Ремантадин и арбидол: Врач назначил АРБИДОЛ®, а я привык лечиться римантадином. Какой препарат принимать?

Posted on by alexxlab

Вопросы вирусологии №3 2010 стр. 19

Вопросы вирусологии №3 2010

*И. А. Ленева1, И. Т. Федякина2, М. Ю. Еропкин3, Н. В. Гудова1, А. А. Романовская4, Д. М. Даниленко3, С. М. Виноградова1, А. Ю. Лепешкин1, А. М. Шестопалов4

1Центр химии лекарственных средств — ВНИХФИ, 2НИИ вирусологии им. Д. И. Ивановского РАМН, Москва;
3ГУ НИИ гриппа РАМН, Санкт-Петербург; 4ФГУН ГНЦ ВБ “Вектор” Роспотребнадзора Новосибирской обл.

Контактная информация:

*Ленева Ирина Анатольевна, д-р биол. наук, зав. лаб.; e-mail: [email protected]. 119815, Москва, ул. Зубовская, д. 7, стр. 1.

Изучение противовирусной активности отечественных противогриппозных химиопрепаратов в культуре клеток и на модели животных

Изучение противовирусной активности российских препаратов в культуре клеток показало, что арбидол и рибавирин подавляли размножение различных штаммов вирусов гриппа A, включая римантадинрезистентные и озельтамивиррезистентные, а также вирусов гриппа B (концентрации препаратов, ингибирующие размножение вируса на 50% (ИК

50) составляли 2—8,5 мкг/мл). Римантадин в концентрации 1—5 мкг/мл полностью ингибировал репродукцию эталонных и озельтамивиррезистентного штаммов вируса гриппа A, не влияя на размножение вирусов гриппа B, римантадинрезистентных вирусов гриппа A. Арбидол и рибавирин также подавляли репродукцию пандемических вирусов A/California/04/2009(h2N1), A/California/07/2009(h2N1) и A/Moscow/01/2009(h2N1) swl в культуре клеток MDCK (ИК50 — 1,5—4,0 мкг/мл), в то время как римантадин не влиял на их размножение. Нами не выявлено какой-либо значительной противовирусной активности ингавирина в культуре клеток в нетоксичных для них концентрациях (до 200 мкг/мл) в отношении всех изученных штаммов вирусов гриппа A и B, включая штаммы пандемического вируса гриппа A(h2N1).
На модели гриппозной пневмонии у мышей, инфицированных адаптированным к ним вирусом гриппа A/Аичи/2/69(h4N2), вы явлена активность арбидола, римантадина и ингавирина. Профилактическая эффективность трех изученных препаратов была сходной и наиболее выраженной при использовании их за 96 ч: предотвращена смертность 40—50% животных и потеря их массы тела, увеличилась продолжительность жизни в 1,3—1,5 раза. Арбидол и римантадин были более эффективны при лечебном и лечебно-профилактическом использовании в дозах 30 и 10 мг/кг/день соответственно, защищая от гибели 60—80% инфицированных животных, увеличивая продолжительность их жизни в 1,7—2 раза и предотвращая потерю массы тела по сравнению с группой вирусного контроля. Эффективность ингавирина в этих же опытах была менее выражена, чем у арбидола и римантадина. Таким образом, арбидол и римантадин обладают выраженной противовирусной активностью как в культуре клеток, так и на модели гриппозной пневмонии. Выявленная эффективность ингавирина на интегральной модели гриппозной пневмонии мышей при отсутствии активности в культуре клеток, вероятно, обусловлена не прямым вирусспецифическим действием, а иными фармакологическими свойствами препарата.

Ключевые слова:  вирусы гриппа, пандемический вирус гриппа A(h2N1), арбидол, римантадин, ингавирин, рибавирин, вирусингибирующая активность в культуре клеток, гриппозная пневмония мышей

ЛИТЕРАТУРА1. Бурцева Е. И., Шевченко Е. С., Ленева И. А. и др. Чувствительность к римантадину и арбидолу вирусов гриппа, вызвавших эпидемические подъемы заболеваемости в России в сезоне 2004—2005 г. // Вопр. вирусол. — 2007. — № 2. — С. 24—29.

2. Гуськова Т. А., Глушков Р. Г. Арбидол-иммуномодулятор, индуктор интерферона, антиоксидант. — М., 1999. — С. 93.

3. Колубухина Л. В., Меркулова Л. Н., Щелканов М. Ю. и др. Эффективность ингавирина при лечении гриппа у взрослых // Тер. арх. — 2009. — Т. 81, № 3. — С. 51—54.

4. Ленева И. А., Гуськова Т. А. Арбидол — эффективный препарат для лечения и профилактики гриппа и ОРВИ: обзор результатов клинических исследований // Рус. мед. журн. — 2008. — Т. 16, № 29. — С. 1972—1976.

5. Логинова С. Я., Борисевич С. В., Максимов В. А. и др. Изучение лечебной эффективности нового отечественного препарата ингавирина в отношении возбудителя гриппа A(h4N2) // Антибиотики и химиотер. — 2008. — Т. 53, № 7—8. — С. 29—30.

