МУНИЦИПАЛЬНОЕ АВТОНОМНОЕ ОБЩЕОБРАЗОВАТЕЛЬНОЕ УЧРЕЖДЕНИЕ СРЕДНЯЯ ОБЩЕОБРАЗОВАТЕЛЬНАЯ ШКОЛА №3

Готовность результатов:

через 3 рабочих дня, после 17:00

Вирусы папилломы человека (ВПЧ ) – широко распространенная и наиболее вариабельная группа вирусов, инфицирующих человека, вызывающих такие распространенные заболевания, как папилломы и кондиломы кожи и слизистых . На сегодняшний день известно более 80 типов HPV, около 30 из которых являются аногенитальными, т .е . способны инфицировать слизистую половых органов . Папилломавирусы могут оказывать продуктивное и трансформирующее воздействие на слизистую оболочку . Проявлением продуктивного воздействия являются папилломы и кондиломы , проявлением трансформирующего – дисплазии в различной степени, внутриэпителиальный рак, инвазивный рак или рак шейки матки (РШМ ). Рак шейки матки занимает второе место по распространенности среди онкогенных заболеваний среди женщин в мире, где каждый год выявляется 450 000 новых случаев и первое место среди смертных случаев женщин от рака в развивающихся странах, где ежегодно от этого заболевания умирает 190 000 женщин. В настоящее время доказано , что инфекция ВПЧ является главным фактором риска развития РШМ , все остальные факторы (число половых партнеров, сопутствующие инфекции, иммунный статус) действуют опосредованно. Инфекция ВПЧ не всегда приводит к РШМ (только в 2-5% случаев ). Однако вероятность заболевания возрастает до 40% вслучаях инфицирования высококанцерогенными типами ВПЧ (16, 18, 31, 33, 35, 45, 39, 59, 51, 52, 56, 58, 59, 66, 70). Инфекция ВПЧ может быть подавлена иммунной системой или в 15% случаев прогрессировать в дисплазию легкой степени. Приблизительно в 70% случаев происходит спонтанная регрессия дисплазии или она остается без каких -либо изменений . В 15% случаев она прогрессирует в дисплазию тяжелой степени в течение 2-х лет. Дисплазию в тяжелой степени необходимо лечить , т .к . при отсутствии лечения она в прогрессирует в инвазивный рак. Полимеразная цепная реакция позволяет не только выявить ДНК ВПЧ, но определить тип вируса. Для упрощения скрининга используется мультиплекс-ПЦР, когда в одной пробирке аплифицируется сразу несколько типов, а амплифицирующиеся участки имеют разную длину.

Мазок урогентиальный берется в кабинете врача (для справок обратитесь в регистратуру). Правила забора материала и подготовка к исследованию: Урогентиальный мазок. Забор материала в кабинете врача. Мазок поместить в стерильную пробирку типа “Эппендорф”  с транспортной средой.  При вялотекущих и хронических инфекциях урогенитального тракта рекомендуется применять провокации (кроме химических). За 3-5 суток до забора материала необходимо прекратить прием химиопрепаратов и лечебные процедуры. Забор материала необходимо выполнять вне менструации (не ранее, чем через 2 дня после окончания) 

Распространенность, вирусная нагрузка и типовое разнообразие ВПЧ высокого онкогенного риска среди больных с воспалительными и опухолевыми заболеваниями | Зыкова

Введение

Рост числа злокачественных новообразований (ЗНО) является серьёзной проблемой послед­них десятилетий как во всем мире, так и в Рос­сии. В 2012 г. в мире было зарегистрировано 14,1 млн новых случаев заболеваний и 8,2 млн случаев смерти от рака [1]. В России в период с 2001 г. по 2010 г. заболевае­мость раком выросла на 16,0 %, с 313,9 до 364,2 случаев на 100 тыс. населения. Для сравнения, в Ростовской области уровень заболеваемости ЗНО в тот же период составил 361,5, а смертности — 215,8 на 100 тыс населения [2]. В 2015 г. «грубый» показатель заболеваемости ЗНО соста­вил уже 402,6 на 100 тыс. населения России, а прирост за 10-летний период — 20,4 % [3].

Наибольший удельный вес в структуре онкологиче­ской заболеваемости женщин имеют злокачественные новообразования органов репродуктивной системы (38,9%), при этом опухоли половых органов составляют 18,0 % всех ЗНО у женщин. У мужчин опухоли органов мочеполовой системы формируют 24,4% всех ЗНО [3]. Анализ динамики заболеваемости ЗНО женских половых органов показал ее неуклонный рост. Так, стандартизо­ванный показатель заболеваемости рака шейки матки (РШМ) увеличился с 12,4 в 1989 г. до 14,3 в 2010 г., рака тела матки (РТМ) — с 9,6 до 15,7, а рака яичников (РЯ) — с 9,3 до 11,2. Число вновь выявленных заболеваний жен­ских половых органов в 2010 г. в России достигло 47,7 тыс. (17 % от числа всех злокачественных опухолей) [4].

Основной причиной смертности от рака среди жен­щин во всем мире является рак молочной железы (РМЖ). Вторым по распространенности является РШМ. В 2012 г. в мире было зарегистрировано 527 600 случаев РШМ и 265 700 смерти от него [1]. Благодаря открытию zur Hau­sen было доказано, что главным инициирующим агентом РШМ является вирус папилломы человека (ПВЧ) высо­кого канцерогенного риска (ВКР). В обзоре, посвящен­ном оценке вклада различных инфекций в развитие рака, сообщалось, что из 14 млн новых случаев рака, зареги­стрированных в 2012 г., 15,4 %, или 2,2 млн, были связа­ны с инфекционными агентами. Наиболее важными из них, на совокупную долю которых приходилось 92% всех случаев рака, связанных с инфекцией, были H. pylori (770 тыс. случаев) ВПЧ (640 тыс.), вирус гепатита B (420 тыс.), вирус гепатита С (170 тыс.) и вирус Эпштейна-Барр (120 тыс.). Помимо 530 тыс. случаев РШМ с ВПЧ было связа­но 113 тыс. случаев заболеваний раком других локализа­ций. У женщин ВПЧ вызвал более половины всех случаев рака, ассоциированных с инфекционными агентами [5].

По расчетным данным, в России с ВПЧ высокого онко- генного риска связано развитие РШМ практически в 100 % случаев, рака вульвы (РВ) — 45 %, рака влагалища — 40 %, рака анального канала — 92 %, рака полового чле­на — 42,5 %, раковых заболеваний головы и шеи — 25 % случаев. В структуре ВПЧ-ассоциированных ЗНО на долю 16 и 18 типов приходится до 70 % случаев РШМ, 80 % — РВ и влагалища, 92 % — анального канала, 95 % — рака ротовой полости, 89 % — рака ротоглотки, 63 % — рака полового члена. При этом 16-й тип ВПЧ имеет са­мый высокий канцерогенный потенциал [6].

Данные о частоте ВПЧ-носительства в различных географических регионах широко варьируются. Это связано, в том числе, и с различными технологиями ВПЧ-тестирования, размерами выборки, возрастными группами. По данным мета-анализа 194 исследований, опубликованных в1995-2009 гг., с общим охватом более одного миллиона женщин с нормальными цитологиче­скими мазками, общая инфицированность ВПЧ в мире составила 11,7 %. Наиболее распространенной ПВИ была в странах Африки к югу от Сахары (24,0 %), Латинской Америки и Карибского бассейна (16,1 %), Восточной Ев­ропы (14,2 %) и Юго-Восточной Азии (14,0 %). Значи­тельные отличия распространенности ВПЧ наблюдались не только между регионами, но и между странами вну­три региона и отдельными территориями внутри страны. Так, в США инфицированность ВПЧ варьировалась от 2,9 % до 80,8 %. Во всех регионах пик инфицированности был зарегистрирован в раннем возрасте (до 25 лет), в не­которых регионах наблюдался умеренный второй пик в возрасте старше 40 лет. Особенно ярко он проявлялся в возрасте старше 45 лет в странах Центральной и Южной Америки и старше 55 лет в Западной Африке. Менее выраженный второй пик наблюдался также в Южной Азии, Южной Европе и Южной Африке. В остальных регио­нах мира второй пик инфицированности не наблюдался. Наиболее распространенными были 16 (3,2 %), 18 (1,4 %), 52 (0,9 %), 31 (0,8 %) и 58 (0,7 %) типы ВПЧ [7].

В исследованиях, проведенных Шипулиной О.Ю., были установлены региональные особенности рас­пространенности и этиологической структуры ВПЧ- инфекции на территории Российской Федерации. Так, частота выявления ВПЧ ВКР у женщин в возрасте от 30 до 40 лет, проходивших профилактический гинеколо­гический осмотр, составила 16,6 % в Москве и 20,5 % в Санкт-Петербурге. При проведении диагностического обследования частота выявления ВПЧ ВКР среди жен­щин в возрасте от 25 до 35 лет составила 30,3 % в Москве и 38,6,1 % в Иркутске. В образцах от ВПЧ-позитивных па­циенток из Иркутска достоверно чаще выявляли 16 тип ВПЧ (33,0 %), а в образцах от пациенток из Москвы — 39 тип ВПЧ (15,1 %) (р<0,005). Распространенность ВПЧ ВКР снижалась с возрастом и составляла от 39,0 в возрас­те 17-20 лет, до 7-9 % в возрасте 50-70 лет. [8].

Роговская С.И. с соавт. также показали высокий уро­вень распространенности ПВИ в различных группах женского населения России. Частота инфицирования ВПЧ варьировалась от 13,4 % до 26,4 % при скринин­говых исследованиях и от 99,2 % до 100 % при H-SIL и РШМ. В основной популяции превалировал 16 тип ВПЧ, реже встречались 31-й, 33-й, 56-й и 18-й типы [9]. Ситу­ацию усугубляет тот факт, что в стратегии распростра­нения вирус не ограничивается пределами только одно­го органа. Во время обследования девушек-студенток в случае наличии цервикальной ПВИ у 74,4 % из них вирус определяли и в анальном канале, наиболее распростра­ненными были 16-й, 56-й, 31-й и 39-й типы [9]. Чулкова О.В. с совт. отмечают сочетание вульварной и цервикаль­ной интраэпителиальной неоплазии в 35-60 % случаев [10]. Вергейчик Г.И. было показано, что у 90,7 % женщин с различными проявлениями ПВИ в области вульвы и перианальной зоны ВПЧ был выявлен и в соскобах из шейки матки. Важно, что даже при полном клиническом эффекте в 69,2 % случаев персистенция вирусов в эпите­лии вульвы или перианальной зоны продолжалась после лечения, что может стать причиной последующих реци­дивов [11]. 

Распространенность ПВИ инфекции среди мужчин оценить еще сложнее, так как организованный скрининг среди них вообще не проводится. Литературные данные, как правило, представлены лишь в отношении мужчин, посещающих ЛПУ в связи с возникновением жалоб. ПВИ при воспалительных процессах в урогенитальном тракте у мужчин репродуктивного возраста встречалась в 42,0 % случаев, при этом чаще всего протекала в латентной фор­ме (75,4 % случаев), а наличие жалоб со стороны моче­половых органов и клинической симптоматики уретрита было обусловлено сочетанием ВПЧ-инфекции с условно­патогенной микрофлорой [12].

По мнению ряда исследователей, риск развития диспла­зии и рака шейки матки резко повышается при сочетании ВПЧ с различными возбудителями из группы инфекций, передающихся половым путем (ИППП), а также изменени­ями дисбаланса вагинальной микрофлоры [13][14].

Таким образом, изучение типовой структуры, возрастных, гендерных и территориальных законо­мерностей распространения ВПЧ имеет важное ме­дицинское и социальное значение. Существующие в на­стоящее время профилактические вакцины способны повлиять на уровень заболеваемости и смертности ВПЧ- ассоциированными ЗНО. Анализ распространенности ПВИ представляет особый интерес, т.к. позволяет дать оценку потенциального воздействия современных мето­дов иммунопрофилактики.

Цель исследования — провести анализ частоты вы­явления и типового пейзажа ВПЧ высокого онкогенного риска в зависимости от пола, возраста, наличия онколо­гической патологии.

Материал и методы

Обследованы 424 пациента, обратившихся за меди­цинской помощью в клинико-диагностическое отделение ФГБУ «РНИОИ» Минздрава России (334 женщины и 90 мужчин). Исследования проводили в период 2013-2015 гг. В возрасте 18-25 лет было 11,4 % (38) женщин и 8,9 % (8) мужчин, 26-45 лет — 56,9 % (190) и 42,2 % (38), старше 45 лет — 31,7 % (106) и 48,9 % (44) соответственно. Онко­логическая патология органов женской репродуктивной системы была подтверждена у 28,1 % (94) женщин, в том числе злокачественные новообразования у 69,1 % (65), доброкачественные — у 30,9 % (29). В структуре ЗНО сре­ди женщин РШМ составил 73,8 % (48), РВ — 26,2 % (17). У 71,9 % (240) женщин были диагностированы неонко­логические заболевания инфекционно-воспалительного или/и диспластического генеза (хронический кольпит, хронический эндоцервицит, хронический вульвоваги- нит, хронический аднексит, уретрит, ПВИ, LSIL). Среди обследованных мужчин онкологические заболевания (рак мочевого пузыря) были подтверждены у 20,0 % (18), хроническая патология урогенитального тракта (уре­трит, простатит, баланопостит, ПВИ) установлена у 80,0 % (72) больных.

