным амилоидом (рисунок 3). МЗМ).

Поскольку отложение амилоида привело к почти полной эрадикации MZM, была проведена дополнительная иммунная маркировка антителами против MARCO на срезах из групп A, F и G. Иммунный паттерн, полученный для MARCO, был идентичен таковому, показанному для ER-TR9, и подтверждает, что амилоид осаждение приводит к потере MZM (рис. 4).

Рисунок 4. Отложение амилоида сопровождалось истощением МЗМ.

Срезы селезенки из необработанной контрольной группы А, группа F получила AEF и AgNO 3 в 0-й день и была умерщвлена ​​в 4-й день, группа G получила AEF и AgNO 3 в 0-й день, дополнительные инъекции AgNO 3 в 7-й день и 14, и умерщвляли на 16-й день, подвергали иммуномечению антителами против MARCO. Левая панель показывает содержание MZM в селезенке из группы A. Средняя панель показывает снижение MZM (группа F), а правая панель показывает почти полную потерю MZM в маргинальных зонах с обширными отложениями амилоида (группа G).Заглавная буква относится к экспериментальной группе, красный амилоид, зеленый MZM, * указывает на область белой пульпы, а полоса  = 100 мкм.

https://doi.org/10.1371/journal.pone.0079104.g004

MMZM и MZM обладают большой фагоцитарной способностью, но последние более подвержены воздействию кровяных частиц из-за их положения в маргинальной зоне [31], [ 32]. Поэтому возможно, что наблюдаемое начальное увеличение MZM частично отражает реакцию на инъецированные амилоидные фибриллы, в то время как размножение амилоида приводит к гибели клеток.Более ранние исследования in vitro показали, что начальное образование амилоида происходит в макрофагах и в ассоциации с лизосомами [33]. Этот вывод может согласовываться с настоящим исследованием, в котором как MMZM, так и MZM содержали внутриклеточный амилоид. Однако неизвестно, зависит ли истощение MZM от внутри- или внеклеточного амилоида, но присутствие внутриклеточного амилоида в оставшихся MZM подтверждает внутриклеточный путь цитотоксичности.

Истощение макрофагов селезенки клодронатом

Многослойные клодронатсодержащие липосомы (КЛ) были приготовлены по методу van Rooijen [34].Клодронат — бисфосфонатный препарат, активирующий апоптоз [35]. Когда клодронат, заключенный в липосомы, вводится внутривенно, он будет фагоцитироваться макрофагами, и эта стратегия часто используется для специфического истощения макрофагов селезенки и печени. Одной внутривенной инъекции 0,2 мл КЛ достаточно для элиминации всех макрофагов селезенки в течение 24 часов [36]. КЛ диаметром 0,8–10 мкм вводили внутривенно группе из 69 мышей (день −2) (рис. 1.II). Мыши были разделены на 8 подгрупп (H, J, K, L, M, N, O). и П).Мышей в группах H (n = 3) и J (n = 10) не подвергали никакому дополнительному воздействию и забивали на 0-й и 4-й день соответственно. Мыши в группах K (n = 15) и N (n = 6) получали внутривенную инъекцию 0,1 мл AEF в 0-й день и были умерщвлены на 4-й и 16-й день соответственно. Мыши в группах L (n = 7) и O (n = 7) получали подкожно 0,2 мл 1% AgNO 3 день 0 , , а мыши в группе O получали дополнительные инъекции 0,1 мл 1% AgNO 3 на 7 и 14 день, а животных забивали на 4 и 16 день соответственно.Мыши в группе M (n = 17) и P (n = 4) получили внутривенно 0,1 мл AEF одновременно с подкожной инъекцией 0,2 мл 1% AgNO 3 , а мыши в группе P получили дополнительные инъекции 0,1 мл 1 % AgNO 3 на 7-й и 14-й день, а животных забивали на 4-й и 16-й день соответственно.

Результат истощения макрофагов определяли после иммуномечения (табл. 3 и 4).

об/мин.

Внутривенная инъекция 0,2 мл CL привела к полному истощению RPM у мышей, убитых через 2 дня после инъекции (группа H, таблица 3, рисунок 5H).РПМ вновь появлялись уже через 6 дней после введения КЛ, занимая от 36 до 54% ​​исходной площади (группы J, K, L, M, табл. 3, рис. 5J–M). У мышей, умерщвленных через 18 дней после лечения КЛ, RPM восстановились в группах N, O и P (табл. 3, рис. 5N–P). Повторное появление RPM не зависело от дополнительных инъекций AEF, AgNO 3 или AEF и AgNO 3 . после лечения КЛ

Рисунок 5. RPM были частично восстановлены 4(J–M, и их присутствие не влияло на развитие амилоида.