6. Логинова С. Я., Борисевич С. В., Лыков М. В. и др. Изучение эффективности ингавирина in vitro в отношении мексиканского пандемического подтипа HINI вируса гриппа A/ штамма A/California/04/2009 и A/штамма A/California/07/ 2009 // Антибиотики и химиотер. — 2009. — Т. 54, № 3— 4. С. 15—20.

7. Львов Д. К., Бурцева Е. И., Прилипов А. Г. и др. Изоляция 24.05.2009 и депонирование в Государственную коллекцию вирусов (ГКВ № 2452 от 24.05.2009) первого штамма A/ Moscow/01/2009(h2N1)sw1, подобного свиному вирусу A(h2N1) от первого выявленного 21.05.2009 больного в г. Москве // Вопр. вирусол. — 2009. — Т. 54, № 6. — С. 10— 14.

8. Методические указания по изучению специфической противовирусной активности фармакологических веществ: Руководство по экспериментальному (доклиническому) изучению новых фармакологических веществ / Под ред. Р. У. Хабриева. — М., 2005.

— С. 532—557.

9. Романовская А. А., Дурыманов А. М., Шаршов К. А. и др. Изучение чувствительности вирусов гриппа A(h2N1), вызвавших заболевания в апреле—мае 2009 года, к противовирусным препаратам в культуре клеток MDCK // Антибиотики и химиотер. — 2009. — Т. 54, № 5—6. — С. 41—47.

10. Assay Guidance Manual. http://www/ncgc.nih.gov/guidance/ section2.html.

11. Boriskin Y., Leneva I., Pecheur E. et al. Arbidol: a broad-spectrum antiviral compound that bloks viral fusion // Curr. Med. Chem. — 2008. — Vol. 15. — P. 997—1005.

12. Glushkov R. G. Arbidol. Antiviral, immunostimulant, interferon inducer // Drug of the Future. — 1992. — Vol. 17. — P. 1079— 1081.

13. Hayden F. WHO guidelines on the use of vaccines and antivirals during influenza. – Annex 5-Considerations for the use of antivirals during an influenza pandemic, Geneva, 2—4 October, 2002.

14. Leneva I. A., Russell R. J., Boriskin Y. S. et al. Characteristics of arbidol-resistant mutants of influenza virus: implications for the mechanism of anti-influenza action of arbidol // Antiviral Res. — 2009. — Vol. 81. — P. 132—140.

15. Monto A. Viral susceptibility and the choice of influenza antivirals // Clin. Infect. Dis. — 2008. — Vol. 47. — P. 346—348.

16. Shi L., Xiong H., He J. et al. Antiviral activity of arbidol against influenza A virus, respiratory syncytial virus, rhinovirus, coxsackie virus and adenovirus in vitro and in vivo // Arch. Virol. — 2007. — Vol. 152. — P. 1447.

17. Update: drug susceptibility of swine-origin influenza A(h2N1) viruses, April 2009. Centers for Disease Control and Prevention (CDC) // MMWR Morb Mortal Wkly Rep. 2009. — Vol. 58. — P. 433—435.

18. Wang M., Cai B., Li L. et al. Efficacy and safety of arbidol in treatment of naturally acquired influenza // Zhongguo Yi Xue Ke Xue Yuan Xue Bao. — 2004. — Vol. 26. — P. 289—293.

19. Watanabe W., Konno K., Ijichi K. et al. MTT colorimetric assay system for the screening of anti-orthomyxo- and anti-paramyxoviral agents // J. Virol. Meth. — 1994. — Vol. 48, N 2— 3. — P. 257—265.

20. Zlydnikov D. M., Kubar O. I., Kovaleva T. P. et al. Study of rimantadine in the USSR: a review of the literature // Rev. Infect. Dis. — 1981. — Vol. 3. — P. 408—421.

Почему этому препарату стоит доверять: Lenta.ru

По экспертным оценкам, до 40% предлагающихся на российском рынке лекарств не обладают доказанной эффективностью и безопасностью. Особенно много таких препаратов среди средств для лечения респираторных вирусных инфекций. А поскольку подавляющее большинство россиян, простудившись, предпочитают заниматься самолечением, выглядит это совсем удручающе.

Между тем современные стандарты лечения гриппа и ОРВИ должны учитывать уровень доказательности препаратов. То есть оценку эффективности и безопасности лекарства, полученную в результате клинических исследований, соответствующих современным международным требованиям и стандартам по их проведению. Такие исследования сегодня должен проходить каждый вновь выводимый на рынок препарат. Что же касается ранее зарегистрированных лекарств, то, к сожалению, российские производители предпочитают вкладываться в рекламу, а не в пострегистрационные исследования.

Единственным исключением, по мнению специалистов и редакции, стал противовирусный препарат «Арбидол», на долю которого в свое время выпало немало критики именно из-за «отсутствия» доказательной базы, подтверждающей клиническую эффективность препарата. Производитель препарата, не жалея времени и ресурсов, проводит полноценные исследования, чтобы подтвердить эффективность препарата и опровергнуть необоснованную критику. Результаты этих исследований внесены в международную систему регистрации клинических исследований ClinicalTrials.gov и доступны для ознакомления любому скептику.

Речь идет о продолжающемся с 2012 года на территории России независимом двойном слепом рандомизированном многоцентровом плацебо-контролируемом исследовании «Арбидола» — АРБИТР. Стоит отметить, что далеко не каждый российский производитель осмеливается на прохождение такого длительного и основательного исследования. В ходе исследования были получены достоверные данные: уменьшение тяжести течения гриппа, сокращение продолжительности острого периода и периода выделения вируса из организма.