Исследовали мазки из влагалища и цервикального ка­нала у женщин, мазки из уретры и/или первую порцию утренней мочи у мужчин. Экстракцию ДНК из клини­ческого материала проводили с использованием набора реагентов «АмплиПрайм®ДНК-сорб-АМ» в соответствии с инструкцией производителя. Амплификацию и детек­цию ДНК проводили методом мультиплексной ПЦР в режиме реального времени с использованием наборов реагентов «АмплиСенс® ВПЧ ВКР скрин-титр-FL», «Ам­плиСенс® ВПЧ ВКР генотип-FL» и «АмплиСенс® ВПЧ 16/18-FL» производства ФБУН «ЦНИИЭ» Роспотреб­надзора. Для выполнения количественного анализа про­водили одновременную амплификацию с детекцией для образцов ДНК, полученных из клинического материала и ДНК-калибраторов.

Результаты

При проведении лабораторного обследования ДНК ВПЧ высокого онкогенного риска была обнаружена у 35,4 % больных (34,4 % женщин и 38,9 % мужчин) (табл. 1).

Таблица/ Table 1

Частота выявления ДНК ВПЧ ВКР в зависимости от возраста и пола

High-risk HPV DNA prevalence in dependence on gender and age

* — количество больных с несколькими типами ВПЧ из общего числа ВПЧ-позитивных /Number of patients with multiple-type HPV infection from the total number of HPV-positive subjects.

До 25 лет ДНК ВПЧ была выявлена у 39,1 %, 26-45 лет — у 35,5 %, а старше 46 лет — у 36,1 % лиц. У женщин, как и в общей группе, частота выявления ДНК ВПЧ высокого онкогенного риска с возрастом снижалась. Более отчет­ливо эта закономерность прослеживается при сравнении частоты ПВИ среди женщин репродуктивного и менопа­узального периода. Так, в возрасте до 45 лет ДНК ВПЧ была обнаружена 37,3 %, а после 46 лет — у 28,3 % жен­щин.

У мужчин, напротив, ДНК ВПЧ чаще выявлялась в старших возрастных группах. До 45 лет частота обнару­жения ВПЧ у мужчин составила 30,4%, а после — 47,7%. При сравнении частоты распространения ВПЧ среди женщин и мужчин внутри одной возрастной группы было установлено, что среди 18-25-летних и после 45 лет ДНК ВПЧ чаще выявлялась у мужчин, а среди 26-45-лет­них — у женщин.

Удельный вес mixt-инфекций также был выше у моло­дых. Несколько типов вируса среди молодых (до 45 лет) были обнаружены у 26,3 % от числа ВПЧ-позитивных, в старшей возрастной группе — только у 9,8 %. Среди женщин эти показатели составили 23, 5% и 10,0 %, среди мужчин — 42,9 % и 9,5 % соответственно.

В общей группе обследованных лиц наиболее распро­страненными были 16 (46,7 %), 52 (16,0 %), 56 (12,7 %), 31 (10,7 %) и 18 (10,0 %) типы ВПЧ (табл. 2). 16-й тип ВПЧ был доминирующим как у женщин, так и мужчин. В то же время, соотношение частоты распространения 16-го типа и следующего за ним по частоте обнаружения у жен­щин составило 4,5 раза, а у мужчин — только 2,9 %.

Таблица/ Table 2

Удельный вес различных генетических вариантов ВПЧ в зависимости от пола

Distribution of multiple HPVgenotypes in dependence on gender

Первые пять ранговых мест у женщин занимали 16­й, 31-й, 52-й, 18-й и 56-й типы, у мужчин — 16-й, 52-й, 56-й, 45-й и 18-й типы ВПЧ. Интересно отметить, что 51-й тип вируса, находящийся на 6-м ранговом месте по распространенности в общей группе, был определен только у женщин.

Необходимо отметить, что у 9 пациентов в нашем исследовании тип вируса не был определен, т.к. клини­ческий материал был исследован только в тесте «Ампли- Сенс® ВПЧ ВКР скрин-титр-FL», позволяющем устано­вить филогенетическую группу и вирусную нагрузку, но не генотип вируса.

В исследовании, проведенном ранее [15], была опре­делена частота распространенности разных генотипов ВПЧ среди пациентов консультативно-диагностического центра (КДЦ) г. Ростова-на-Дону. Средняя частота инфи­цирования ВПЧ среди пациентов КДЦ составила 37,3 %, а первые пять ранговых мест занимали 16-й, 52-й, 56-й, 18-й и 31-й типы, т.е. эти данные практически не отлича­лась от данных, полученных нами в общей группе обсле­дованных. В то же время, частота инфицирования ВПЧ в группе пациентов с воспалительными заболеваниями в настоящем исследовании была значительно ниже (26,7 %). Доля 16-го типа ВПЧ среди пациентов КДЦ состави­ла лишь 17,7 %, в нашем исследовании — 46,7 %.

При сравнении частоты выявления ДНК ВПЧ у боль­ных с опухолевыми и воспалительными заболеваниями было установлено, что удельный вес ВПЧ-позитивных образцов в первой группе был в 1,9 раза выше, чем во второй (табл. 3). У женщин эта разница была значитель­ней, чем у мужчин (2,0 и 1,4 раза соответственно). Соче­тание нескольких типов ВПЧ у женщин при опухолевых заболеваниях было зарегистрировано в 2,3 реже, чем при воспалительных процессах. У мужчин эти показатели практически не отличались.

Таблица/ Table 3

Результаты тестирования на ВПЧ больных с воспалительными и опухолевыми заболеваниями

HPV positivity in patients with inflammatory diseases and cancer patients

1. — из числа ВПЧ-позитивных /of number of HPV-positive subjects
2. — из числа обследованных одновременно на ИППП и ВПЧ /of number of patients tested for STI and HPV
3. — из числа ИППП (+) и обследованных на ВПЧ /of number of STI-positive patients tested for HPV

Часть пациентов была дополнительно обследована на наличие ДНК возбудителей инфекций, передающихся половым путем (ИППП). Из общего числа обследован­ных у 21,9 % больных (24,3 % женщин и 13,2% мужчин) в клиническом материале из урогенитального тракта была выявлена ДНК и ВПЧ и ИППП. Среди больных, инфици­рованных возбудителями ИППП, частота mixt-инфекции составила 48,6 % у женщин и 41,7 % у мужчин. При ана­лизе частоты выявления mixt-инфекции в группах боль­ных с опухолевыми и воспалительными заболеваниями отчетливо прослеживается значительное преобладание этого показателя в первой группе. У женщин с опухоле­выми процессами сочетание одновременного инфициро­вания ВПЧ и возбудителями ИППП составило 70,6% от общего числа ИППП-позитивных, с воспалительными заболеваниями — 41,5%. У мужчин эти показатели соста­вили 66,7% и 38,1% соответственно.

У мужчин группа опухолевых заболеваний была пред­ставлена только одной нозологией (РМП), у женщин — двумя (РШМ и РВ). Чаще всего ДНК ВПЧ в соскобном материале была определена у больных с РШМ (91,7 %), значительно реже у больных с РВ (14,3 %). Необходимо отметить, что РШМ регистрировался у более молодых женщин, чем РВ. Средний возраст больных РШМ соста­вил 40,6, а РВ — 67,3 лет. Возрастная группа женщин с доброкачественными заболеваниями занимала проме­жуточное положение (средний возраст — 55,5 лет). ДНК ВПЧ у них была обнаружена в 17,2 % случаев, что, вероят­нее всего, отображает общее состояние инфицирования женщин в этой возрастной группе.

В случаях тяжелой дисплазии и рака вирусная на­грузка всегда превышает порог клинической значимости. При отсутствии клинической симптоматики переход в состояние дисплазии также более вероятны в случаях, когда вирусная нагрузка выше порога клинической зна­чимости.

При анализе уровня вирусной нагрузки было установ­лено, что при опухолевых процессах у женщин преобла­дала высокая вирусная нагрузка, а при воспалительных — нагрузка с разной степенью клинической значимости вы­являлись одинаково часто (табл. 4).

Таблица/ Table 4

Результаты количественных исследований на ВПЧ ВКР в тесте «ВПЧ-скрин»

Qualitative “HPV-screen” test results for high-risk HPV

Обсуждение

В ходе проведенных исследований были установлены закономерности распространения ПВИ, соответствую­щие основным общемировым показателям. Так, отчет­ливо прослеживалась тенденция к снижению удельного веса ВПЧ-инфицированных больных в старших возраст­ных группах. В то же время, динамика снижения показа­телей была плавной, без значительных «пиков», как это было отмечено Bruni L. et al [7]. У женщин ВПЧ высоко­го онкогенного риска выявлялась реже, чем у мужчин, впрочем, разница эта не была статистически значимой. Частота выявления ВПЧ среди женщин соответствовала уровню распространения ПВИ при диагностических ис­следованиях в других регионах страны [8][9].

Определение генотипа ВПЧ представляет особый ин­терес, т.к. разные типы имеют различный канцерогенный потенциал: наибольшей онкогенностью обладают 16-й и 18-й типы ВПЧ. Помимо этого, выявление нескольких генотипов ассоциировано с менее благоприятным прогнозом течения заболевания и более высоким риском персистенции. Суммарная доля определения этих двух типов ВПЧ у женщин составила 60,8 %, у мужчин только 42,9 % от общего числа ВПЧ-позитивных образцов. Не­смотря на очевидное преобладание 16-го типа ВПЧ как у женщин, так и у мужчин, дальнейшие различия удель­ного веса в общей структуре ВПЧ-позитивных между 16-м и другими типами у женщин были значительными, у мужчин, напротив, были несущественными. Пока труд­но определить, являются ли установленные гендерные отличия проявлением биологии возбудителя или регио­нальных особенностей распространения ВПЧ.

Сравнение результатов исследований, проведенных на базе двух учреждений, было интересно тем, что об­следуемые группы пациентов проживали на одной тер­ритории, были использованы идентичные технологии лабораторного анализа (экстракция ДНК из клиническо­го материала, оборудование и наборы реагентов для ам­плификации и детекции ДНК). Разница состояла в том, что в КДЦ, как правило, обращаются пациенты с остры­ми состояниями, а в онкологический институт — чаще с хронической патологией. Значительное (в 2,6 раза) превышение удельного веса 16-го типа ВПЧ у больных с воспалительными заболеваниями в настоящем исследо­вании может быть связано с высокой способностью этого генотипа к длительной персистенции.

Большая частота выявления ПВИ у больных с онколо­гическими заболеваниями репродуктивной системы, по сравнению с воспалительными, а также большая частота выявления ДНК ВПЧ на фоне инфекций, передающихся половым путем, закономерна, и отмечалась другими ис­следователями [13][14].

Заключение

Проведенные исследования позволили установить некоторые гендерные и возрастные отличия в частоте распространения ВПЧ среди пациентов клинико-диагно­стического отделения РНИОИ. Так, частота выявления ДНК ВПЧ среди женщин составила 34,4 %, среди муж­чин — 39,9 %. Прослеживается тенденция к снижению удельного веса ВПЧ-позитивных в старших возрастных группа у женщин и росту у мужчин. Зарегистрированы различия и внутри одной возрастной группы: до 25 и по­сле 45 лет ПВИ чаще регистрировалась у женщин, чем у мужчин, а в средней возрастной группе (26-45 лет), на­против, у мужчин чаще, чем у женщин. Сочетание не­скольких типов ВПЧ чаще регистрировали у молодых. Наиболее распространенным был 16 ВПЧ как у мужчин, так и женщин. В то же время в распределении последую­щих ранговых мест имелись некоторые гендерные отли­чия: у женщин за 16-м типом следовали 31-й, 52-й, 18-й и 56-й тип, а у мужчин 52-й, 56-й, 45-й и 18-й типы, при этом 51-й тип был выявлен только у женщин. Удельный вес ВПЧ-позитивных среди больных с опухолевыми про­цессами был в 1,9 раза выше, чем с воспалительными заболеваниями. При опухолевых процессах у женщин преобладала высокая вирусная нагрузка, а при воспали­тельных нагрузка с разной степенью клинической зна­чимости встречалась одинаково часто. Сочетание ВПЧ с возбудителями ИППП чаще регистрировались у больных с онкологической патологией.

Маркеры папилломавирусной инфекции в скрининге рака шейки матки Текст научной статьи по специальности «Клиническая медицина»

© Е. А. Золотоверхая,

Е. В. Шипицына, Е. С. Юшманова, А. М. Савичева

ГУ НИИ акушерства и гинекологии им. Д. О. Отта РАМН, Санкт-Петербург, Россия

МАРКЕРЫ ПАПИЛЛОМАВИРУСНОИ ИНФЕКЦИИ В СКРИНИНГЕ РАКА ШЕЙКИ МАТКИ

УДК 618.146-006-07]:578.827.1

■ В работе представлены результаты анализа проб от 192 пациенток, содержащих ДНК вируса папилломы человека (ВПЧ) онкогенных типов, методом количественной типоспецифической полимеразной цепной реакции. ВПЧ 16-го типа был обнаружен у 76 % пациенток. Анализ распространенности типов ВПЧ по превалирующему типу показал, что 16, 18, 31, 33 и 45-й типы ответственны за 97 % случаев рака. Для 16-го типа также была показана ассоциация вирусной нагрузки со степенью тяжести заболевания.