Группа A, необработанный контроль, группы H и J получали CL день -2 и были умерщвлены в день 0 и день 4 соответственно. Группы K и N получали CL день -2 и AEF день 0, и их умерщвляли на 4 день и 16 день соответственно. Группы L и O получали CL день -2 и AgNO 3 день 0, группа O получала дополнительные инъекции AgNO 3 день 7 и 14 и была умерщвлена ​​на день 4 и день 16 соответственно. Группы M и P получали CL день -2 и AgNO 3 и AEF день 0, мыши из группы P получали дополнительные инъекции AgNO 3 на 7 и 14 день и были умерщвлены на 4 и 16 день соответственно.Заглавная буква относится к экспериментальной группе, амилоид – красным, RPM – зеленым, а полоса   =   100 мкм.

https://doi.org/10.1371/journal.pone.0079104.g005

ММЗМ и МЗМ.

Две мыши, умерщвленные через 6 дней после инъекции CL (группа L), были исключены из исследования, поскольку у них было обнаружено нормальное количество MMZM, но не было MZM. Это показывает, что ММЗМ частично защищены своей локализацией во внутренней области краевых зон и могут сохраняться при воздействии недостаточной дозы КЛ.

одиночных MMZM оставались в нескольких маргинальных зонах у 2 из 3 мышей, исследованных через 2 дня после инъекции CL (группа H, таблица 4, рисунок 6H). У 47 мышей, умерщвленных через 6 дней после инъекции CL, MMZM были уничтожены у 27 и не превышали 2,0% исходной площади у оставшихся 20 мышей (группы J, K, L, M, таблица 4, рисунок 6 J-M. У 17 мышей, умерщвленных через 18 дней после лечения CL, MMZM снова появились и заняли почти 72–82% исходной площади (группы N, O и P, таблица 4, рисунок 6N–P.

).

Рис. 6.Истощение MMZM привело к задержке образования амилоида, и MMZM были восстановлены на 16-й день, момент времени, когда был продемонстрирован амилоид (группа P).

Амилоид также появился у всех мышей из группы О, которым после истощения макрофагов вводили AgNO3 на 0, 7 и 14 день и умерщвляли на 16 день. Это лечение обычно не приводит к отложению амилоида. Внутриклеточный амилоид, совмещенный с MMZM (желтый), виден в маргинальных зонах мышей из групп O и P. Группа A, необработанный контроль, группы H и J получали CL день -2 и были умерщвлены в день 0 и день 4 соответственно.Группы K и N получали CL день -2 и AEF день 0, и их умерщвляли на 4 день и 16 день соответственно. Группы L и O получали CL день -2 и AgNO 3 день 0, группа O получала дополнительные инъекции AgNO 3 день 7 и 14 и была умерщвлена ​​на день 4 и день 16 соответственно. Группы M и P получали CL день -2 и AgNO 3 и AEF день 0, мыши из группы P получали дополнительные инъекции AgNO 3 на 7 и 14 день и были умерщвлены на 4 и 16 день соответственно.Заглавная буква относится к экспериментальной группе, красный амилоид, зеленый MMZM, * указывает на область белой пульпы, а полоса  = 100 мкм.

https://doi.org/10.1371/journal.pone.0079104.g006

МЗМ были почти полностью истощены из внешней области краевых зон после закачки КЛ. Одиночные МЗМ были идентифицированы в нескольких маргинальных зонах у 8 из 67 мышей, но эта площадь не достигала 0,1% от площади, определенной у необработанных контрольных мышей (группа H-P, рис. 7H-P.

).

Рис. 7.Отмена MZM не влияла на развитие амилоида, и MZM все еще отсутствовали на 16-й день, когда амилоид был продемонстрирован в группах O и P.