Широкий спектр антивирусной активности показали и зарубежные исследования, по результатам которых «Арбидол» был включен в Международный классификатор лекарственных средств (АТХ) под непатентованным названием умифеновир. Как рассказала профессор кафедры молекулярной фармакологии и радиобиологии РНИМУ им. Н.И.Пирогова, д.м.н. Елена Карева, после завершения срока патентной защиты в 2007 году механизм действия «Арбидола» начали активно изучать в США, Великобритании, Германии, Китае и Голландии (где уже начали выпускать дженерики «Арбидола»).

«Противовирусная активность препарата «Арбидол» и механизм его действия на процесс внедрения вирусов гриппа и ОРВИ внутрь клеток доказан на международном уровне, — рассказала Карева. — Он введен в классификатор ВОЗ наряду с использующимся во всем мире ингибитором нейраминидазы вируса гриппа препаратом осельтамивир («Тамифлю»)».

Между тем узконаправленные ингибиторы нейроминидазы, такие как «Тамифлю», заточены исключительно на грипп и не помогут при другом виде ОРВИ. В то же время «Арбидол», блокирующий проникновение в клетку вирусов, активен в отношении большинства возбудителей ОРВИ. Вот почему в начале заболевания, еще до посещения врача, когда неизвестно точно, поразил вас вирус гриппа или ОРВИ, прием препарата «Арбидол» не только эффективен, но и безопасен, так как активен в отношении широкого спектра вирусов.

Еще одно заинтересовавшее зарубежных ученых качество «Арбидола» — низкая способность к развитию резистентности вирусов. Как рассказала Карева, сегодня ВОЗ выделяет три основные группы противовирусных препаратов прямого действия — производные адамантана («Ремантадин»), осельтамивир («Тамифлю») и умифеновир («Арбидол»). Появившийся более 30 лет назад «Ремантадин» замедляет размножение вируса после его проникновения в клетку, но его нерациональное использование (для профилактики, на всякий случай) привело к тому, что к нему привыкли практически все циркулирующие сегодня штаммы гриппа.

Подавляющие размножение вирусов ингибиторы нейраминидазы обладают меньшей способностью вызывать резистентность вирусов гриппа. Особенно на территории нашей страны, где они редко использовались из-за своей высокой цены. Но вирус гриппа потихоньку начинает адаптироваться и к ним, поэтому эксперты ВОЗ настаивают на том, чтобы эти препараты не использовались для рутинной профилактики. Что же касается «Арбидола», то на сегодняшний день невосприимчивых к нему вирусов не выявлено. А это значит, что из всех обозначенных ВОЗ противовирусных препаратов на сегодняшний день только «Арбидол» можно использовать и в лечебных, и в профилактических целях.

Материал создан при поддержке ОТИСИФАРМ

а>

Минздрав рекомендовал любой случай ОРВИ рассматривать как подозрительный на COVID-19

Минздрав опубликовал временные методические рекомендации по диагностике и лечению ОРВИ в период пандемии коронавирусной инфекции. Из-за схожести клинических проявлений ОРВИ и COVID-19 при признаках ОРВИ на ранней стадии до постановки диагноза предложено лечиться как привычными противовирусными и иммуномодулирующими препаратами, так и лекарствами, предположительно эффективными в терапии коронавирусной инфекции, во избежание осложнений.

В России начали регистрировать единичные случаи COVID-19 с февраля 2020 года, на это время приходится начало сезонной заболеваемости ОРВИ. «В настоящее время наблюдается спад заболеваемости сезонными ОРВИ на фоне нарастания заболеваемости COVID-19. Принимая во внимание такие эпидемиологические особенности, любой случай ОРВИ вне зависимости от эпидемиологического анамнеза следует рассматривать как подозрительный на COVID-19», – говорится в рекомендациях.

Пациент направляется на исследование биологического материала на COVID-19, если у него наблюдается температура выше 37,5 градусов и другие признаки ОРВИ, например, кашель, одышка, ощущение заложенности в грудной клетке.

При ОРВИ рекомендуется как можно раньше назначать противовирусные препараты. При этом Минздрав отмечает, что эффективность медикаментозного лечения доказана только в отношении вируса гриппа. В России среди противовирусных перечислены ингибиторы нейраминидазы (осельтамивир и занамивир), ингибитор гемагглютинина или ингибитор фузии (умифеновир), блокаторы М2-каналов вируса (римантадин, амантадин). Оригинальный осельтамивир – Тамифлю от Roche, имеющий в России много дженериков. Занамивир в РФ представлен Релензой от GSK. Умифеновир, известный в России под торговой маркой Арбидол от «Отисифарма», исследуется на эффективность от коронавируса. Римантадин в стране производят более 10 компаний, амантадин – четыре.

В составе комплексной терапии могут использоваться препараты интерферонов, индукторов интерферонов и иные иммуномодулирующие препараты – например, тилорон, меглюмина акридонацетат, оксодигидроакридинилацетат, азоксимера бромид.