■ Ключевые слова: вирус папилломы человека; рак шейки матки; цервикальная интраэпителиальная неоплазия; вирусная нагрузка.

Введение

По данным Всемирной организации здравоохранения, ежегодно в мире выявляется около 500 тысяч случаев рака шейки матки и регистрируется приблизительно 250 тысяч смертей от этого заболевания [3]. Эффективность организованного скрининга подтверждена во многих странах: так, в Европе и Северной Америке в результате реализации скрининговых программ показатели смертности от рака шейки матки снизились на 20-60 % [7]. Основой скрининга в течение нескольких десятилетий является цитологическое исследование эпителия шейки матки. Однако считается, что до 30 % случаев инвазивного рака шейки матки являются результатом ошибок цитологического скрининга вследствие ограниченной чувствительности цитологического метода [19].

Установление этиологической роли вируса папилломы человека (ВПЧ) в развитии рака шейки матки привело к тому, что диагностика папилломавирусной инфекции (ПВИ) наряду с цитологическими исследованиями стала рассматриваться как важнейший элемент скрининга рака шейки матки. Обзор последних скрининговых исследований, проведенных с целью оценки диагностических характеристик цитологического исследования и тестирования на ВПЧ, показал, что:

• Тест на ВПЧ обладает гораздо более высокой чувствительностью для диагностики цервикальных интраэпителиаль-ных поражений, чем цитологический тест, однако специфичность тестирования на ВПЧ уступает специфичности цитологического метода;

• Чувствительность и прогностическая значимость отрицательного теста на ВПЧ в сочетании с отрицательным результатом цитологического теста приближаются к 100 % [12]. Более низкая по сравнению с цитологическим методом специфичность теста на ВПЧ обусловлена тем, что у большинства женщин, особенно молодых, ПВИ носит транзиторный характер. Среди женщин старше 30 лет показатель спонтанной элиминации вируса значительно ниже, что повышает диагностическую ценность теста на ВПЧ в этой возрастной категории. На этом основании применение теста на ВПЧ в сочетании с цитологическим исследованием официально одобрено в США для первичного скрининга среди женщин старше 30 лет [1].

Для повышения специфичности тестирования на ВПЧ предлагается несколько подходов. По мнению экспертов, на сегодняшний день самым надежным прогностическим индикатором прогрессии заболевания является выявление у женщины персистирующей ПВИ. Показано, что риск персистенции вируса и последующей прогрессии выше при более высокой вирусной нагрузке [21].

Несмотря на то, что высокая вирусная нагрузка как фактор риска неопластической прогрессии активно изучается,

ее использование в клинической практике в настоящее время остается проблематичным по ряду причин. Во-первых, данный подход требует стандартизации процедуры получения клинического материала, при этом должно быть достаточным количество эпителиальных клеток. Во-вторых, необходимо использовать тесты, позволяющие определять истинную концентрацию вирусной ДНК и концентрацию клеток в образце. Точную количественную оценку ДНК можно провести только при использовании метода полимеразной цепной реакции (ПЦР) в реальном времени.

Планируя данное исследование, мы ставили своей целью изучить вирусную нагрузку и персис-тенцию ВПЧ как маркеров прогрессии цервикальных поражений, а также оценить возможность их использования в скрининге рака шейки матки.

Материалы и методы

Клинический материал

Клинический материал был получен от пациенток амбулаторного отделения НИИ акушерства и гинекологии им. Д. О. Отта РАМН и пациенток НИИ онкологии им. Н. Н. Петрова РАМН. Соскобы эпителия цервикального канала собирали дакроновыми щеточками в пробирки Эппендорф объемом 1,5 мл, содержащие 300 мкл транспортной среды (ЦНИИ эпидемиологии, Москва). Одновременно с материалом для исследования на ВПЧ брали материал для цитологического исследования.

Цитологические исследования

Цитологические исследования соскобов эпителия цервикального канала проводились в лабораториях патоморфологии НИИ акушерства и гинекологии и НИИ онкологии.

Выделение ДНК

Выделение ДНК из клинических проб проводили с использованием тест-системы ДНК-сорб-А (ЦНИИ эпидемиологии, Москва) в соответствии с инструкцией производителя.

Выявление ДНК ВПЧ онкогенных типов (без типирования)

Для выявления широкого спектра (без дифференциации) ВПЧ онкогенных типов (16, 18, 31, 33, 35, 39, 45, 52, 56, 58, 59, 66) в соскобах эпителия цервикального канала использовали тесты АмплиСенс ВПЧ ВКР скрининг (ЦНИИ Эпидемиологии, Москва). Анализ проводили методом ПЦР с электрофорезной детекцией продуктов амплификации в полном соответствии с инструкцией производителя.

Стандарты для количественной ПЦР в реальном времени

Для количественного анализа ДНК ВПЧ использовали следующие клоны ВПЧ: ВПЧ 16, 18 и

45-го типов (любезно предоставлены доктором E. M. de Villiers, Германия), 31, 35 и 56-го типов (любезно предоставлены доктором A. Lorincz, США), 33-го и 39-го типов (любезно предоставлены доктором G. Orth, Франция). Для определения количества клеток в пробе использовали разведения рекомбинантной ДНК, содержащей фрагмент гена Р-глобина человека (любезно предоставлен старшим научным сотрудником ЦНИИ эпидемиологии О. Ю. Шипулиной, Россия).

Типирование ВПЧ с одновременным определением вирусной нагрузки

Для типирования ВПЧ в пробах, в которых была обнаружена ДНК ВПЧ онкогенных типов, использовали тесты АмплиСенс FRT ВПЧ ВКР генотип RG4 (ЦНИИ эпидемиологии, Москва). Амплификация с детекцией в реальном времени проводилась в приборе Rotor-Gene 3000 (Corbett Research, Австралия).

Неизвестные значения концентраций ДНК ВПЧ 16, 18, 31, 33, 35, 39, 45 и 56-го типов в клинических образцах рассчитывались относительно количественных стандартов с помощью программного обеспечения к прибору.

Все реакции проводили в двух повторах. Количество ДНК ВПЧ рассчитывали по отношению к числу копий гена Р-глобина человека и представляли как число копий ДНК ВПЧ на 105 копий геномной ДНК человека (одна клетка человека содержит две копии Р-глобинового гена).

Статистическая обработка данных

Оценку ассоциации стадии заболевания с частотой встречаемости ВПЧ, а также с инфицированием несколькими типами ВПЧ проводили с использованием х2-теста. Для анализа ассоциации степени дисплазии с вирусной нагрузкой использовали критерий Крускала-Уоллиса (Н-тест).

Результаты исследований

Для представления результатов цитологического исследования была использована Терминологическая система Бетесда (TSB — Terminology Bethesda System). Стадии рака предшествуют цервикальные интраэпителиальные неоплазии (CIN), которые по степени тяжести разделяют на CIN 1 (легкая дисплазия), CIN 2 (умеренная дисплазия) и CIN 3 (тяжелая дисплазия и карцинома in situ). TSB предполагает деление всех плоскоклеточных интраэпителиальных поражений (SIL — squamous intraepithelial lesion) на две группы: SIL низкой степени (LSIL — low SIL) включают CIN 1, SIL высокой степени (HSIL — high SIL) — CIN 2 и CIN 3.

В анализ было включено 192 пробы, в которых была обнаружена ДНК ВПЧ высокого онкогенно-го риска. По данным цитологического исследова-

100

20 10 0

Норма (п = 57) LSIL (п = 24) HSIL (п = 46) Рак (п = 65)

□ Один тип ВПЧ ■ Два и более типов ВПЧ

Рис. 2. Показатели инфицирования одним и несколькими типами ВПЧ в группах пациенток с различной тяжестью цервикальных поражений

если в группе пациенток без атипии распространенность множественной инфекции составила 51 % (29 из 57), то в группах пациенток с LSIL.

и раком она равнялась 58 % (14 из 24), 70 % (32 из 46) и 71 % (46 из 65) соответственно.

Принципиальной особенностью ПЦР в реальном времени является возможность следить за накоплением продуктов амплификации непосредственно во время реакции. Оптический модуль осуществляет динамическое измерение флюоресценции, генерируемой флюорофорами. Увеличение флюоресценции, отражающее динамику накопления продуктов амплификации, отображается на дисплее прибора в конце каждого цикла. ПЦР в реальном времени позволяет точно определить количество копий исследуемой ДНК в клинической пробе, так как исходное количество исследуемой матрицы оценивается 80 % по началу логарифмической фазы реакции, а не по количеству продуктов амплификации в конце реакции. На рис. 3 представлены графики амплификации фрагмента генома ВПЧ 16-го типа в серии десятикратных разведений стандарта

Таблица 1

Общая распространенность онкогенных типов ВПЧ в группах с различной тяжестью цервикальных поражений

16 56 33 31 45 18 52 58 35 39 59

Рис. 1. Общая распространенность ВПЧ онкогенных типов

ния, все пациентки были разделены на 4 группы. Численность группы с цитологической нормой составила 57 человек, LSIL — 24 человека, — 46 человек. Группу с диагнозом рака шейки матки составили 65 пациенток.

ВПЧ 16-го типа был обнаружен у 145 пациенток (76 %). Остальные типы распределились по распространенности следующим образом: 56, 33, 31, 45, 18, 52, 58, 35, 39, 59 (рис. 1).

Результаты определения типов ВПЧ высокого онкогенного риска у пациенток с различной степенью тяжести цервикальных поражений представлены в табл. 1. Частота встречаемости 16-го типа ВПЧ была ассоциирована со стадией заболевания (р < 0,01): при цитологической норме она составила 56 % (32 случая из 57), при LSIL — 67 % (16 случаев из 24), при — 83 % (38 случаев из 46), при плоскоклеточной карциноме — 91 % (59 случаев из 65). Для остальных типов ВПЧ данная закономерность не прослеживалась.

У 63 % пациенток (121 из 192) было обнаружено два и более типа ВПЧ (рис. 2). Инфицирование несколькими типами ВПЧ было ассоциировано с тяжестью цервикальных поражений (р < 0,01):

%

Тип BOT Норма (n = 57) LSIL (n=24) HSIL (n=46) Рак (n = 65)

Кол-во % Кол-во % Кол-во % Кол-во %

16 32 56 16 67 З8 83 59 91

lS б 11 4 17 4 9 12 19

Зі 11 19 7 29 11 24 11 17

ЗЗ 7 12 З 13 14 3Q 21 32

З5 1 2 Q — 4 9 З 5

З9 2 4 1 4 1 2 2 3

45 9 16 2 8 7 15 ІЗ 2Q

52 9 16 4 17 7 15 З 5

56 2Q 35 9 38 14 3Q 12 19

5S S 14 З 13 2 4 6 9

59 Q — 2 8 Q — 1 2

10 І5 То ТІ l20 l25 l30 l35 l40 Cycle

Рис. 3. Графики амплификации фрагмента генома ВПЧ 16-го типа в серии десятикратных разведений стандарта (2 х 105-2 х 101), а также одной клинической пробы

Таблица 2

Среднее значение вирусной нагрузки ВПЧ 16, 18, 31, 33, 35, 39, 45, 56 типов при различной степени тяжести цервикальных поражений

Тин Bm Норма (n=57) LSIL (n=24) HSIL (n=46) Рак (n = 65)

16 9.8 x 106 1.3 x 107 2.9 x 109 1.4 x 109

1S 2.6 x 105 1.1 x 105 2.8 x 104 1.9 x 107

31 7.7 x 106 7.5 x 106 1.8 x 106 1.6 x 106

33 1.1 x 106 2.0 x 106 2.6 x 106 2.0 x 107

35 7.2 x 105 — 2.8 x 104 3.3 x 106

39 1.9 x 104 2.3 x 106 3.8 x 101 7.1 x 100

45 2.3 x 106 1.2 x 103 7.5 x 103 7.5 x 104

56 1.7 x 106 4.8 x 1Q6 1.3 x 1Q5 1.1 x 1Q2

(2 х 105 – 2 х 101) и одной пробе ДНК, выделенной из клинического материала.

Концентрацию ДНК ВПЧ 16, 18, 31, 33, 35, 39, 45 и 56-го типов в исследуемых пробах определяли с помощью стандартных кривых, построенных с использованием ВПЧ клонов данных типов (рис. 4). Вирусную нагрузку рассчитывали как количество копий ВПЧ на 105 геномов человека. На рис. 5 представлены показатели вирусной нагрузки.

Среднее число копий ДНК ВПЧ 16, 18, 31, 33, 35, 39, 45 и 56 представлено в таблице 2. Среднее количество копий ДНК ВПЧ 16 типа возрастало с увеличением степени дисплазии (р < 0,05): если в случаях цитологической нормы оно составляло

9.8 х 106 копий вирусной ДНК, то у пациентов с LSIL — 1,3 х 107, а у пациенток с и раком —

2.9 х 109 и 1,4 х 109 соответственно. Для остальных типов зависимости тяжести поражений от вирусной нагрузки не установлено.