Группа A необработанный контроль, группы H и J получали CL день -2 и были умерщвлены в день 0 и день 4. , соответственно. Группы K и N получали CL день -2 и AEF день 0, и их умерщвляли на 4 день и 16 день соответственно. Группы L и O получали CL день -2 и AgNO 3 день 0, группа O получала дополнительные инъекции AgNO 3 день 7 и 14 и была умерщвлена ​​на день 4 и день 16 соответственно.Группы M и P получали CL день -2 и AgNO 3 и AEF день 0, мыши из группы P получали дополнительные инъекции AgNO 3 на 7 и 14 день и были умерщвлены на 4 и 16 день соответственно. Заглавная буква относится к экспериментальной группе, красный амилоид, зеленый MZM, * указывает на область белой пульпы, а полоса  = 100 мкм.

https://doi.org/10.1371/journal.pone.0079104.g007

Истощение макрофагов снижает частоту и нагрузку амилоида

Инъекция AEF+AgNO3 мышам, умерщвленным через 4 дня, привела к развитию амилоида у 9 из 17 мышей с истощением макрофагов по сравнению с 17 из 18 мышей с макрофагами (группа M, таблица 3 и группа F, таблица 1) ( Р = 0.00006). Амилоид не развивался у истощенных по макрофагам мышей из других групп (группы J, K и L, таблица 3), умерщвленных в этот момент времени. У всех мышей, лишенных макрофагов и умерщвленных через 16 дней после индукции амилоида, развился амилоид с баллами 2–4+ (группа P, таблица 3, рис. 5P, 6P и 7P). Это меньше по сравнению с мышами в группе G, все с макрофагами и где почти у всех мышей развились отложения 4+. Амилоид печени был обнаружен у 6 из 9 мышей в группе М и у всех мышей из групп О и П. У мышей без селезеночного амилоида отложений в печени не наблюдалось.

Наши результаты показывают, что MZM не требуются для образования амилоида, но их истощение приводит к задержке образования амилоида и снижению заболеваемости. Эти макрофаги экспрессируют большое количество поверхностных молекул, таких как рецептор-мусорщик A (SR-A), коллагеновый рецептор макрофагов (MARCO) и SIGN-связанный (SIGNR1), обладающий способностью распознавать и фагоцитировать антигены частиц крови [37]. Поэтому возможно, что описанная выше активация MZM с помощью AEF является результатом специфического взаимодействия с рецептором одного из этих классов.AEF состоит из коротких амилоидных фибрилл [38], и если они фагоцитируются, но не деградируют, они могут действовать как очаги внутриклеточного роста амилоида. Последующее появление амилоидных масс может привести к гибели клеток MZM. После истощения макрофагов в маргинальных зонах все еще происходило замедленное образование амилоида. Следовательно, возможно, что фибриллы AEF захватываются оставшимися остатками MZM и MMZM или ретикулярной сетью и все еще могут функционировать как семена для роста амилоида, но теперь с гораздо меньшей эффективностью.

У 2 мышей, которым вводили недостаточную дозу CL, MMZM сохранялись, в то время как RPM и MZM уничтожались. Это подтверждает, что кровоток и локализация в пазухах дают MMZM первоначальную защиту от переносимых кровью частиц. Кроме того, у 20 мышей из 47, умерщвленных через 6 дней после введения КЛ, 1–2% ММЗМ оставались в краевых зонах, а в группе М ранние отложения амилоида обнаруживались только у мышей с ММЗМ (табл. 4). Амилоидная масса увеличивалась параллельно с повторным появлением MMZM, и в группах О и Р часто демонстрировался внутриклеточный амилоид (рис. 6О и Р), в отличие от группы (G), в которой можно было обнаружить только минимальные отложения в нескольких клетках.Это указывает на роль MMZM в образовании амилоида в отсутствие MZM. Однако этот механизм должен отличаться от механизма, используемого MZM, поскольку MMZM выживают при образовании амилоида. Можно предположить, что AEF связывается с рецепторами на поверхности макрофагов и что AEF затем связывается с SAA-белком, что приводит к росту фибрилл в основном внеклеточно, как предполагается при AL-амилоидозе [39], или что процесс образования амилоида является внутриклеточным. В обоих вариантах вполне вероятно, что фибриллы служат очагом дальнейшего роста амилоида.

Измерения SAA

Концентрация

SAA у нелеченных мышей была определена с помощью ELISA: 12,5 мкг/мл (группа A), после инъекции AgNO3 от 125 до 1250 мкг/мл (группа B) и после инъекции AgNO3 и AEF от 250 до 1250 мкг/мл (группа F). . Инъекция CL per se вызвала небольшое увеличение концентрации SAA (от 25 до 125 в группах H, J и K), а добавление AgNO 3 (группа L) или AgNO 3 и инъекции AEF (группа M) привело к дальнейшему увеличению (рис. 8).У мышей, которым вводили AgNO 3 и АЭФ (группа F), количество амилоида увеличивалось с увеличением концентрации SAA, в то время как у мышей из группы М амилоид можно было обнаружить при более низких концентрациях SAA (рис. 8). Элиминация макрофагов F4/80 с помощью КЛ приводит к низким концентрациям ФНО-альфа и ИЛ-6, которые важны для повышения SAA в острой фазе ответа. Появление амилоида у мышей с истощением макрофагов и нарушением острофазового ответа указывает на то, что образование амилоида не зависит от высокой концентрации SAA.