Из-за сходства проявлений сезонных ОРВИ на ранней стадии и COVID-19 «для профилактики неблагоприятного течения инфекции и развития осложнений» до постановки диагноза Минздрав советует включить в схемы лечения и препараты, предположительно эффективные в отношении SARS-CoV-2. Например, включать пониженные дозировки противомалярийных гидроксихлорохина и мефлохина. Поскольку их эффективность от COVID-19 пока не доказана, пациенту или его представителю предлагается обязательно подписать добровольное информированное согласие на прием таких препаратов.

В последнюю версию временных рекомендаций Минздрава по лечению коронавирусной инфекции вошли противомалярийные хлорохин, гидроксихлорохин, мефлохин, АРВ-препарат лопинавир+ритонавир, антибиотик азитромицин.

Поделиться в соц.сетях

ГРИПП И ЕГО ПРОФИЛАКТИКА | Государственное бюджетное учреждение здравоохранения “Городская больница” г.Гая

   Грипп – серьезное вирусное заболевание, которое может обернуться массой осложнений, чаще у детей, людей пожилых и с хроническими заболеваниями. Ежегодно имеются летальные случаи от гриппа. Все эти опасности можно избежать. Но прежде чем остановиться на профилактике гриппа, стоит вспомнить об этом заболевании.

  ГРИПП – острое респираторное заболевание вирусной этиологии, протекающее с явлениями общей интоксикации и поражением органов дыхания.

  Источником гриппозной инфекции является больной  человек.                                         Путь передачи – воздушно-капельный. Максимальная заразительность наблюдается с первых дней болезни и заканчивается к 5-6 дню от начала заболевания.

   ПРОФИЛАКТИКА гриппа комплексная. Ее условно можно разделить на специфическую и неспецифическую. Кроме того, профилактические мероприятия можно проводить в сезон подъема простудных заболеваний и гриппа, а также в период, предшествующий сезонному подъему.

   Наилучшую защиту организма от гриппа обеспечивает специфическая иммунизация.

   Вакцинация проводится ежегодно в осенне-зимний период. Отечественные вакцины применяют с 3-летнего возраста, зарубежные с 6-12 мес. возраста.

   Противогриппозные вакцины совместимы с другими вакцинами (в разных шприцах).

   Все лекарственные препараты, используемые с целью профилактики гриппа, можно разделить на несколько групп:

1.Средства, влияющие на иммунную систему.

2.Противовирусные препараты.

3.Общеукрепляющие препараты.

   К средствам, влияющим на иммунную систему, относятся интерфероны (лейкоцитарный интерферон, гриппферон, виферон). Широко используются иммуностимуляторы растительного происхождения, такие как эхиноцея, элеутерококк, аралия и др.

   Противовирусные препараты (ремантадин, альгирим, арбидол) используют как для лечения, так и с профилактической целью.

   Употребление витаминов  С, А, «Ревит», «Гексавит», «Декамевит» и др. повышает общую сопротивляемость организма.

   ПРОФИЛАКТИЧЕСКИЕ МЕРОПРИЯТИЯ при возникновении заболевания в очаге сводятся к изоляции больных в домашних условиях или в стационаре.                                                                                                                               Обслуживающие больных лица должны носить 4-6 слойные марлевые маски и использовать 0,25% оксолиновую мазь.   Контактным –  назначаются лекарственные препараты для экстренной профилактики на 7 дней (гриппферон, арбидол, ремантадин и т. д.) В помещениях проводится влажная уборка, проветривание. Носовые платки, полотенца, постельное белье, маски следует часто менять и обязательно кипятить. Каждый заболевший должен помнить, что ношение маски снижает риск возникновения заболевания у окружающих многократно. Ношение маски должно стать нормой поведения каждого жителя при возникновении заболевания, потому как лечить это заболевание очень дорого, ведь все лекарственные препараты стоят не дешево! Маски можно приобрести во всех аптеках города и можно сшить самим из обыкновенного бинта, просто надо помнить, что маски эффективны если они 4-х слойные и стирать их необходимо через каждые 4 часа, после чего проглаживать горячим утюгом.  

                                                                                       Горячкина А.С. – зав. пол №1.

Ремантадин капсулы 100мг №10 (Римантадин)

Раннее лечение гриппа А у взрослых и детей старше 14 лет.

– острые заболевания печени, – острые и хронические заболевания почек, – тиреотоксикоз, – беременность и период лактации, – детский возраст до 14 лет (для данной лекарственной формы), – повышенная чувствительность к римантадину или вспомогательным веществам препарата, – дефицит лактазы, непереносимость лактозы, глюкозо-галактозная мальабсорбция. С осторожностью: Артериальная гипертензия, эпилепсия (в т.ч. в анамнезе), атеросклероз сосудов головного мозга, печеночная недостаточность, заболевания желудочно-кишечного тракта. Беременность и лактация: Применение препарата Ремантадин® противопоказано при беременности и в период лактации.

Активное вещество – римантадина гидрохлорид. Форма выпуска: Капсулы 100 мг №10.

Внутрь, после еды, запивая водой. Капсулу нельзя разжевывать. Применение лекарственного средства необходимо начать сразу после появления первых симптомов гриппа. Терапевтический эффект более выражен, если применение начато в течение первых 24-48 ч. Взрослым и детям старше 14 лет в первый день назначают по 100 мг 3 раза в день; во второй и третий дни по 100 мг 2 раза в день; в четвертый и пятый дни по 100 мг 1 раз в день. В первый день заболевания возможно применение препарата однократно в дозе 300 мг. Длительность курса лечения составляет 5 дней.