Анализ распространенности типов ВПЧ по превалирующему типу (представленному в большем количестве в случаях множественной ВПЧ-инфекции) показал, что 16-й тип существенно до-

минирует над остальными типами, а основными типами, обнаруживаемыми при раке шейки матки, являются 16, 18, 31, 33 и 45-й типы — вместе они отвечают за 97 % случаев рака (табл. 3).

Течение ПВИ наблюдали у 45 пациенток, со-скобы эпителия цервикального канала у которых были собраны в двух или более временных точках. Персистенцию ВПЧ высокого риска определяли по нахождению одного и того же типа (типов) ВПЧ в цервикальных образцах во всех доступных временных точках в течение 6 и более месяцев. Персистенция ДНК ВПЧ высокого онко-генного риска была выявлена у 18 из 45 (40 %) пациенток. ВПЧ 16-го типа персистировал у 10 из 24 (42 %) пациенток, ВПЧ 18 — у одной из 4 (25 %), ВпЧ 31 — у одной из 5 (20 %), ВПЧ 33 — у 4 из 9 (44 %), ВПЧ 35 — у двух из 5 (40 %) и ВПЧ 45 — у трех из 10 (33 %). У трех из 18 (17 %) пациенток с персистирующей папилломавирусной инфекцией (ПВИ) наблюдалась прогрессия неопластических изменений инфицированного эпителия. В двух случаях заболевание прогрессировало от СШ 1 до СШ 2: у одной из женщин в нескольких

ЗО 28 26 о 24 22 20 18

10*02 10*03 10*04 10*05

Concentration

Рис. 4. Стандартная кривая, полученная в результате амплификации фрагмента генома BПЧ 16-го тина в серии десятикратных разведений стандарта 2 x 105-2 x 101, а также одной клинической пробы

Распределение числа копий

%

100

90

80

70

60

50 40 30 20 10 0

16 18 31 33 35 39 45 56 Другие

типы

□ < 100 □ < 10 000 □ < 1 000 000 □ > 1 000 000

Рис. 5. Показатели вирусной нагрузки BПЧ 16, 18, 31, 33, 35, 39, 45, 56-го типов

последовательных образцах выявляли ВПЧ 16го типа, у другой — ВПЧ 16-го и 45-го типов. У третьей пациентки ВПЧ 35-го и 45-го типов были выявлены в двух образцах, взятых с интервалом в 9 месяцев: в данном случае заболевание прогрессировало от СШ 2 до СШ 3. Ни в одном из случаев транзиторной ВПЧ-инфекции развитие цервикальной неоплазии не наблюдалось. Также мы не обнаружили случаев персистенции ВПЧ 39, 52, 56, 58, 59-го типов, что может быть объяснено, однако, небольшим размером выборки.

Обсуждение результатов

На сегодняшний день самым эффективным средством профилактики рака шейки матки остается скрининг женского населения с целью диагностики и лечения заболевания на стадии пред-рака. В основе всех рекомендаций по применению теста на вирус папилломы человека в скрининге рака шейки матки лежит тот факт, что цервикальные поражения высокой степени и рак в отсутствие

вируса не развиваются, иными словами, персис-тенция вируса — необходимое условие развития рака. Во многих странах Европы, Америки, Азии уже накоплен положительный опыт применения различных методов выявления ДНК ВПЧ в скрининговых исследованиях [18, 22].

В США с 2003 года скрининг с одновременным использованием цитологического теста и теста на ДНК ВПЧ является альтернативой цитологическому скринингу среди женщин старше 30 лет [1]. В случае отрицательных результатов обоих тестов рекомендуемый интервал скрининга — 3 года. Женщинам с отрицательным результатом цитологического исследования, но положительным тестом на ВПЧ онкогенных типов, рекомендуется повторить оба теста через 6-12 месяцев: если при повторном обследовании результат какого-либо теста окажется положительным, показано проведение кольпоскопии [13].

В Европе вопрос о применении теста на ВПЧ в первичном скрининге находится в стадии актив-

Таблица 3

Распространенность онкогенных типов ВПЧ по превалирующему типу

Тип BOT Норма (n = 57) LSIL (n=24) HSIL (n=46) Рак (n=65)

Кол-во % Кол-во % Кол-во % Кол-во %

16 23 40 16 67 32 70 43 66

1S 4 7 1 4 — — 6 9

З1 7 12 1 4 5 11 5 S

ЗЗ 2 4 1 4 2 4 З 5

З5 1 2 — — 2 4 1 2

З9 1 2 1 4 — — — —

45 З 5 — — 1 2 6 9

56 7 12 2 S 2 4 — —

Другие 9 16 2 S 2 4 1 2

5S S 14 З ІЗ 2 4 6 9

59 0 — 2 S 0 — 1 2

ного обсуждения. Относительно невысокая специфичность теста на ВПЧ удерживает многие европейские агентства по изучению рака от включения теста на ВПЧ в скрининг, особенно в странах, где успешно действуют скрининговые программы на основе цитологии. Невысокие показатели специфичности и прогностической значимости положительных результатов обусловлены тем, что у большинства женщин (около 80 %), особенно молодых, ПВИ носит транзиторный характер.

Основным аргументом сторонников использования теста на ВПЧ в первичном скрининге является то, что высокая чувствительность и прогностическая значимость отрицательных результатов позволяют существенно увеличить интервал скрининга для женщин, у которых ВПЧ не обнаружен [5]. Для повышения специфичности тестирования на ВПЧ предлагается несколько подходов. Один из них — использовать цитологический метод как дополнительный у женщин с положительным тестом на ДНК ВПЧ [14]. Еще один подход заключается в повторном тестировании на ВПЧ с интервалом 6-12 месяцев. Показано, что у женщин с персистирующей ПВИ риск развития рака во много раз выше, чем у женщин с транзи-торной инфекцией [8]. Наиболее эффективным методом выявления персистенции вируса является генотипирование, так как тестирование на ВПЧ без определения типа не позволяет дифференцировать персистенцию и реинфекцию.

В качестве одного из критериев клинически значимой инфекции, способной развиться в заболевание, рассматривается вирусная нагрузка, хотя ее прогностическая ценность на сегодняшний день однозначно не определена. Так, Dalstein V. и соавт. (2003) с помощью метода Hybrid Capture II показали, что показатель спонтанной элиминации вируса был выше в случаях ПВИ с более низкой

вирусной нагрузкой [21]. Прогрессия заболевания имела место только в случаях персистенции ВПЧ, а риск прогрессии был связан с высокой вирусной нагрузкой. Авторы работы заключили, что высокая вирусная нагрузка может использоваться в качестве прогностического маркера, хотя низкая нагрузка не исключает прогрессию заболевания. Ассоциация вирусной нагрузки со стадией заболевания была также установлена в работе D. M. Hernandez и соавт. [2]. В противоположность этому, Szoke K. и соавт. (2003), изучая факторы риска неопластической прогрессии также с использованием Hybrid Capture II, показали, что высокая вирусная нагрузка не предсказывала онкогенной прогрессии [15].

Swan D. C. с соавт. (1999), сравнивая возможности разных методов при определении вирусной нагрузки, отметили, что ни один из применяемых в настоящее время методов не позволяет оценить количество копий ДНК вируса с такой точностью, как метод ПЦР в реальном времени [10]. С помощью этого метода они исследовали связь между количеством копий ДНК ВПЧ 16, 18, 31 и 45-го типов и степенью дисплазии и показали, что среднее число копий ДНК существенно варьировало в зависимости от типа ВПЧ, причем самые высокие показатели вирусной нагрузки были зарегистрированы для ВПЧ 16-го типа. Так, у пациентов с CIN 2 и CIN 3, инфицированных ВПЧ 16-го типа. среднее число копий ДНК вируса в 4-6 тысяч раз превышало среднее число копий ДНК ВПЧ 18, 31 и 45-го типов, обнаруженных у пациентов с той же степенью заболевания. Кроме того, среднее количество копий ДНК ВПЧ 16-го типа резко возрастало с увеличением степени дисплазии: если в случаях цитологической нормы оно составляло 2,2 х 107 копий вирусной ДНК на 1 мкг клеточной ДНК, то у пациентов с CIN 1 — 4,1 х 107, а у паци-

ентов с CIN 2 и CIN 3 — 1,3 х 109. Интересно отметить, что для других типов вируса такой связи выявлено не было.

Аналогичные данные были получены нами при определении количества копий ДНК ВПЧ 16, 18, 31, 33, 35, 39, 45 и 56-го типов: ассоциация вирусной нагрузки с тяжестью заболевания была показана только для 16-го типа.

Исследуя связь между количеством копий ДНК ВПЧ 16-го типа и степенью дисплазии, Peitsaro P. с соавт. (2002) также пришли к выводу, что прогрессия заболевания тесно связана с вирусной нагрузкой [20]. Авторы высказали предположение, что первоначально большое число копий генома ВПЧ увеличивает вероятность интеграции вирусной ДНК в геном хозяина и, как следствие, развития заболевания.

В нашем исследовании 63 % пациенток были инфицированы двумя и более типами вируса, и показатель множественной ПВИ (инфекции, вызванной одновременно несколькими типами ВПЧ) возрастал со степенью дисплазии. На сегодняшний день не существует также единого мнения о значимости множественной ПВИ для неопластической прогрессии. Так, в работе Swan D. C. с соавт. (1999) было показано, что количество проб, содержащих ДНК ВПЧ нескольких онкогенных типов, увеличивалось в процентном отношении с возрастанием степени дисплазии [10]. В противоположность этому, согласно данным Perovic M. C. с соавт. (2003), множественная ПВИ чаще встречалась в случаях дисплазии легкой степени [9]. Корреляция степени дисплазии и инфекции, вызванной несколькими типами ВПЧ, была показана в работе Fife K. H. с соавт. [6]. Lee S. A. с соавт. (2003), изучая частоту встречаемости множественной ПВИ с помощью олигонуклеотидных чипов, также пришли к выводу, что инфицирование несколькими типами ВПЧ было ассоциировано с повышенным риском развития РШМ [17]. Rolon P. A. и соавт. (2000), напротив, не выявили статистически значимых различий в риске развития РШМ среди женщин, инфицированных одним типом ВПЧ, и женщин, инфицированных несколькими типами вируса [11]. В работе Rousseau M. C. с соавт. (2003) было показано, что персистенция ПВИ не зависела от того, одним или несколькими типами ВПЧ была инфицирована женщина на «базовой линии», то есть в самом начале наблюдения [23].

Исследуя разнообразие типов ВПЧ в обычной скрининговой популяции и ассоциацию множественной инфекции с цервикальной неоплазией, Cuschieri K. S. с соавт. (2004) выявили высокую частоту встречаемости множественной ПВИ вне зависимости от степени дисплазии [16]. Анализ

полученных данных показал, что инфицирование несколькими онкогенными типами ВПЧ не является лучшим прогностическим индикатором развития дисплазии высокой степени по сравнению с инфицированием одним онкогенным типом вируса. Кроме того, случаи инфицирования несколькими типами ВПЧ чаще встречались среди женщин молодого возраста. По мнению авторов, это свидетельствует о том, что трансмиссия множественной ПВИ ассоциирована с более высокой сексуальной активностью. На основании полученных результатов авторы пришли к заключению, согласующемуся с мнением авторов более раннего исследования [24], что различные типы ВПЧ не кооперируют в неопластической трансформации. Ранее Thomas K. K. с соавт. (2000), изучая множественную ВПЧ-инфекцию, не обнаружили такого сочетания типов ВПЧ, которое при передаче имело бы преимущество перед другим сочетанием типов ВПЧ [4]. Кроме того, они показали, что риск инфицирования новым типом вируса не был меньше, если женщина ранее была инфицирована ВПЧ. Таким образом, множественная ПВИ, возможно, лишь отражает обычную сексуальную трансмиссию одновременно нескольких типов ВПЧ.

Как известно, развитие тяжелой дисплазии возможно только у женщин с персистирующей ПВИ [8]. Наиболее эффективным методом установления персистенции ВПЧ является генотипи-рование вируса, позволяющее дифференцировать персистирующую инфекцию от реинфекции. Типоспецифическая персистенция и высокая вирусная нагрузка как факторы риска неопластической прогрессии активно изучаются, однако их использование в клинической практике в настоящее время представляется проблематичным. Во-первых, на сегодняшний день опубликовано недостаточно данных относительно клинической значимости динамических маркеров перси-стенции ВПЧ, и практически все исследования сосредоточены на ВПЧ 16-го типа. Во-вторых, в отсутствие стандартизованной методологии определения концентрации вирусной ДНК динамические измерения вирусной нагрузки, а также установление клинически значимой пороговой концентрации не могут считаться вполне корректными.

В данной работе мы представили первые результаты исследования по определению прогностической значимости персистенции ВПЧ. Несмотря на ограниченность выборки (повторный материал был получен от 45 пациенток), уже можно сделать вывод, что типоспецифическая персистенция ДНК ВПЧ высокого риска, определяемая генотипированием, указывает на повы-

шенный риск развития цервикальной неоплазии. Определение генотипа вируса и количества вирусной ДНК в пробах, взятых с определенным интервалом, позволят, во-первых, дифференцировать персистирующую инфекцию от реинфекции, во-вторых, прогнозировать элиминацию вируса (при значительном снижении концентрации вирусной ДНК), либо персистенцию ВПЧ и риск прогрессии заболевания. Очевидно, что для адекватной интерпретации динамических показателей необходимо использовать методы, позволяющие определять концентрацию вирусной ДНК, строго нормированную на количество клеток в клинической пробе. Если учесть, что исследования для выявления ВПЧ становятся важным элементом в скрининге цервикальных неоплазий и рака шейки матки, необходимость дальнейшего изучения данного аспекта не вызывает сомнений.