Рис. 8. Определены концентрации SAA в сыворотке крови.

Группа А необработанные контроли. Группе B вводили AgNO 3 в день 0 и умерщвляли в день 4, группе F вводили AEF и AgNO 3 в день 0 и умерщвляли в день 4, группам H и J вводили CL в день -2 и умерщвляли в день 0 и 4, соответственно, группе K вводили CL, день -2 и AEF, день 0, и умерщвляли на 4-й день. Группе L вводили CL, день -2 и AgNO 3 , день 0, и умерщвляли на 4-й день.Группе М вводили CL в день -2 и AgNO 3 и AEF в день 0 и умерщвляли на 4 день. Пустые столбцы обозначают мышей без амилоида; мыши с амилоидом степени +1–4+ показаны красным цветом с различной текстурой.

https://doi.org/10.1371/journal.pone.0079104.g008

Амилоидогенные эффекты липосом

Неожиданным открытием было то, что введение CL per se ускоряло образование амилоида у всех воспаленных мышей, эти отложения оценивались как 2+ (группа О, таблица 3, рис. 5, 6 и 7) и у 1 из 6 невоспаленных мышей. мышам вводили AEF через два дня после истощения макрофагов (группа N, таблица 3).Это замечательное открытие, поскольку не ожидалось появления амилоида у мышей, получавших три инъекции AgNO3 и умерщвленных на 16-й день, как показано в группе С (таблица 1). В исследовании Mambule et al. было показано, что полисахарид, не содержащий сульфатов (PEG), может действовать как AEF [40]. Возможно, что ХЛ так же, как и ПЭГ, накапливается в лизосомах и задерживает деградацию САА, чего может быть достаточно для образования амилоида.

Выводы

В совокупности наши результаты показывают, что образование амилоида или амилоида чрезвычайно токсично для MZM, а в отсутствие этих макрофагов образование амилоида задерживается.Цитотоксический эффект может возникать после перфорации или деформации мембранных структур [41], [42], но нам не удалось определить, зависит ли прогрессирующее снижение МЗМ от внутри- или внеклеточного процесса. Возможно, что AEF связывается со специфическими рецепторами, присутствующими на клеточной поверхности, и функционирует как ядро ​​для SAA, протекающего через селезенку, но также возможно, что AEF, фагоцитируемый MZM, остается внутриклеточным и засеивает амилоид в этом месте. Обнаружение больших внутриклеточных отложений амилоида в MZM подтверждает внутриклеточные механизмы образования амилоида и цитотоксичности.

В отличие от MZM, MMZM нечувствительны к амилоиду. Частично это может быть связано с их расположением во внутренней области маргинальной зоны, но даже если они были окружены амилоидом, это привело только к активации без индукции какой-либо цитотоксичности. После эрадикации макрофагов MMZM восстановились до MZM, и теперь они, по-видимому, участвуют в образовании амилоида. Однако этот механизм должен отличаться от механизма, используемого MZM, поскольку MMZM не подвергались влиянию амилоида.Это открытие интерпретируется как то, что весь амилоид образуется внеклеточно или что MMZM могут секретировать амилоид, который образовался внутриклеточно.

RPM также оказываются нечувствительными к амилоиду и, по-видимому, не участвуют в образовании амилоида.

Необходимы дополнительные исследования, чтобы выяснить, как MZM и MMZM участвуют в формировании амилоида.

Материалы и методы

Животные

Беспородные самки мышей NMRI (Военно-морской медицинский исследовательский институт) в возрасте 6–9 недель были получены от B&K Universal (Сёдертелье, Швеция).Мышей содержали в обычных условиях группами по 5 особей со свободным доступом к стандартному корму (CRM, Expanded, Witham, England) и воде. Эксперименты на животных были одобрены комитетом по этике животных Линчепингского университета, Швеция.

Приготовление АЭФ

AEF получали из печени мышей, нагруженных амилоидами, путем гомогенизации в 0,15 М хлорида натрия с 0,05 М цитрата натрия и центрифугирования при 15 000×g в течение 30 минут при 4°C. Гомогенизацию осадка и центрифугирование повторяли 10 раз.После этого проводили три гомогенизации в дистиллированной воде, и третий супернатант использовали в качестве АЭФ [20].