Особые указания: При применении препарата Ремантадин® возможно обострение хронических сопутствующих заболеваний. У пациентов пожилого возраста с артериальной гипертензией повышается риск развития геморрагического инсульта. При указаниях в анамнезе на эпилепсию и проводящуюся противосудорожную терапию на фоне применения препарата Ремантадин® повышается риск развития эпилептического припадка. В таких случаях Ремантадин® применяют в дозе 100 мг в сутки одновременно с противосудорожной терапией. При гриппе, вызванном вирусом В, Ремантадин® оказывает антитоксическое действие. Профилактический прием эффективен при контактах с заболевшими, при распространении инфекции в замкнутых коллективах и при высоком риске возникновения заболевания во время эпидемии гриппа. Возможно появление резистентных к препарату вирусов. Влияние на способность управлять транспортными средствами и механизмами: Ремантадин® не влияет на способность управлять транспортным средством, но лицам, у которых возникают головокружение, головная боль или другие побочные эффекты со стороны центральной нервной системы, следует соблюдать осторожность. Условия хранения: Хранить при температуре не выше 25 C. Взаимодействие с другими препаратами: Римантадин снижает эффективность противоэпилептических препаратов. Адсорбенты, вяжущие и обволакивающие средства уменьшают всасывание римантадина. Ацидифирующие мочу средства (ацетазоламид, натрия гидрокарбонат и др.) усиливают эффективность римантадина вследствие уменьшения его выделения почками. Парацетамол и аскорбиновая кислота снижают максимальную концентрацию римантадина в плазме крови на 11 %. Циметидин снижает клиренс римантадина на 18 %. Побочные эффекты: Ремантадин® обычно хорошо переносится. Иногда наблюдаются: – со стороны желудочно-кишечного тракта: сухость во рту, тошнота, рвота, потеря аппетита, боли в эпигастрии, метеоризм; – со стороны центральной нервной системы: головная боль, головокружение, бессонница, неврологические реакции, нарушение концентрации внимания, сонливость, тревожность, повышенная возбудимость, усталость; – прочие: гипербилирубинемия, аллергические реакции (кожная сыпь, зуд, крапивница и др. ).

Что нужно знать о лекарствах для лечения COVID-19

Иллюстративное фото: РИА Новости / Денис Абрамов

В Министерстве здравоохранения РК рассказали о популярных группах препаратов и попытались разобраться, чего в них больше – пользы или вреда, передает Azattyq Rýhy со ссылкой на пресс-службу ведомства.

Начнем с того, что любой лекарственный препарат должен выписываться только врачом в зависимости от состояния здоровья больного, имеющихся у него симптомов и с учетом таких факторов риска, как наличие в анамнезе гипертонии, сахарного диабета или сердечно-сосудистых патологий. Если вы «сам себе врач» и при распаковке коробки смело выкидываете инструкцию по применению в урну, даже не открыв, то вам нужно знать следующее.

Жаропонижающие

В государственном реестре лекарственных средств зарегистрированы 86 наименований препаратов с международным непатентованным названием «Парацетамол» и парацетамолсодержащих в различных формах – в таблетках, суспензиях, суппозиториях, порошках от отечественных и зарубежных производителей. Выбора много. Здесь важно, какой выбор сделаете вы.

Например, любимый и знакомый всем парацетамол потенциально очень токсичен, особенно для печени и почек. Он повышает риск развития аллергических заболеваний и бронхиальной астмы при бесконтрольном и необоснованном применении. Запрещенный детям до 15 лет «Аспирин» может вызвать кишечные кровотечения. Если этот препарат принимать в период заболевания гриппом или ветрянкой, может развиться синдром Рея, или острая печеночная недостаточность, с последующим летальным исходом. А любимый советский анальгин может нарушать образование клеток крови и провоцировать внутренние кровотечения и тяжелые аллергические реакции.

«Ибупрофен» – наименее опасный из всех жаропонижающих, хотя все же обладает риском гастропатического действия, которое проявляется тошнотой, рвотой, раздражением слизистой оболочки желудка. При бесконтрольном приеме он способен вызвать обострение хронического гастрита, язвенной болезни желудка и двенадцатиперстной кишки, кровотечения, бронхоспазм, задержку жидкости в организме, нарушения со стороны зрения. Сочетать его с парацетамолом не рекомендуется.

Клиническим протоколом Казахстана по лечению коронавирусной инфекции рекомендованы эти два жаропонижающих препарата, но в ограниченной дозировке и только при повышенной температуре – выше 38 градусов. Парацетамол дозировкой 500 мг или «Ибупрофен» – 200-400 мг, но не более четырех таблеток в сутки. И еще, вы должны знать, что лихорадка является защитной реакцией организма в ответ на инфекционно-воспалительный процесс.

С повышением температуры возбудители инфекции размножаются медленнее, а иммунная система активизируется — образуется больше иммуноглобулинов и интерферонов. Поэтому сбивать температуру нужно не всегда. До 38 градусов она, наоборот, помогает организму сопротивляться.

Противовирусные

Из 29 препаратов противовирусного характера Министерством здравоохранения рекомендуются только 23 лекарственных средства для комплексного лечения ОРВИ и ОРЗ. В их числе «Арпефлю», «Ремантадин», «Эргоферон», «Ингавирин», «Арбидол» и «Кагоцел».