Литература

1. ACOG: ACOG Practice Bulletin: clinical management guidelines for obstetrician-gynecologists. Number 45, August 2003. Cervical cytology screening (replaces committee opinion 152, March 1995) // Obstet. Gynecol. — 2003. — Vol. 102. — P. 417-427.

2. Association between high-risk human papillomavirus DNA load and precursor lesions of cervical cancer in Mexican women / Hernandez-Hernandez D. M., Ornelas-Bernal L.: Guido-Jimenez M. [et al.] // Gynecol. Oncol. — 2003. — Vol. 90. — P. 310-317.

3. Comprehensive Cervical Cancer Control. A guide to essential practice: World Health Organization. — Geneva: WHO, 2006.

4. Concurrent and sequential acquisition of different genital human papillomavirus types / Thomas K. K., Hughes J. P., Kuypers J. M. [et al.] // J. Infect. Dis. — 2000. — Vol. 182. — P. 1097-1102.

5. Cuzick, J. Role of HPV testing in clinical practice / Cuzick J // Virus Res. — 2002. — Vol. 89. — P. 263-269.

6. Detection of multiple human papillomavirus types in the lower genital tract correlates with cervical dysplasia / Fife K. H., Cramer H. M., Schroeder J. M. [et al.] // J. Med. Virol. — 2001. — Vol. 64. — P. 550-559.

7. Effect of screening on incidence of and mortality from cancer of cervix in England: evaluation based on routinely collected statistics / Quinn M., Babb P., Jones J. [et al.] // BMJ. — 1999. — Vol. 318. — P. 3.

8. Effects of HPV detection in population-based screening programmes for cervical cancer; a Dutch moment / Bekkers R. L., Meijer C. J., Massuger L. F. [et al.] // Gynecol. Oncol. — 2006. — Vol. 100. — P. 451-454.

9. High-risk human papillomavirus (HPV) types in patients with squamous intraepithelial lesions (SIL) / Perovic M. V., Berisavac M. J., Kuljic-Kapulica N. [et al.] // Eur. J. Gynaecol. Oncol. — 2003. — Vol. 24. — P. 178-180.

10. Human papillomavirus (HPV) DNA copy number is dependent on grade of cervical disease and HPV type / Swan D. C.: Tucker R. A., Tortolero-Luna G. [et al.] // J. Clin. Microbiol. — 1999. — Vol. 37. — P. 1030-1034.

11. Human papillomavirus infection and invasive cervical cancer in Paraguay / Rolon P. A., Smith J. S., Munoz N. [et al.] // Int. J. Cancer. — 2000. — Vol. 85. — P. 486-491.

12. Human papillomavirus testing for primary cervical cancer screening / Dalstein V., Bory J., Graesslin O. [et al.] // Emerging issues on HPV infections: from science to practice / Ed. Monsonego J. — Basel: Karger, 2006. — P. 103-119.

13. Interim guidance for the use of human papillomavirus DNA testing as an adjunct to cervical cytology for screening / Wright T. C., Schiffman M., Solomon D. [et al.] // Obstet. Gynecol. — 2004. — Vol. 103. — P. 304-309.

14. Lorincz, A. T. Screening for cervical cancer: new alternatives and research / Lorincz A. T. // Salud. Publica Mex. — 2003. — Vol. 45, suppl. 3. — P. 376-387.

15. Moderate variation of the oncogenic potential among high-risk human papillomavirus types in gynecologic patients with cervical abnormalities / Szoke K., Sapy T., Krasznai Z. [et al.] // J. Med. Virol. — 2003. — Vol. 71. — P. 585-592.

16. Multiple high risk HPV infections are common in cervical neoplasia and young women in a cervical screening population / Cuschieri K. S., Cubie H. A., Whitley M. W. [et al.] // J. Clin. Pathol. — 2004. — Vol. 57. — P. 68-72.

17. Multiple HPV infection in cervical cancer screened by HPV DNA Chip / Lee S. A., Kang D., Seo S. S. [et al.] // Cancer Lett. — 2003. — Vol. 198. — P. 187-192.

18. New dimensions in cervical cancer screening / Cuzick J., Mayarand M. H., Ronco G. [et al.] // Vaccine. — 2006. — Vol. 24, suppl. 3. — S. 3. P. 90-97.

19. Nuovo, J. New tests for cervical cancer screening / Nuovo J., Melnikow J., Howell L. P. // Am. Fam. Physician. — 2001. — Vol. 64. — P. 780-786.

20. Peitsaro, P. Integrated human papillomavirus type 16 is frequently found in cervical cancer precursors as demonstrated by a novel quantitative real-time PCR technique / Peitsaro P., Johansson B., Syrjanen S. // J. Clin. Microbiol. ■— 2002. — Vol. 40. — P. 886-891.

21. Persistence and load of high-risk HPV are predictors for development of high-grade cervical lesions: a longitudinal French cohort study / Dalstein V., Riethmuller D., Pretet J. L. [et al.] // Int. J. Cancer. — 2003. — Vol. 106. — P. 396-403.

22. Petry, U. A. German project uses HPV-testing as primary screening test in the prevention of cervical cancer / Petry U. A. // HPV Today. — 2006. — Vol. 9. — P. 7.

23. Predictors of cervical coinfection with multiple human papillomavirus types / Rousseau M. C., Abrahamowicz M., Villa L. L. [et al.] // Cancer Epidemiol. Biomarkers Prev. — 2003. — Vol. 12. — P. 1029-1037.

24. The viral origin of cervical cancer in Rabat, Morocco / Chaouki N., Bosch F. X., Munoz N. [et al.] // Int. J. Cancer. — 1998. — Vol. 75. — P. 546-554.

Статья представлена А. Р. Хачатурян

НИИ акушерства и гинекологии им. Д. О. Отта РАМН,

Санкт-Петербург

MARKERS OF HUMAN PAPILLOMAVIRUS INFECTION IN SCREENING FOR CERVICAL CANCER

Zolotoverkhaya E., Shipitsyna E., Yusmanova E., Savicheva A.

■ Summary: The aim of this study was to investigate an association of high viral load of oncogenic human papillomavirus (HPV) types and HPV persistence with an increased risk of cervical neoplastic progression. With the use of quantitative polymerase chain reaction, clinical samples obtained from 192 patients who were positive for high-risk HPV types were analysed and HPV 16 was detected in 76 % of the patients. HPV 16, 18, 31, 33 and 45 are responsible for 97 % of cervical cancer. HPV 16 viral load was associated with the severity of the disease.

■ Key words: human papillomavirus; cervical cancer; cervical intraepithelial neoplasia; viral load.

■ Адреса авторов для переписки———————————————————————————————————-

Золотоверхая Екатерина Андреевна — научный сотрудник лабора- Zolotoverkhaya Ekaterina — researcher. тории микробиологии E-mail: [email protected]

Савичева Алевтина Михайловна — д. м. н., руководитель лаборатории микробиологии, профессор E-mail: [email protected]

ГУ НИИ акушерства и гинекологии им. Д. О. Отта РАМН, D. O. Ott RI of Obstetrics and Gynecology, Laboratory of

199034 Россия, Санкт-Петербург, Менделеевская линия, д. 3 Microbiology, 199034 Russia, St. Petersburg, Mendeleyevskaya Line, 3

Услуги

ВИРУСЫ ПАПИЛЛОМЫ ЧЕЛОВЕКА – ВПЧ, HUMAN PAPILLOMAVIRUS

Известно около 100 различных типов ВПЧ. Онкогенный потенциал в большей степени связан с типом ВПЧ. К высокому онкогенному риску относятся типы 16, 18, 31, 33, 35, 39, 45, 52, 56, 58, 59, 66. К числу часто встречающихся типов ВПЧ относятся также разновидности низкого онкогенного риска – 6, 11, 44.

Ткани гениталий могут быть одновременно инфицированы несколькими типами ВПЧ.

Несмотря на присутствие вируса папилломы человека, только у незначительной части инфицированных развивается злокачественное прогрессирование опухоли. В связи с этим учитываются инициирующие факторы онкогенной трансформации, к которым относятся тип ВПЧ, инфицирование несколькими типами, сочетанное инфицирование другими онкогенными вирусами, такими как вирусы герпеса.

Кофактором в генезе ВПЧ-ассоциированной неоплазии являются также нарушения клеточного иммунитета, что в значительной степени может быть результатом сочетания с инфекциями, передающимися половым путем, такими как хламидии, уреаплазмы и микоплазмы, грибы рода Candida, трихомонады и др.

Диагностические методы требуют максимально раннего определения присутствия вируса папилломы в аногенитальной области с тестированием серотипов ВПЧ с онкогенным потенциалом.

Особого внимания заслуживает метод ПЦР-диагностики, позволяющий выявлять ДНК вирусов папилломы человека с типированием различных серотипов, осуществлять диагностику латентной папилломавирусной инфекции и ранних предраковых поражений в клинически скрытой стадии развития.

Высокая распространенность вируса папилломы человека (ВПЧ) типа 66 в низкоуровневых поражениях шейки матки у мексиканских женщин

Резюме

Предпосылки Инфекции ВПЧ-16 представляют собой самый высокий риск развития рака шейки матки. Однако роль других групп высокого риска все еще остается спорной.

Цель Проанализировать распространенность ВПЧ-ВПЧ и ее возможные связи между ВПЧ и факторами риска, связанными с поражением шейки матки, среди мексиканских женщин.

Методы Поперечное исследование с использованием 362 образцов шейки матки, собранных в период с 2016 по 2017 год.Четырнадцать типов HR-HPV (16, 18, 31, 33, 35, 39, 45, 51, 52, 56, 58, 59, 66 и 68) были обнаружены с помощью высокочувствительной ПЦР-амплификации с последующей обратной гибридизацией. Для изучения связи между типами ВПЧ и факторами риска среди поражений были выполнены двумерный и многомерный анализ.

Результаты Большинство образцов были положительными по HR-HPV (83,43%). ВПЧ-16 был наиболее распространенной инфекцией среди отрицательных интраэпителиальных поражений или злокачественных новообразований (78,6%), плоскоклеточных интраэпителиальных поражений высокой степени (50%) и рака шейки матки (58.2%). ВПЧ-66 показал неожиданно высокую распространенность в атипичных плоскоклеточных клетках неопределенной значимости (50%), плоскоклеточных интраэпителиальных клетках низкой степени (45,7%) и обнаружен только в 3,6% случаев рака шейки матки. ВПЧ-16 был достоверно распространен среди женщин в возрасте от 30 до 39 лет, тогда как типы 66 и 52 были достоверно связаны, когда имело место ранее переданное половым путем заболевание (p <0,05).

Выводы ВПЧ-66 при однократной или совместной инфекции с другими типами ВПЧ-ВПЧ (за исключением 16 и 18) может указывать на непрогрессирующие раковые поражения.Распространенность ВПЧ-66 была необычно высокой при поражениях шейки матки низкой степени злокачественности, преимущественно при коинфекции ВПЧ-51, и очень низкой при раке шейки матки. Это необходимо для интерпретации результатов, полученных методами, которые группируют тип 66 с другими типами HR.

Заявление о конкурирующем интересе

Авторы заявили об отсутствии конкурирующего интереса.

Клиническое исследование

Это трансверсальное исследование было проведено в Instituto Mexicano del Seguro Social (IMSS), Мехико, с номером утверждения 2014-3505-6 Комитетом по этике.Информированное согласие, подписанное каждым участником,

Заявление о финансировании

Этот проект был поддержан отраслевыми фондами КОНАСИТ (FOSISS) SALUD-2014-C01-234198. PROT / FIS / IMSS 1377. Коллективу лаборатории клеточной патологии и молекулярного рака, UIMEO HO. CMN SXXI, IMSS. Эта работа была частично поддержана грантом AG-C от PAPIIT-UNAM (IN213016).

Заявления автора

Все соответствующие этические нормы были соблюдены; были получены все необходимые разрешения IRB и / или комитета по этике, а подробная информация об IRB / надзорном органе включена в рукопись.

Да

Получено все необходимое согласие пациента / участника, и соответствующие институциональные формы заархивированы.

Да

Я понимаю, что все клинические испытания и любые другие проспективные интервенционные исследования должны быть зарегистрированы в одобренном ICMJE реестре, таком как ClinicalTrials.gov. Я подтверждаю, что любое такое исследование, указанное в рукописи, было зарегистрировано и предоставлен идентификатор регистрации испытания (примечание: при публикации проспективного исследования, зарегистрированного ретроспективно, предоставьте заявление в поле идентификатора испытания, объясняющее, почему исследование не было зарегистрировано заранее) .

Да

Я выполнил все соответствующие инструкции по составлению отчетов об исследованиях и загрузил соответствующие контрольные списки отчетов по исследованиям сети EQUATOR и другие соответствующие материалы в качестве дополнительных файлов, если применимо.