Получение липосом, содержащих клодронат

Многослойные липосомы готовили, как описано Van Rooijen et al. [43]. Вкратце, для приготовления 4 мл липосом с клодронатом 8 мг холестерина (Sigma-Aldrich, Сент-Луис, США) растворяли в 10 мл хлороформа в круглодонной колбе и 0,86 мл исходного раствора фосфатидилхолина (Sigma-Aldrich) (100 мг). /мл хлороформа).Фазу хлороформа удаляли ротационным выпариванием в низком вакууме. Фосфолипидную пленку диспергировали в 10 мл 0,6 М клодроната (Sigma-Aldrich) в дистиллированной воде путем осторожного вращения в течение 15 минут. Суспензию выдерживали под N 2, при комнатной температуре в течение 2 часов с последующей обработкой ультразвуком в ультразвуковом аппарате с водяной баней (Elma Transsonic, Зинген, Германия) в течение 3 минут, а затем выдерживали под N 2 еще в течение 2 часов. Липосомы центрифугировали при 10 000 g в течение 15 минут в роторе Beckman с фиксированным углом 70 Ti (Beckman Instrument Inc., Фуллертон, США). Осадок промывали 3 раза в стерильном PBS и центрифугировали при 25 000 g в течение 30 минут между промывками (Beckman). Осадок ресуспендировали в 4 мл стерильного PBS и хранили под N 2 при 4°C. Липосомы докрашивали 3% раствором эозина в воде и определяли размер под световым микроскопом.

Количественное определение SAA

Концентрация

SAA у нелеченных мышей из группы А (n = 6) и исследуемых групп B (n = 6), F (n = 6), H (n = 3), J (n = 3), K (n = 3) ), L (n = 6) и M (n = 10) измеряли с помощью имеющегося в продаже набора ELISA (Tridelta Development Ltd, Мейнут, Ирландия) в соответствии с инструкциями производителя.Сыворотку мышей без воспаления (группы A, H, J и K) разводили в соотношении 1:200, а сыворотку мышей с воспалением (группы B, F, L и M) разводили в соотношении 1:2000 в буфере для разведения. Измерения проводили на многометочном счетчике Victor 1420 (PerkinElmer, Waltham, США).

Обнаружение и количественное определение амилоида

Замороженные срезы селезенки и печени (10 мкм) помещали на предметные стекла, сушили на воздухе и фиксировали в формалине на 15 минут. Срезы окрашивали щелочным конго красным [44], исследовали в кросс-поляризованном свете, и амилоидная нагрузка оценивалась двумя исследователями, не подозревавшими о проведенном лечении.Флуоресценцию Конго использовали для визуализации амилоида в иммуномеченых срезах.

Антитела

Первичными антителами, используемыми в этой работе, являются моноклональные крысиные антимышиные F4/80 (AbD Serotec, Кидлингтон, Великобритания), моноклональные крысиные антимышиные MOMA-1 (BMA Biomedicals, Август, Швейцария), биотинилированные моноклональные крысиные антимышиные ER- TR9 (BMA Biomedicals), моноклональные крысиные антимышиные MARCO (AbD Serotec), кроличьи античеловеческие Ki67 (Dako, Glostrup, Дания) и вторичные антитела Alexa 488 ослиные антикрысиные IgG, Alexa 610 козьи антикроличьи IgG и стрептавидин Конъюгат Alexa 488 (Invitrogen, Юджин, США) (табл. 5).

Обнаружение RPM, MMZM и MZM в селезенке

Срезы замороженной селезенки

(10 мкм) сушили на воздухе на предметных стеклах SuperFrost Plus (Menzel Gläser, Брауншвейг, Германия) и фиксировали в течение 20 минут в формалине при комнатной температуре (КТ) или ацетоне при -20°C (таблица 5). . Инкубацию с первичными антителами проводили во влажной камере в течение ночи при комнатной температуре. Для визуализации амилоида срезы инкубировали с раствором конго красного Б (80% этанола, насыщенного NaCl и конго красным) в течение 1 минуты.Срезы промывали водой, помещали в глицерин/TBS (1∶1), содержащий ядерный краситель DAPI (1∶500) (Invitrogen), и исследовали в конфокальном микроскопе Zeiss LSM 700 (Carl Zeiss Inc., Штутгарт, Германия). Изображения анализировали с помощью Zen 2009 light edition (Carl Zeiss) и Photoshop Elements 5.0 (Adobe Systems Inc., Сан-Хосе, США).