Во-первых, эффективность их при лечении COVID-19 не доказана и в клиническом протоколе лечения в амбулаторных условиях при легкой форме про прием противовирусных препаратов тоже ничего не сказано. Во-вторых, иммунитет с помощью этих препаратов поддерживается искусственно, и как только человек заканчивает их принимать, его организм оказывается полностью не защищенным, а значит, вероятность заболеть увеличивается в несколько раз.

Антибиотики

Вместе с противовирусными препаратами в ход без разбора идут антибиотики. А знаете ли вы, что вирусные инфекции ими лечить бесполезно, да и не рекомендуется при легких формах заболевания. При длительном применении это способствует выработке устойчивости к ним. А значит, при реальной необходимости или тяжелом течении болезни врачам будет тяжелее подобрать вам тактику лечения и препараты. К тому же риск перегрузить печень и почки химическими веществами всегда очень высок, да и побочных действий много – от нарушения функций желудочно-кишечного тракта до негативных реакций со стороны нервной системы.

Если вы уже прибегли к этой терапии или вам ее назначил врач, то запомните эти правила.

Антибиотики надо принимать с пробиотиками, их всегда нужно пить курсом. Перед первой инъекцией, если препарат раньше не использовался, необходимо сделать тест на чувствительность. Детям и беременным не рекомендуется, только если они принимаются по показаниям и в правильном режиме; уколы лучше, чем таблетки; антибиотики несовместимы с алкоголем.

«Ремантадин» или «Арбидол»? – meds.is

Сравнение эффективности Ремантадина и Арбидола

Эффективность у Ремантадина достотаточно схожа с Арбидолом – это означает, что способность лекарственного вещества оказывать максимально возможное действие схоже.

Например, если терапевтический эффект у Ремантадина более выраженный, то при применении Арбидола даже в больших дозах не получится добиться данного эффекта.

Также скорость терапии – показатель быстроты терапевтического действия у Ремантадина и Арбидола примерно одинаковы. А биодоступность, то есть количество лекарственного вещества, доходящее до места его действия в организме, схожа. Чем выше биодоступность, тем меньше его потерь будет при усвоении и использовании организмом.

Сравнение безопасности Ремантадина и Арбидола

Безопасность препарата включает множество факторов.

При этом у Ремантадина она достаточно схожа с Арбидолом. Важно, где метаболизируется препарат: лекарственные вещества выделяются из организма либо в неизмененном виде, либо в виде продуктов их биохимических превращений. Метаболизм протекает спонтанно, но чаще всего задействует основные органы, такие как печень, почки, лёгкие, кожу, мозг и другие. При оценивании метаболизма у Ремантадина, также как и у Арбидола мы смотрим, какой орган является метаболизирующим и наколько критично действие на него.

Соотношение риска к пользе – это когда назначение лекарственного препарата нежелательно, но оправдано при определенных условиях и обстоятельствах, с обязательным соблюдением осторожности применения. При этом у Ремантадина нет никаих рисков при применении, также как и у Арбидола.

Также при рассчете безопасности учитывается проявляются ли только аллергические реакции или же возможная дисфункция основных органов. В прочем как и обратимость последствий от использования Ремантадина и Арбидола.

Сравнение противопоказаний Ремантадина и Арбидола

Исходя из инструкции. Количество противопоказаний у Ремантадина достаточно схоже с Арбидолом и составляет малое количество. Это и перечень симптомов с синдромами, и заболевания, различные внешних и внутренние условия, при которых применение Ремантадина и Арбидола может быть нежелательным или недопустимым.

Сравнение привыкания у Ремантадина и Арбидола

Как и безопасность, привыкание тоже включает множество факторов, которые необходимо учитывать при оценивании препарат.

Так совокупность значения таких параметров, как «cиндром отмены» и «развитие резистентности», у Ремантадина достаточно схоже со аналогичными значения у Арбидола. Синдром отмены – это патологическое состояние, возникающее после прекращения поступления в организм веществ, вызывающих привыкание или зависимость. А под резистентностью понимают изначальную невосприимчивость к препарату, этим она отличается от привыкания, когда невосприимчивость к препарату развивается в течение определенного периода времени. Наличие резистентности можно констатировать лишь в том случае, если была сделана попытка увеличить дозу препарата до максимально возможной. При этом у Ремантадина значения «синдрома отмены» и «резистентности» достотачно малое, впрочем также как и у Арбидола.

Сравнение побочек Ремантадина и Арбидола

Побочки или нежелательные явления – это любое неблагоприятное с медицинской точки зрения событие, возникшее у субъекта, после введения препарата.

У Ремантадина состояния нежелательных явлений почти такое же, как и у Арбидола. У них у обоих количество побочных эффектов малое. Это подразумевает, что частота их проявления низкая, то есть показатель сколько случаев проявления нежелательного эффекта от лечения возможно и зарегистрировано – низкий. Нежелательное влияние на организм, сила влияния и токсическое действие у Ремантадина схоже с Арбидолом: как быстро организм восстановиться после приема и восстановиться ли вообще.