Да

Доступность данных

Вся информация о данных VPH 66 находится на SPSS / Base 20 08 19.sav

Высокая частота генотипов ВПЧ 59, 66, 52, 51, 39 и 56 у женщин из Западная Мексика | BMC Инфекционные болезни

Генетическая изменчивость гена L1 вируса папилломы человека типа 66 среди женщин, поступающих на скрининг на рак шейки матки в Чили

Часто задаваемые вопросы о раке шейки матки | Государственная лаборатория гигиены штата Висконсин

Что такое рак шейки матки?

Рак шейки матки – медленное прогрессирующее заболевание.Обычно это начинается с небольшого поражения или роста на шейке матки. Аномальные клетки приобрели способность покидать свое нормальное положение на поверхности и первоначально проникают в более глубокие ткани. Они также приобретают способность распространяться в отдаленные места, путешествуя по кровеносным сосудам или лимфатическим каналам. Местные инвазии и отдаленное распространение опасны для жизни. Существует два основных типа рака шейки матки:

Плоскоклеточный рак (наиболее распространенный рак шейки матки) возникает из плоскоклеточных клеток, покрывающих эктоцервикс и на границе плоских железистых клеток в эндоцервиксе.

Эндоцервикальная аденокарцинома (около 5-10% всех случаев рака шейки матки) возникает из железистых клеток, обнаруженных в эндоцервикальном канале.

Оба типа карциномы шейки матки подчиняются одним и тем же медицинским рекомендациям.

Каковы факторы риска рака шейки матки?

Врачи пока не могут определить, почему один человек заболевает раком, а другой – нет, но существует ряд факторов риска, которые предрасполагают женщин к этому заболеванию. Основными факторами риска являются:

• Инфекция, вызванная вирусом папилломы человека (ВПЧ) (см. Часто задаваемые вопросы о ВПЧ)
• Отсутствие регулярных тестов Папаниколау
  Тест Папаниколау позволяет выявить аномальные клеточные изменения, которые могут быть предраковыми.Если изменение обнаружено на ранней стадии, высока вероятность того, что отклонения можно вылечить и вылечить.
• Ослабленная иммунная система
  Неспособность организма бороться с инфекциями (такими как ВПЧ) может привести к более высокой заболеваемости раком шейки матки.
• Возраст
  Рак шейки матки обычно встречается у женщин старше 40 лет. Статистика развития естественного канцерогенеза показывает, что женщины подвергаются воздействию вируса (ов) ВПЧ в начале половой жизни и в возрасте от двадцати лет.Для большинства иммунная система работает, чтобы избавиться от вируса (ов) в течение двух лет. По какой-то еще не полностью изученной причине некоторые женщины не могут избавиться от вируса (ов) ВПЧ, что приводит к стойкой инфекции ВПЧ, которая приводит к изменениям в ДНК, вызывая предраковые или раковые поражения шейки матки.
• Раннее начало половой жизни
  Начало половой жизни в возрасте до 16 лет подвергает женщину большему риску развития рака шейки матки, вероятно, из-за повышенного риска заражения ВПЧ.
• Много сексуальных партнеров
  Женщина, у которой было много сексуальных партнеров или у которой было много других партнеров, подвержена более высокому риску развития рака шейки матки. Имейте в виду, что половые партнеры половых партнеров увеличивают риск в геометрической прогрессии.
• Курение сигарет
  Было обнаружено, что курящие женщины имеют повышенный риск рака шейки матки по сравнению с женщинами, которые не курят.
• Использование противозачаточных таблеток в течение длительного времени
  Этот фактор риска до конца не изучен, но исследования показали, что длительное использование противозачаточных таблеток является фактором риска рака шейки матки.Кроме того, исследования также показали, что противозачаточные таблетки могут снизить риск рака яичников.
• Повторнородящие женщины
  Некоторые исследования показывают, что женщины, у которых много родов, имеют повышенный риск рака шейки матки.

Что такое предраковые поражения и что их вызывает?

Предраковые поражения частично являются результатом инфекции ВПЧ. Под этим заголовком попадают аномальные клеточные изменения, отмеченные при мазке Папаниколау.Предраковые поражения более конкретно определяются как плоскоклеточные интраэпителиальные поражения высокой степени злокачественности (HSIL). Небольшой процент этих поражений, если их не лечить, может стать злокачественным.

Что такое плоскоклеточные интраэпителиальные поражения?

Эти плоскоклеточные интраэпителиальные поражения (SIL) имеют диагноз низкой (LSIL) или высокой (HSIL) степени:

Низкий уровень SIL представляет микроскопические изменения в клетках, которые отражают инфекцию ВПЧ низкого риска. Эти изменения часто проходят без лечения и никогда не перерастают в серьезное поражение.Эти изменения также могут быть обнаружены в связи с поражениями высокой степени злокачественности (HSIL) из-за воздействия ВПЧ высокого риска. Следовательно, важно следить за LSIL дополнительными мазками Папаниколау и / или кольпоскопией и биопсией. Некоторые лабораторные отчеты и врачи называют эти изменения легкой дисплазией, легкой дисплазией с ВПЧ или CIN 1 (цервикальная интраэпителиальная неоплазия). Соответствующий диагностический результат биопсии – CIN1 (цервикальная интрапителиальная неоплазия, легкая дисплазия).

High-grade SIL представляет клетки с или более серьезными аномалиями и имеют больше шансов перерасти в рак.Если не лечить, HSIL обычно перерастает в рак. Поэтому обязательно следовать указаниям врача о вариантах лечения. В некоторых отчетах о патологии и врачи называют эти изменения умеренной или тяжелой дисплазией или карциномой in situ. Соответствующие результаты биопсии ткани – CIN2 или CIN3 соответственно.

Каковы симптомы рака шейки матки?

• Аномальное вагинальное кровотечение – наиболее частый симптом
  • Кровотечение между регулярными менструациями
  • Кровотечение после полового акта
  • Кровотечение после спринцевания
  • Менструальный цикл, который стал обильнее и продолжительнее, чем раньше
  • Кровотечение после менопаузы
• Обильные выделения из влагалища
• Боль в тазу
• Боль при половом акте

Можно ли предотвратить рак шейки матки?

Рак шейки матки можно предотвратить с помощью скрининга и вакцинации.Вакцина представляет собой серию из трех прививок, наиболее эффективную при введении до начала половой жизни. Вакцина одобрена как для девочек, так и для мальчиков в возрасте от 9 до 26 лет.

На рынке представлены две вакцины. Гардасил (Merck and Company) – квадравалентная вакцина, обеспечивающая иммунитет к двум типам генотипов ВПЧ высокого риска (16 и 18) и двум типам генотипов ВПЧ низкого риска (6 и 11, которые связаны с остроконечными кондиломами). Церварикс (GSK) защищает от двух типов вируса папилломы человека высокого риска (16 и 18).

Национальный институт здоровья сообщает, что лучший способ предотвратить рак шейки матки – это его раннее выявление. Регулярное ежегодное обследование органов малого таза и мазок Папаниколау позволяют врачам обнаружить аномальные изменения шейки матки.

Скрининг мазка Папаниколау для выявления предраковых изменений шейки матки до появления симптомов очень важен. Когда эти аномальные клетки обнаруживаются, можно начинать лечение и, таким образом, предотвращать большинство случаев рака шейки матки. Кроме того, скрининг может выявить рак на ранних стадиях, когда лечение с большей вероятностью вылечит рак.

Скрининг женщин с помощью мазка Папаниколау был очень эффективным. С каждым годом количество женщин, у которых диагностирован рак шейки матки, падает. Врачи считают, что это во многом связано с успехом теста Папаниколау.

Излечим ли рак шейки матки?

Рак шейки матки когда-то был ведущей причиной смерти от рака, но сегодня рак шейки матки почти полностью излечим, если его выявить на ранней (предраковой) стадии.

Если рак шейки матки обнаружен на запущенной стадии, его труднее лечить.Если болезнь не метастазировала (не распространилась) в окружающие органы, то показатель излечения составляет 90%. Если метастаз произошел, скорость излечения будет зависеть от того, насколько далеко распространился рак, то есть от стадии рака.

Разработаны ли новые технологии для скрининга рака шейки матки?

Мазок Папаниколау в руках опытных, преданных своему делу технологов очень точен и очень эффективен при обнаружении отклонений. Внедряемые новые технологии призваны улучшить методику сбора и оценки мазков Папаниколау, а не заменить их.

Управление по санитарному надзору за качеством пищевых продуктов и медикаментов (FDA) одобрило использование жидких версий мазка Папаниколау: ThinPrep® и Surepath ™. Тест на жидкой основе удаляет избыточные воспалительные клетки, слизь крови и бактерии из клеточного образца и улучшает клеточную обработку. Удаление закупоривающего материала помогает цитотехнологам идентифицировать больший процент клеток с тонкими ядерными аномалиями. Существуют два устройства для автоматизированного скрининга, одобренные FDA: Hologic ThinPrep® Imaging Systems и BD Focal Point GS.Оба используют компьютерную алгоритмическую разработку, чтобы помочь цитотехнологам в оценке Пап-тестов.

– это относительно новая технология молекулярного анализа, которая помогает выявлять женщин с высоким риском развития рака шейки матки. К ним относятся:

• Qiagen HC2 —Использование гибридного захвата для выявления 13 вирусных типов ВПЧ высокого риска (16,18,31,33,35,39,45,51,52,56,58,59). Результаты могут быть положительными, отрицательными или неубедительными.
• Hologic Cervista —Использует технологию захватчиков для идентификации 15 вирусных типов ВПЧ высокого риска (16,18,31,33,35,39,45,51,52,56,58).Этот метод также имеет ген домашнего хозяйства для оценки адекватности.
• Roche cobas® 4800 – Тесты на вирусные типы ВПЧ высокого риска (16,18,31,33,35,39,45,51,52,56,58,59,66,68). Из этих типов 12 делятся на положительные или отрицательные. Типы вирусов 16 и 18 тестируются как индивидуально положительные или отрицательные.
• Hologic / GenProbe Aptima HPV Assay – Этот метод второго поколения нацелен на MRNA E61E7 для 14 типов ВПЧ высокого риска (16,18,31,33,35,39,45,51,52,56,58,59, 66,68).
• PCR – может конкретно идентифицировать любые типы вируса ВПЧ высокого риска, но он не одобрен FDA, стоит дорого и плохо возмещается.

ВПЧ и рак – Национальный институт рака

Что такое ВПЧ (вирус папилломы человека)?

ВПЧ – это группа из более чем 200 родственных вирусов, некоторые из которых передаются через вагинальный, анальный или оральный секс. Типы ВПЧ, передающиеся половым путем, делятся на две группы: низкого риска и высокого риска.

• ВПЧ низкого риска в большинстве случаев не вызывают болезней. Однако некоторые типы ВПЧ с низким риском могут вызывать появление бородавок на половых органах, анусе, рту или горле или вокруг них.
• ВПЧ высокого риска могут вызывать несколько типов рака.Существует около 14 типов ВПЧ высокого риска, включая ВПЧ 16, 18, 31, 33, 35, 39, 45, 51, 52, 56, 58, 59, 66 и 68. Два из них, ВПЧ 16 и ВПЧ 18, несут ответственность для большинства видов рака, связанных с ВПЧ.

Инфекция ВПЧ является обычным явлением: Почти все сексуально активные люди заражаются ВПЧ в течение нескольких месяцев или нескольких лет после начала половой жизни. Примерно половина этих инфекций связана с типом ВПЧ высокого риска.

ВПЧ может инфицировать как мужчин, так и женщин . И мужчины, и женщины могут заразиться ВПЧ и заболеть раком, вызванным ВПЧ.

Большинство инфекций ВПЧ не вызывают рак: Ваша иммунная система обычно контролирует инфекции ВПЧ, поэтому они не вызывают рак.

Постоянные инфекции ВПЧ высокого риска могут вызывать рак: Иногда инфекции ВПЧ не удается успешно контролировать вашей иммунной системой. Когда инфекция ВПЧ высокого риска сохраняется в течение многих лет, это может привести к клеточным изменениям, которые, если их не лечить, могут со временем ухудшиться и перерасти в рак.

Вакцинация против ВПЧ может предотвратить рак: Вакцины против ВПЧ могут предотвратить заражение болезнетворными типами ВПЧ, предотвращая многие виды рака, связанные с ВПЧ, и случаи генитальных бородавок.

Какие виды рака вызывает инфекция ВПЧ?

Длительные инфекции, вызванные ВПЧ высокого риска, могут вызывать рак в тех частях тела, где ВПЧ поражает клетки, например, в шейке матки, ротоглотке (часть горла в задней части рта за полостью рта, которая также включает задняя треть языка, мягкое небо, боковые и задние стенки глотки и миндалины), анус, половой член, влагалище и вульва.

ВПЧ поражает плоскоклеточные клетки, выстилающие внутренние поверхности этих органов.По этой причине большинство раковых заболеваний, связанных с ВПЧ, представляют собой тип рака, называемый плоскоклеточной карциномой. Некоторые виды рака шейки матки возникают в результате инфицирования ВПЧ клеток железы шейки матки и называются аденокарциномами.