Определение оборотов, ММЗМ и площади МЗМ

Срезы селезенки от 3–5 случайно выбранных мышей из групп A-P были иммуномечены для F4/80, MOMA-1 или ER-TR9 для идентификации RPM, MMZM и MZM соответственно с последующим окрашиванием раствором конго красного B.Изображения красной пульпы для RPM были получены при увеличении ×63, а краевые зоны для MMZM и MZM — при увеличении ×20. Помеченную область анализировали с помощью Image J 1.42q (Национальный институт здравоохранения, Бетесда, США). RPM оценивали в 15 случайно выбранных областях (15600 мкм 2 ) у каждой мыши. MMZM оценивали по крайней мере в трех случайно выбранных маргинальных зонах у каждой мыши. Наличие амилоида влияло на MZM, и эти клетки оценивали по крайней мере в пяти краевых зонах с амилоидом и без амилоида, когда это применимо.MMZM и MZM измеряли в процентах от маргинальной зоны. Среднее значение от каждого человека используется для статистических расчетов.

Количественная оценка MZM

Для определения количества срезов MZM от 3 случайно выбранных мышей из группы A, B, D, E и 3 случайно выбранных мышей с амилоидной степенью 1+ из группы F метили антителами ER-TR9 и ядерным красителем DAPI. Было сделано по десять изображений из каждой секции при увеличении ×40. Плотность клеток определяли путем подсчета количества ядер в 2 случайно выбранных предварительно определенных областях (2000 мкм 2 ) маргинальных зон в каждом срезе.Результат представлен как % увеличения клеток для каждой группы.

Авторские взносы

Задумал и спроектировал эксперименты: КЛ АВС GTW. Проведены эксперименты: КЛ АВС GTW. Проанализированы данные: КЛ АВС GTW. Предоставленные реагенты/материалы/инструменты для анализа: KL AVS GTW. Написал газету: KL GTW.