Сравнение удобства применения Ремантадина и Арбидола

Это и подбор дозы с учетом различных условий, и кратность приемов. При этом важно не забывать и про форму выпуска препарата, ее тоже важно учитывать при составлении оценки.

Удобство применения у Ремантадина примерно одинаковое с Арбидолом. При этом они не являются достаточно удобными для применения.

Рейтинг препаратов составлен опытными фармацевтами, изучающий международные исследования. Отчет сгенерирован автоматически.

Дата последнего обновления: 2020-12-13 10:31:34

Препарат против вируса гриппа, арбидол, является эффективным ингибитором SARS-CoV-2 in vitro

С декабря 2019 года новое заболевание COVID-19, вызванное тяжелым острым респираторным синдромом, коронавирусом 2 (SARS-CoV-2), быстро распространилось в более чем 200 стран и заразило более 1,50 миллиона человек, включая 92798 смертей (данные на 10 апреля 2020 г. ) . 11 марта Всемирная организация здравоохранения (ВОЗ) охарактеризовала COVID-19 как пандемию и призвала ускорить разработку диагностических средств, вакцин и лекарств для борьбы с этим новым заболеванием.Помимо нового коронавируса, инфекции, вызванные вирусом гриппа, на протяжении многих лет представляли постоянную угрозу для здоровья населения мира. По оценкам Центров по контролю и профилактике заболеваний (CDC) только в Соединенных Штатах, за зимний сезон 2019–2020 гг. Было зарегистрировано не менее 39 миллионов заболеваний, 400 000 госпитализаций и 24 000 смертей от гриппа (https: // www.cdc.gov/flu/weekly/index.htm). Учитывая текущую одновременную циркуляцию SARS-CoV-2 и вирусных инфекций гриппа, большой интерес представляет поиск доступных и жизнеспособных противогриппозных препаратов для лечения обоих заболеваний.

Фактически, на ранних стадиях вспышки COVID-19 для лечения пациентов с COVID-19 применялись некоторые противогриппозные препараты (например, осельтамивир) 1,2 . Ранее мы сообщали, что фавипиравир (T705), препарат против гриппа, одобренный в Японии и Китае, показал определенную эффективность против SARS-CoV-2 in vitro 3 . Кроме того, арбидол, противогриппозный препарат, нацеленный на вирусный гемагглютинин (НА), используется в клинических испытаниях против COVID-19 (ChiCTR2000029573) и недавно был добавлен в Руководство по диагностике и лечению COVID-19 (шестое и седьмое издание) в Китае.Недавнее ретроспективное исследование показало, что лечение арбидолом показало тенденцию к улучшению скорости выделения и снижению смертности пациентов с COVID-19 4 . Однако, насколько нам известно, систематического анализа эффективности противогриппозных препаратов против SARS-CoV-2 не проводилось.

В этом исследовании мы оценили шесть доступных в настоящее время и лицензированных противогриппозных препаратов против SARS-CoV-2. К препаратам относятся арбидол, балоксавир, ланинамивир, осельтамивир, перамивир и занамивир 5,6 . Ингибиторы M2 (амантадин и римантадин) не рассматривались в этом исследовании, поскольку они не были рекомендованы ВОЗ для лечения гриппа из-за лекарственной устойчивости. Во-первых, цитотоксичность соединений в клетках почек африканских зеленых мартышек, Vero E6 (ATCC-1586) была измерена с помощью стандартного набора для подсчета клеток-8 (CCK8). Затем клетки инфицировали SARS-CoV-2 при множественности инфицирования (MOI) 0,05 в присутствии либо соединения, либо диметилсульфоксида (DMSO) в качестве контроля. Кривые доза-ответ определяли путем количественного определения количества копий вирусной РНК в супернатанте инфицированной клетки через 48 часов после инфицирования (стр.я.). Как показано на рис. 1а, арбидол эффективно ингибировал вирусную инфекцию in vitro. Максимальная эффективная концентрация 50% (EC 50 ) и 50% цитотоксическая концентрация (CC 50 ) арбидола составляла 4,11 (3,55–4,73) и 31,79 (29,89–33,81) мкМ соответственно, а индекс селективности (SI = CC 50 / EC 50 ) было 7,73. Балоксавир частично подавлял инфекцию SARS-CoV-2 (~ 29%) при высокой концентрации 50 мкМ (рис. 1а). Напротив, ланинамивир, осельтамивир, перамивир и занамивир не проявляли активности против SARS-CoV-2 даже при самых высоких концентрациях препарата (рис.1а). Противовирусный эффект соединений также оценивали, наблюдая цитопатические эффекты (CPE) и иммунофлуоресцентное окрашивание инфицированных клеток. Как показано на дополнительном рисунке S1, при 48 часах на дюйм. только в клетках, обработанных арбидолом, но не другими пятью препаратами, экспрессия вирусных NP и CPE, вызванная SARS-CoV-2, была существенно снижена. Следует отметить, что мы также попробовали некоторые линии клеток легких человека, например фибробласты легких человеческого эмбриона MRC-5 и линию клеток рака легких Calu-3, однако они не были очень эффективны для репликации SARS-CoV-2 и, следовательно, не были использованный для этого исследования.

Рис. 1: Сравнительная противовирусная эффективность противогриппозных препаратов и механизм действия арбидола против инфекции SARS-CoV-2 in vitro.