раковых заболеваний, связанных с ВПЧ, включают:

В США ВПЧ высокого риска вызывают 3% всех случаев рака у женщин и 2% всех случаев рака у мужчин. По данным Центров по контролю за заболеваниями (CDC), ежегодно регистрируется около 45 000 новых случаев рака в тех частях тела, где часто обнаруживается ВПЧ, и, по оценкам, он вызывает около 36 000 из них.

Во всем мире бремя рака, связанного с ВПЧ, намного больше. ВПЧ высокого риска вызывают около 5% всех онкологических заболеваний во всем мире, при этом ежегодно около 570 000 женщин и 60 000 мужчин заболевают раком, связанным с ВПЧ. Рак шейки матки является одним из наиболее распространенных видов рака и основной причиной смерти от рака в странах с низким и средним уровнем доходов, где скрининговые тесты и лечение ранних изменений клеток шейки матки недоступны.

Как передается ВПЧ?

ВПЧ легко передается между половыми партнерами.Он может передаваться при любом интимном контакте кожа к коже, включая вагинальный секс с половым членом, половой член и анальный секс, половой член и оральный секс, вагинальный оральный секс и использование секс-игрушек или других предметов. Инфекция легко передается между половыми партнерами. Презервативы и зубные прокладки могут снизить вероятность передачи ВПЧ, но не предотвращают ее полностью.

Вызывает ли инфекция ВПЧ симптомы?

Инфекция ВПЧ высокого риска обычно не вызывает симптомов. Предраковые клеточные изменения, вызванные стойкой инфекцией ВПЧ в шейке матки, редко вызывают симптомы, поэтому важен регулярный скрининг на рак шейки матки.Предраковые поражения на других участках тела могут вызывать такие симптомы, как зуд или кровотечение. А если инфекция ВПЧ перерастает в рак, рак может вызывать такие симптомы, как кровотечение, боль или опухание желез. Узнайте больше о признаках и симптомах рака шейки матки, влагалища, вульвы, полового члена, анального канала и ротоглотки.

Вакцинация против ВПЧ: предотвращение инфекции ВПЧ

Вакцина против ВПЧ Гардасил 9® защищает от заражения девятью типами ВПЧ: двумя типами ВПЧ низкого риска, вызывающими большинство остроконечных кондилом, а также семью типами ВПЧ высокого риска, вызывающими большинство видов рака, связанных с ВПЧ.

ВПЧ рекомендована Консультативным комитетом по практике иммунизации (ACIP) Центров по контролю и профилактике заболеваний (CDC) для предотвращения новых инфекций, вызванных ВПЧ, и связанных с ВПЧ раковых и других заболеваний.

Вакцинация против ВПЧ обеспечивает надежную защиту от новых инфекций ВПЧ. Вакцинация – это профилактика, и она не излечивает от инфекции, если она у вас есть. Вакцина против ВПЧ не используется для лечения инфекций ВПЧ или заболеваний, вызванных ВПЧ. Вакцинация против ВПЧ обеспечивает максимальную защиту в возрасте 9–12 лет.По оценкам, вакцинация против ВПЧ предотвращает до 90% случаев рака, связанных с ВПЧ.

Кому следует сделать вакцину против ВПЧ?

Серия вакцинации против ВПЧ рекомендуется девочкам и мальчикам в возрасте 11 или 12 лет, а серию можно начинать в возрасте 9 лет. Важно пройти вакцинацию как для мужчин, так и для женщин, поскольку как мужчины, так и женщины могут развиваться. рак ротовой полости и горла, рак заднего прохода и остроконечные кондиломы. Женщины также подвержены риску рака шейки матки, а мужчины – рака полового члена. Вакцинация также может уменьшить распространение вируса папилломы человека, вызывающего рак, среди других людей.

Детям, начавшим вакцинацию в возрасте до 15 лет, для защиты необходимы две дозы. Молодым людям, которые не были вакцинированы в соответствии с рекомендованным возрастом, вакцинация против ВПЧ рекомендуется до 26 лет. Тем, кто получает первую дозу в возрасте 15 лет и старше, необходимо три дозы для защиты.

Можно ли делать вакцину против ВПЧ в более старшем возрасте?

Да, вакцину можно вводить взрослым в возрасте от 27 до 45 лет, которые ранее не получили все дозы вакцины. Взрослые в этой возрастной группе получают меньшую пользу от вакцины, потому что они с большей вероятностью уже подверглись воздействию ВПЧ.Поэтому вакцинация обычно не рекомендуется людям этой возрастной группы. Если вы обеспокоены тем, что подвергаетесь риску новой инфекции ВПЧ, обсудите со своим врачом, подходит ли вам вакцинация против ВПЧ.

Узнайте больше о вакцине против вируса папилломы человека (ВПЧ).

Скрининг на ВПЧ и изменения клеток, вызванные ВПЧ

Скрининговые тесты используются для выявления болезни при отсутствии симптомов. Целью скрининга рака шейки матки является обнаружение предраковых клеточных изменений на ранней стадии, до того, как они перерастут в рак, и когда лечение может предотвратить его развитие.

В настоящее время рак шейки матки – единственный рак, вызванный ВПЧ, для которого доступны скрининговые тесты, одобренные FDA. Скрининг на рак шейки матки – важная часть повседневной медицинской помощи людям с шейкой матки. Сюда входят женщины и трансгендерные мужчины, у которых еще есть шейка матки. Скрининговые тесты на рак шейки матки включают тест на ВПЧ, который проверяет клетки шейки матки на наличие ВПЧ высокого риска, тест Папаниколау, который проверяет изменения клеток шейки матки, которые могут быть вызваны ВПЧ высокого риска, и котест ВПЧ / Пап, который проверяет оба фактора высокого риска. ВПЧ и изменения клеток шейки матки.

Узнайте больше о ВПЧ и Пап-тесте и узнайте о следующих шагах после аномального Пап-теста или положительного теста на ВПЧ.

Иногда инфекция ВПЧ может снова активизироваться через много лет. Узнайте больше о том, что означает положительный результат теста на ВПЧ у женщины после многих лет отрицательных результатов.

Скрининг других онкологических заболеваний, связанных с ВПЧ

Не существует утвержденных Управлением по санитарному надзору за качеством пищевых продуктов и медикаментов (FDA) тестов для выявления инфекций ВПЧ или вызванных ВПЧ клеточных изменений в тканях анального канала, вульвы, влагалища, полового члена или ротоглотки.Исследования продолжаются, чтобы определить тесты, которые могут обнаружить предраковые заболевания в этих областях или обнаружить рак на более ранней, более поддающейся лечению стадии.

Скрининг рака анального канала: Среди групп населения, подверженных более высокому риску заражения ВПЧ, таких как мужчины, практикующие секс с мужчинами или мужчины, инфицированные ВИЧ, некоторые исследования показали, что анальный мазок Папаниколау (также называемый мазком Папаниколау из анального канала) может помочь обнаружить ранние клеточные изменения или предраковые клетки. Исследования продолжаются, чтобы увидеть, предотвращает ли лечение анального предрака анальный рак.

Узнайте больше о профилактике рака анального канала (PDQ®).

Скрининг на рак ротовой полости: В настоящее время не существует стандартных скрининговых тестов на рак ротовой полости. Целевая группа профилактических служб США (USPSTF) обнаружила, что имеющихся данных недостаточно для оценки баланса пользы и вреда от скрининга на рак полости рта у бессимптомных взрослых. Тем не менее, Американская стоматологическая ассоциация (ADA) рекомендует стоматологам проверять наличие признаков рака полости рта и ротоглотки в рамках обычного стоматологического осмотра у всех пациентов.

Узнайте больше о скрининге рака полости рта, глотки и гортани (PDQ®) и о симптомах в программе лечения рака ротоглотки (взрослые) (PDQ®).

Лечение клеточных изменений, вызванных инфекцией ВПЧ

Хотя сама инфекция ВПЧ не поддается лечению, существуют методы лечения предраковых клеточных изменений, вызванных инфицированием ВПЧ высокого риска.

Предраковые изменения клеток шейки матки : Большинство женщин с предраковыми изменениями клеток шейки матки проходят процедуру электрохирургического удаления петли (LEEP), которая представляет собой метод удаления аномальной ткани.

Узнайте больше о лечении аномальных изменений клеток шейки матки.

Предраковые поражения влагалища, вульвы, полового члена и ануса, а также остроконечные кондиломы : Методы лечения включают лекарственные препараты местного действия, хирургическое удаление, криохирургию и лазерную терапию.

Раки, связанные с ВПЧ: Лица, у которых развивается рак, связанный с ВПЧ, обычно получают такое же лечение, что и пациенты с опухолями в том же месте, которые не связаны с инфекцией ВПЧ. Однако пациенты с ВПЧ-положительным раком ротоглотки могут получать другое лечение, чем пациенты, у которых рак ротоглотки не вызван ВПЧ .

Узнайте больше о вариантах лечения рака ротоглотки, включая таргетную терапию и новые виды лечения, такие как иммунотерапия, которые проходят клинические испытания.

Как ВПЧ вызывает рак?

ВПЧ вызывает изменения в клетках. Если не лечить эти клетки, со временем они могут превратиться в раковые.

Кредит: Национальный институт рака

Как только ВПЧ высокого риска заражает клетки, он мешает способам взаимодействия этих клеток друг с другом, вызывая неконтролируемое размножение инфицированных клеток.Эти инфицированные клетки обычно распознаются и контролируются иммунной системой. Однако иногда инфицированные клетки остаются и продолжают расти, в конечном итоге формируя область предраковых клеток, которые, если их не лечить, могут стать раком. Исследования показали, что инфицированным ВПЧ клеткам шейки матки может потребоваться от 10 до 20 лет, а то и больше, чтобы превратиться в раковую опухоль.

Среди женщин, чьи клетки шейки матки инфицированы ВПЧ высокого риска, несколько факторов увеличивают вероятность того, что инфекция будет длительной и приведет к образованию предраковых клеток шейки матки.К ним относятся:

• Наличие очень агрессивного типа ВПЧ, особенно ВПЧ 16 или ВПЧ 18. Если у вас один из этих типов ВПЧ, убедитесь, что вы прошли диагностическое обследование с помощью кольпоскопии.
• Курение сигарет. Отказ от курения может помочь вашему организму бороться с ВПЧ.
• Имея ослабленную иммунную систему. Если у вас ВИЧ или вы принимаете лекарства, подавляющие вашу иммунную систему, поговорите со своим врачом о диагностическом тестировании и последующем наблюдении.

Исследования, связанные с ОКИ и ВПЧ

Клинические испытания – важный шаг в изучении более эффективных способов предотвращения, диагностики и лечения заболеваний, таких как рак, вызванный ВПЧ.Информационная служба рака NCI может помочь вам узнать об испытаниях, связанных с ВПЧ, в Соединенных Штатах.

Национальный институт рака проводит и финансирует исследования, чтобы узнать больше о ВПЧ:

• Отдел эпидемиологии и генетики рака (DCEG) проводит исследования рака шейки матки и других видов рака, связанных с ВПЧ, чтобы углубить наше понимание того, как ВПЧ вызывает рак, оценивает методы скрининга для определения наиболее эффективных методов раннего выявления, развития и тестирования предраковых изменений новые подходы к скринингу, которые может быть проще использовать в условиях ограниченных ресурсов, и доработанные инструменты для оценки риска в клинике, чтобы помочь поставщикам медицинских услуг отслеживать отклонения от нормы результатов скрининговых тестов.Исследователи DCEG провели первое популяционное клиническое испытание вакцин против ВПЧ.
• Отдел профилактики рака (DCP) проводит и способствует развитию исследований по профилактике и раннему выявлению рака, связанного с вирусом папилломы человека (ВПЧ), и связанных с ним состояний.
• Отдел борьбы с раком и популяционных наук (DCCPS) поддерживает проверенные исследованиями программы вмешательства, связанные с ВПЧ, и исследование стратегий внедрения для продвижения вакцины против ВПЧ в регионах с низким уровнем вакцинации против ВПЧ.
• Центр исследований рака (CCR) является домом для ученых и клиницистов, которые изучают самые современные исследования, связанные с раком. Ученые CCR работают над широким спектром биологических и биомедицинских проблем, включая HPV. Исследователи CCR провели исследование, которое привело к первоначальной разработке и характеристике вакцин против вируса папилломы человека (ВПЧ).

Тест на вирус папилломы человека (ВПЧ) – понимание теста и ваших результатов

Вирус папилломы человека (ВПЧ) – это группа из более чем 150 родственных вирусов.Некоторые типы ВПЧ относятся к группе высокого риска, потому что они могут вызывать рак. Тестирование на ВПЧ позволяет выявлять генетический материал (ДНК или информационную РНК) ВПЧ высокого риска (hrHPV), в первую очередь для выявления рака шейки матки или для определения того, подвержены ли вы риску рака шейки матки.

Некоторые типы ВПЧ могут вызывать кожные бородавки, тогда как другие типы могут вызывать остроконечные кондиломы (также называемые кондиломами). Генитальная инфекция ВПЧ – одно из наиболее распространенных заболеваний, передающихся половым путем (т. Е. Передается через оральный, анальный или генитальный секс).По данным Центров США по контролю и профилактике заболеваний, около 79 миллионов американцев инфицированы ВПЧ, и более 14 миллионов заражаются ежегодно.