Каталожные номера

  1. 1. Sipe JD, Benson MD, Buxbaum JN, Ikeda S, Merlini G, et al. (2012) Номенклатура белков амилоидных фибрилл: рекомендации 2012 года Комитета по номенклатуре Международного общества амилоидоза.Амилоид 19: 167–170.
  2. 2. Ein D, Kimura S, Terry WD, Magnotta J, Glenner GG (1972)Аминокислотная последовательность белка амилоидных фибрилл неизвестного происхождения. Журнал биологической химии 247: 5653–5655.
  3. 3. Вестермарк Г.Т., Вестермарк П., Слеттен К. (1987)Белок амилоидных фибрилл AA. Характеристика необычных подвидов у пациента с ревматоидным артритом. Лабораторное исследование; журнал технических методов и патологии 57: 57–64.
  4. 4.Benditt EP, Eriksen N, Hanson RH (1979)Амилоидный белок SAA представляет собой апопротеин липопротеина высокой плотности плазмы мыши. Труды Национальной академии наук Соединенных Штатов Америки 76: 4092–4096.
  5. 5. Malle E, Steinmetz A, Raynes JG (1993)Сывороточный амилоид A (SAA): белок острой фазы и аполипопротеин. Атеросклероз 102: 131–146.
  6. 6. Steel DM, Rogers JT, DeBeer MC, DeBeer FC, Whitehead AS (1993)Биосинтез острофазового сывороточного белка амилоида А человека (A-SAA) in vitro: роль накопления мРНК, поли(А) укорочения хвоста и эффективности трансляции .Биохимический журнал 291 (Pt 3): 701–707.
  7. 7. Такахаши М., Ёкота Т., Кавано Х., Гондо Т., Исихара Т. и др. (1989) Ультраструктурные доказательства внутриклеточного образования амилоидных фибрилл в макрофагах. Архив Вирхова А, Патологическая анатомия и гистопатология 415: 411–419.
  8. 8. Chronopoulos S, Laird DW, Ali-Khan Z (1994)Иммунолокализация сывороточного амилоида A и амилоида AA в лизосомах мышиных моноцитоидных клеток: конфокальные и электронно-микроскопические исследования иммунозолота.Журнал патологии 173: 361–369.
  9. 9. Magy N, Benson MD, Liepnieks JJ, Kluve-Beckerman B (2007)Клеточные события, связанные с начальной фазой амилоидогенеза AA: выводы из модели моноцитов человека. Амилоид: международный журнал экспериментальных и клинических исследований: официальный журнал Международного общества амилоидоза 14: 51–63.
  10. 10. Олсен К.Е., Слеттен К., Сандгрен О., Олссон Х., Мирволд К. и др. (1999) Какова роль гигантских клеток в AL-амилоидозе? Амилоид: международный журнал экспериментальных и клинических исследований: официальный журнал Международного общества амилоидоза 6: 89–97.
  11. 11. Бодин К., Эллмерих С., Кахан М.С., Теннент Г.А., Леш А. и соавт. (2010) Антитела к компоненту Р амилоида сыворотки человека устраняют висцеральные отложения амилоида. Природа 468: 93–97.
  12. 12. Nystrom SN, Westermark GT (2012) AA-амилоид очищается эндогенными иммунологическими механизмами. Амилоид 19: 138–145.
  13. 13. Буассонно В., Филали М., Лессар М., Релтон Дж., Вонг Г. и др. (2009)Мощное благотворное влияние колониестимулирующего фактора макрофагов на отложение бета-амилоида и когнитивные нарушения при болезни Альцгеймера.Мозг: журнал неврологии 132: 1078–1092.
  14. 14. Harper JD, Lansbury PT Jr (1997)Модели амилоидного посева при болезни Альцгеймера и скрепи: механистические истины и физиологические последствия зависящей от времени растворимости амилоидных белков. Ежегодный обзор биохимии 66: 385–407.
  15. 15. Мишра Р., Соргджерд К., Нистром С., Нордигарден А., Ю.К. и др. (2007) Амилоидогенез лизоцима ускоряется за счет специфического разрыва и фрагментации, но замедляется за счет связывания и преобразования интактного белка.Журнал молекулярной биологии 366: 1029–1044.
  16. 16. Giurleo JT, He X, Talaga DS (2008)Бета-лактоглобулин собирается в амилоид через последовательные агрегированные промежуточные продукты. Журнал молекулярной биологии 381: 1332–1348.
  17. 17. Кисилевский Р., Будро Л. (1983) Кинетика отложения амилоида. I. Эффекты амилоидусиливающего фактора и спленэктомии. Лабораторное исследование; журнал технических методов и патологии 48: 53–59.
  18. 18. Niewold TA, Gruys E, Arakawa T, Shirahama T, Kisilevsky R (1993)Рекомбинантный человеческий фактор некроза опухоли-альфа (rhTNF-альфа) и аналог rhTNF-альфа усиливают отложение амилоида у сирийского хомячка.Скандинавский журнал иммунологии 37: 29–32.
  19. 19. Сорби Р., Эспенес А., Ландсверк Т., Вестермарк Г. (2008)Быстрая индукция экспериментального АА-амилоидоза у норок путем внутривенной инъекции фактора, усиливающего амилоид. Амилоид: международный журнал экспериментальных и клинических исследований: официальный журнал Международного общества амилоидоза 15: 20–28.
  20. 20. Ganowiak K, Hultman P, Engstrom U, Gustavsson A, Westermark P (1994)Фибриллы из синтетических пептидов, родственных амилоиду, усиливают развитие экспериментального AA-амилоидоза у мышей.Сообщения о биохимических и биофизических исследованиях 199: 306–312.
  21. 21. Кисилевский Р. (2005) Получение и распространение амилоид-усиливающего фактора. Методы молекулярной биологии 299: 237–241.
  22. 22. Steiniger B, Barth P (2000)Микроанатомия и функция селезенки. Достижения в анатомии, эмбриологии и клеточной биологии 151: III–IX, 1–101.
  23. 23. Kraal G (1992) Клетки маргинальной зоны селезенки. Международный обзор цитологии 132: 31–74.
  24. 24. Гейтенбек Т.Б., Грут П.С., Нолте М.А., ван Влит С.Дж., Гангарам-Пандай С.Т. и др. (2002)Макрофаги маргинальной зоны экспрессируют мышиный гомолог DC-SIGN, который захватывает переносимые кровью антигены in vivo. Кровь 100: 2908–2916.
  25. 25. Kraal G, Janse M (1986)Маргинальные металлофильные клетки селезенки мыши, идентифицированные моноклональным антителом. Иммунология 58: 665–669.
  26. 26. Austyn JM, Gordon S (1981) F4/80, моноклональное антитело, направленное специфически против мышиного макрофага.Европейский журнал иммунологии 11: 805–815.
  27. 27. Лундмарк К., Вестермарк Г.Т., Нистром С., Мерфи С.Л., Соломон А. и др. (2002)Передача системного амилоидоза по прионоподобному механизму. Труды Национальной академии наук Соединенных Штатов Америки 99: 6979–6984.
  28. 28. Клуве-Бекерман Б., Маналоор Дж. Дж., Лиепниекс Дж. Дж. (2002) Исследование с отслеживанием пульса, отслеживающее превращение макрофагально-эндоцитированного сывороточного амилоида А во внеклеточный амилоид.Артрит и ревматизм 46: 1905–1913.
  29. 29. Спонарова Дж., Нуволоне М., Уичер С., Фрей Н., Кана В. и соавт. (2013) Эффективный клиренс амилоида в отсутствие иммуноглобулинов и факторов комплемента. Американский журнал патологии 182: 1297–1307.
  30. 30. Яблонска Дж., Диттмар К.Е., Кляйнке Т., Буэр Дж., Вайс С. (2007) Существенная роль CCL2 в скоплении селезеночных макрофагов ERTR-9+ во время заражения мышей BALB/c Listeria monocytogenes. Инфекция и иммунитет 75: 462–470.
  31. 31. Groom AC, Schmidt EE, MacDonald IC (1991)Микроциркуляторные пути и кровоток в селезенке: новое понимание кинетики вымывания, коррозионных слепков и количественной прижизненной видеомикроскопии. Сканирующая микроскопия 5: 159–173; обсуждение 173–154.
  32. 32. Kang YS, Kim JY, Bruening SA, Pack M, Charalambous A, et al. (2004) Лектин C-типа SIGN-R1 опосредует поглощение капсульного полисахарида Streptococcus pneumoniae в маргинальной зоне селезенки мыши.Труды Национальной академии наук Соединенных Штатов Америки 101: 215–220.
  33. 33. Ширахама Т., Коэн А.С. (1971)Расщепление лизосом амилоидных фибрилл макрофагами. Американский журнал патологии 63: 463–486.
  34. 34. van Rooijen N (1992)Липосомы как инструмент in vivo для изучения и управления функцией макрофагов. Исследования в области иммунологии 143: 177–178.
  35. 35. Роджерс М.Дж., Крокетт Дж.К., Коксон Ф.П., Монкконен Дж. (2011)Биохимические и молекулярные механизмы действия бисфосфонатов.Кость 49: 34–41.
  36. 36. Buiting AM, Zhou F, Bakker JA, van Rooijen N, Huang L (1996) Биораспределение клодроната и липосом, используемых в липосомно-опосредованном подходе «самоубийства» макрофагов. Журнал иммунологических методов 192: 55–62.
  37. 37. Гордон С., Тейлор П.Р. (2005)Неоднородность моноцитов и макрофагов. Обзоры природы Иммунология 5: 953–964.
  38. 38. Соломон А., Ричи Т., Мерфи К.Л., Вайс Д.Т., Уолл Дж.С. и др. (2007) Амилоидогенный потенциал фуа-гра.Труды Национальной академии наук Соединенных Штатов Америки 104: 10998–11001.
  39. 39. Westermark P (2012)Локальный AL-амилоидоз: суицидальное новообразование? Ups J Med Sci 117: 244–250.
  40. 40. Мамбуле С., Андо Ю., Анан И., Холмгрен Г., Сандгрен О. и др. (2000)Усиление образования амилоида AA у мышей с помощью транстиретиновых амилоидных фрагментов и полиэтиленгликоля. Biochimica et biophysica acta 1474: 331–336.
  41. 41. Энгель М.Ф., Хемтемурян Л., Клейер С.С., Меелдейк Х.Дж., Джейкобс Дж. и соавт.(2008)Повреждение мембран амилоидным полипептидом островков человека посредством роста фибрилл на мембране. Труды Национальной академии наук Соединенных Штатов Америки 105: 6033–6038.
  42. 42. Миланеси Л., Шейнис Т., Сюэ В.Ф., Орлова Е.В., Хеллевелл А.Л. и соавт. (2012) Прямая трехмерная визуализация разрушения мембраны амилоидными фибриллами. Труды Национальной академии наук Соединенных Штатов Америки 109: 20455–20460.
  43. 43. Van Rooijen N, Sanders A (1994)Опосредованное липосомами истощение макрофагов: механизм действия, подготовка липосом и применение.Журнал иммунологических методов 174: 83–93.
  44. 44. Puchtler H, Sweat F (1965) Конго красный как краситель для флуоресцентной микроскопии амилоида. Журнал гистохимии и цитохимии: официальный журнал Общества гистохимии 13: 693–694.
.

Добавить комментарий

Ваш адрес email не будет опубликован.