• ВПЧ низкого риска – некоторые штаммы ВПЧ вызывают остроконечные кондиломы, но редко вызывают рак. ВПЧ 6 и ВПЧ 11 вызывают 90% всех остроконечных кондилом, но считаются «низким риском», поскольку редко приводят к раку. Эти типы с низким уровнем риска могут быть диагностированы путем визуального осмотра и, следовательно, не требуют тестирования.
• ВПЧ высокого риска – существует 14 типов ВПЧ высокого риска, которые могут привести к раку (16, 18, 31, 33, 35, 39, 45, 51, 52, 56, 58, 59, 66 и 68). .Два типа ВПЧ, 16 и 18, вызывают 80% всех случаев рака шейки матки. Эти типы высокого риска могут быть обнаружены с помощью теста на ВПЧ.

Многие инфекции ВПЧ проходят без лечения – организм может избавиться от инфекции. Однако неизлечимые инфекции с типами ВПЧ высокого риска могут привести к раку шейки матки. Почти все виды рака шейки матки вызваны стойкими инфекциями, вызываемыми ВПЧ высокого риска. Ежегодно около 12000 женщин в США заболевают раком шейки матки, и ожидается, что около 4000 умрут от него.

Кроме того, некоторые исследования также показали, что стойкие инфекции полости рта с типами ВПЧ высокого риска тесно связаны с раком полости рта, включая рак ротовой полости и горла (рак ротоглотки). Рак анального канала также связан с типами ВПЧ 16 и 18. Эти типы также связаны с другими видами рака, такими как рак влагалища и полового члена.

Распространенность ВПЧ и выявление редких генотипов ВПЧ у женщин из Гонконга из Южного Китая с цитологическими аномалиями

Вирус папилломы человека (ВПЧ) был определен как основная причина плоскоклеточного интраэпителиального поражения шейки матки и инвазивного рака шейки матки.Появление различных коммерческих наборов для генотипирования ВПЧ с различными характеристиками облегчает выявление генотипов ВПЧ с наибольшим и низким риском, но редкие типы ВПЧ обычно не диагностируются. В настоящем исследовании обнаружение ВПЧ выполнялось с использованием набора GenoFlow HPV Array Test (DiagCor Bioscience), который может идентифицировать 33 подтипа ВПЧ с помощью определенных зондов. Кроме того, был разработан консенсусный зонд HPV (универсальный зонд) для захвата не только 33 генотипов, но и редких подтипов. Из 1643 южнокитайских женщин, прошедших тестирование в период с 2012 по 2013 год, распространенность ВПЧ составила 42.3%, причем наиболее частыми обнаруживаемыми подтипами являются ВПЧ 52 (139/1643, 8,5%), ВПЧ 81 (89/1643, 5,4%) и ВПЧ 16 (63/1643, 3,8%). Из всех 695 HPV-положительных случаев 56 (8,1%) случаев были обнаружены только универсальным зондом, из которых 5 были случаями ASCUS или LSIL. Результаты секвенирования подтвердили, что типы ВПЧ 30, 91 и 74, а интратипические варианты ВПЧ 72 и 82 присутствовали в 5 случаях. Результат предполагает, что некоторые редкие подтипы ВПЧ могут быть вовлечены в поражения шейки матки.

1. Введение

Инфекция, вызванная вирусом папилломы человека (ВПЧ), является наиболее распространенной инфекцией, передаваемой половым путем.На сегодняшний день полностью секвенировано 170 типов ВПЧ [1]. Филогенетический анализ, основанный на последовательностях ORF L1, выявил пять эволюционных групп с различными эпителиальными тропизмами и ассоциациями болезней: альфа-, бета-, гамма-, Nu- и Mu-папилломавирусы (PV). Альфа-ЛВ включают кожные типы с низким риском, которые обычно вызывают кожные бородавки, типы слизистых оболочек с низким риском, связанные с доброкачественными поражениями и остроконечными кондиломами, и типы слизистых оболочек с высоким риском, которые могут вызвать рак шейки матки [2].Стойкая инфекция альфа-ЛВ высокого риска является предпосылкой для развития рака шейки матки и его гистологического предшественника, цервикальных интраэпителиальных поражений. Двенадцать ВПЧ (16, 18, 31, 33, 35, 39, 45, 51, 52, 56, 58 и 59) классифицируются Международным агентством по изучению рака как канцерогенные для человека, при этом ВПЧ 68 признан вероятно канцерогенный. Некоторые другие типы ВПЧ (26, 30, 34, 53, 66, 67, 69, 70, 73, 82, 85 и 97), возможно, являются канцерогенными на основании эволюционного сходства с известными типами, вызывающими рак [3].ВПЧ 16 и ВПЧ 18 обычно считаются наиболее важными онкогенными вирусами, на которые приходится> 70% всех диагностированных во всем мире рака шейки матки [4]. Однако несколько исследований показали участие редких типов ВПЧ в злокачественных новообразованиях шейки матки. HPV 61 и HPV 62 были обнаружены в 2,3% LSIL и 3,5% HSIL [5]. Ретроспективное поперечное исследование также выявило редкие типы ВПЧ (включая 42, 61, 74 и 91) в 1% из 8977 случаев инвазивного рака шейки матки [6]. Недавнее исследование с использованием ПЦР с вырожденными праймерами MY09 / 11 с последующим прямым секвенированием показало 9.Распространенность редких типов ВПЧ в поражениях шейки матки – 47%. В частности, HPV 54 и HPV 81 были обнаружены в образцах с гистопатологическими данными CIN I, HPV 61 в образцах с CIN II и HPV 81 в образцах с CIN III [7]. Новые исследования предполагают потенциальную роль некоторых редких типов ВПЧ в поражениях шейки матки и раке шейки матки.

В настоящее время генотипирование ВПЧ играет важную роль в четырех основных клинических применениях: первичный скрининг шейки матки, сортировка ВПЧ по цитологическим аномалиям низкой степени, тест на излечение после лечения и разрешение неопределенностей [8, 9].Молекулярные методы обнаружения ДНК ВПЧ в целом подразделяются на анализы амплификации сигнала и целевой амплификации. Система Hybrid Capture 2 (HC2) (Digene Corporation, Гейтерсбург, Мэриленд, США) и тест Cervista HPV HR (Hologic, WI, США), одобренные FDA тесты ДНК ВПЧ, которые выявляют 13 и 14 типов ВПЧ высокого риска, соответственно, методами усиления сигнала. Генотипирование HPV с помощью линейного массива (Roche Molecular Diagnostics, Branchburg, Нью-Джерси, США) и InnoLiPA HPV Genotyping (Innogenetics, Бельгия) основаны на амплификации гена L1 HPV с последующей гибридизацией с обратной линией-блоттингом для обнаружения 37 и 28 типов HPV, соответственно.Все эти анализы предназначены для выявления только наиболее частых и определенных подтипов ВПЧ высокого и низкого риска. Другие подтипы, выходящие за рамки их определенных областей, вряд ли будут обнаружены. Для выявления более редких подтипов ВПЧ в наборе для тестирования массива ВПЧ GeneFlow использовался набор вырожденных праймеров PGMY для амплификации гена L1 ВПЧ с последующей проточной гибридизацией и захватом с помощью универсального зонда с консенсусной последовательностью ВПЧ. Универсальный зонд был разработан для выявления не только определенной панели из 33 подтипов ВПЧ высокого и низкого риска, но также внепанельных редких подтипов и вариантных форм конкретных типов ВПЧ.В этом отчете мы использовали тесты GenoFlow HPV для оценки распространенности и распределения генотипов HPV у женщин из Гонконга, Южный Китай. Мы также исследовали, связаны ли выявленные внепанельные подтипы ВПЧ с результатами их цитологического исследования.

2. Материалы и методы

2.1. Популяция исследования

Жидкостные цитологические образцы от 1648 южнокитайских женщин были протестированы, когда они посещали частные медицинские клиники с октября 2012 года по сентябрь 2013 года с согласия пациента.Все образцы подвергались скринингу с помощью стандартной цитологии, а тестирование на ВПЧ проводилось с использованием набора GenoFlow HPV Array Test (DiagCor Bioscience, Гонконг, ЮАР). Пять случаев были исключены из исследования из-за отсутствия данных цитологии или возраста.

2.2. Генотипирование ВПЧ

Набор для анализа массива вирусов папилломы человека GenoFlow был использован для генотипирования ВПЧ. Этот набор был разработан для идентификации 33 наиболее распространенных генотипов ВПЧ. Анализ охватывает 18 известных в настоящее время генотипов ВПЧ высокого риска (16, 18, 31, 33, 35, 39, 45, 51, 52, 53, 56, 58, 59, 66, 68, 73 и 82) и 15 генотипов низкого риска. генотипы ВПЧ высокого риска (6, 11, 26, 40, 42, 43, 44, 54, 55, 57, 61, 70, 71, 72, 81 и 84).Также включен универсальный зонд (U) для обнаружения редких подтипов ВПЧ, выходящих за пределы панели 33-генотипов. Образцы шейки матки, сохраненные в жидкой цитологической среде (Thin-Prep; Cytyc Corp., Мальборо, Массачусетс, США или Surepath; BD Diagnostics-Tripath BD Biosciences, Оксфорд, Великобритания), один раз промывали физиологическим раствором с фосфатным буфером и подвергали экстракции ДНК. с помощью мини-набора QIAamp DNA Blood Mini (Qiagen) в соответствии с инструкциями производителя. Экстрагированную ДНК смешивали со смесью праймеров, меченных биотином, и полимеразой ДНК Taq , поставляемой с набором для тестирования GenoFlow; с последующим этапом ПЦР-амплификации с использованием указанных условий термоциклирования.Затем амплифицированные продукты генотипировали с использованием системы массивов GenoFlow HPV. Вкратце, ампликоны денатурировали и гибридизовали со специфическими зондами, улавливающими ДНК ВПЧ, посредством проточной гибридизации. Гибридизованную ДНК подвергали тщательной промывке и детектировали колориметрическим методом. Результат действителен только при наличии сигналов в контроле гибридизации (HC) и контроле амплификации (AC) [10].

2.3. Подтверждение внепанельного генотипа ВПЧ

Для образцов с положительным сигналом универсального зонда, но отрицательным для специфических типов ВПЧ (внепанельные образцы ВПЧ), извлеченная из образца ДНК была амплифицирована с системами праймеров MY09 / 11 и GP5 + / 6 + с использованием стандартных эталонов протокол [11, 12].Целевые ампликоны очищали и секвенировали с использованием соответствующих наборов праймеров. Затем результаты секвенирования были проанализированы с помощью программы BLAST для подтверждения генотипа HPV.

3. Результаты и обсуждения

Среди 1643 подходящих китайских женщин возраст варьировался от 15 до 83 лет, а средний возраст составлял 29 лет. Характеристики пациентов представлены в таблице 1. На основании цитологических результатов 1505 (91,6%, 1505/1643) образцов были нормальными без интраэпителиального поражения или злокачественных новообразований, 91 (5.5%) были атипичными плоскоклеточными клетками неопределенной значимости (ASCUS), 41 (2,5%) были плоскими интраэпителиальными поражениями низкой степени (LSIL) и 6 (0,36%) были плоскоклеточными интраэпителиальными поражениями высокой степени (HSIL). Используя тест GenoFlow HPV Array Test, тест генотипирования показал, что 695 случаев были положительными на ДНК ВПЧ, а общая распространенность ВПЧ составила 42,3% (695/1643). Тремя наиболее распространенными типами были ВПЧ 52 (139/1643, 8,5%), ВПЧ 81 (89/1643, 5,4%) и ВПЧ 16 (63/1643, 3,8%) независимо от их гистологических результатов шейки матки (Рисунок 1).Наши результаты согласуются с опубликованными метааналитическими исследованиями, показывающими, что наиболее часто обнаруживаемым типом ВПЧ в Южном Китае был ВПЧ 52 [13–15]. Лю и др. сообщили, что ВПЧ 52 был наиболее часто встречающимся генотипом в регионе Гуанчжоу в Китае, в то время как его распространенность была сопоставима с распространенностью ВПЧ 16 в Гонконге [16]. Ли и др. и Ye et al. также показали, что ВПЧ 52 имел самую высокую распространенность в провинциях Гуандун и Чжэцзян в Китае соответственно [14, 17]. В этом исследовании ВПЧ 16 занимает третье место по распространенности (3.8%) было сопоставимо с мировым показателем. Распространенность ВПЧ 16 в зависимости от типа населения колеблется от 2% до 4% во всех регионах [6]; однако инфекция ВПЧ 16 тесно связана с риском неоплазии шейки матки и вызывает более 50% случаев рака шейки матки [4]. Сообщается также, что ВПЧ 81 (эквивалент CP8304) связан с предраковыми или раковыми поражениями [18, 19]. Распространенность ВПЧ 81 в мировых популяционных исследованиях не очень высока, но ВПЧ 81 является одним из наиболее часто наблюдаемых типов ВПЧ у ВИЧ-инфицированных пациентов [20, 21].Вывод о том, что в нашем исследовании распространенность ВПЧ 81 встречалась чаще, чем ВПЧ 16, может быть связано с географическими и биологическими вариациями в распределении типов ВПЧ и чувствительностью различных методов генотипирования к конкретным типам ВПЧ.