а Противовирусная активность препаратов. Противовирусную эффективность оценивали на клетках Vero E6 с помощью qRT-PCR анализа выхода вируса через 48 ч p.i. Данные представляют собой среднее значение ± стандартное отклонение (SD) от двух независимых повторов. b , c Время добавления арбидола. Были созданы три экспериментальные группы (постоянная, начальная и пост-начальная), как описано в дополнительных методах.Через 16 ч p.i. выход вируса в клеточном супернатанте определяли количественно с помощью qRT-PCR ( b ), а экспрессию NP в инфицированных клетках анализировали с помощью вестерн-блоттинга ( c ). Значения под блотом представляют собой относительную интенсивность полосы (NP / GAPDH), нормализованную по отношению к группе ДМСО. d Влияние арбидола на связывание SARS-CoV-2. Клетки Vero E6 обрабатывали арбидолом (10 мкМ) или ДМСО в течение 1 часа перед заражением SARS-CoV-2 при 4 ° C в течение 1 часа. Супернатант (несвязанные вирионы) и клетки, содержащие связанные вирионы (связанные вирионы), собирали для количественного определения копий вирусной РНК с помощью qRT-PCR. e , f Влияние арбидола на внутриклеточный трафик SARS-CoV-2. Совместную локализацию вирионов с EE или LE анализировали с помощью иммунофлуоресцентных анализов, как описано в дополнительных методах. e Доля вирионов, которые совместно локализованы с EE или EL в каждой группе ( n > 150 клеток), была определена количественно с помощью изображения J. f Репрезентативные конфокальные микроскопические изображения вирионов (красный) и LAMP1 + EL. (зеленый) в каждой группе.Ядра (синие) окрашивали красителем Hoechst 33258. Белые стрелки: вирионы, локализованные вместе с EL; стержни: 10 мкм. Для ( b ) и ( e ) статистический анализ был выполнен с использованием одностороннего дисперсионного анализа (ANOVA) с GraphPad Prism. Для ( d ) был проведен статистический анализ и рассчитан непарный двусторонний тест t . * P <0,05; *** P <0,001; нс, не имеет значения.

Сообщается, что помимо вируса гриппа арбидол ингибирует широкий спектр вирусов, вмешиваясь в несколько этапов цикла репликации вируса 7 . Стадия репликации SARS-CoV-2, на которую нацелена арбидол, была исследована путем проведения предварительного эксперимента по времени добавления с использованием вируса с MOI 0,05. Арбидол инкубировали с клетками во время процесса проникновения вируса (Entry), стадий после входа (Post-entry) или всего процесса инфицирования (Full-time), и выход потомства вируса количественно оценивали с помощью qRT-PCR. Данные показали, что арбидол эффективно блокировал как проникновение вируса, так и пост-входную стадию. Он оказал сильное влияние на проникновение вируса (ингибирование ~ 75%) с меньшим влиянием на события после входа (уровень ингибирования ~ 55%) (рис.1б). Кроме того, вестерн-блоттинг (рис. 1c) и иммунофлуоресцентная микроскопия (дополнительный рис. S2) подтвердили, что уровень экспрессии вирусных NP резко снизился в течение полного рабочего дня (13% в группе DMSO, рис. 1c), и показал больший ингибирующий эффект на этапе входа (41%), чем на этапе после входа (61%).

Подробности того, как арбидол блокирует проникновение SARS-CoV-2 в клетки, были дополнительно исследованы. Вирусу (MOI = 0,05) позволяли связываться с клетками Vero E6 при 4 ° C в течение 1 ч в присутствии арбидола (10 мкМ) или контроля ДМСО.Частицы вируса, связанные с клеткой (связанные вирионы), и частицы в супернатанте (несвязанные вирионы) анализировали с помощью qRT-PCR. Результаты показали, что лечение арбидолом привело к значительному снижению эффективности связывания (67%) по сравнению с контрольной группой ( P <0,05) (рис. 1d). Соответственно, доля несвязавшихся вирионов значительно увеличилась до 156% от контрольной группы после обработки арбидолом ( P <0,001) (рис. 1d).

Затем мы проанализировали внутриклеточный трафик вирусов.Как мы недавно сообщали, внутри инфицированных клеток SARS-CoV-2 подвергался транспортировке везикул, которая сначала осуществлялась ранними эндосомами (EE), а затем переносилась в эндолизосомы (EL) 8 . Совместную локализацию вирионов с EE или EL визуализировали с помощью иммунофлуоресцентной микроскопии и статистически анализировали ( n > 150 клеток). Как показано на рис. 1e и дополнительном рис. S3, в каждой отслеживаемой временной точке не было значительной разницы в количествах вирионов, совместно локализованных с EE, при сравнении групп, обработанных ДМСО и арбидолом, хотя по мере того, как время заражения шло на (30, 60 и 90 мин с.i.), уровни совместной локализации значительно снизились в группах, обработанных как ДМСО- (24,0%, 5,1% и 3,2%), так и арбидолом (21,4%, 4,1% и 2,8%), что позволяет предположить, что некоторые вирионы уже были транспортируется от ЭЭ к следующему этапу транспорта везикул. Напротив, через 60 мин после введения немного более высокий процент вирионов переносился в EL в группе, обработанной арбидолом (22,4%), чем в группе ДМСО (18,3%) ( P <0,05) (рис. 1e, f ). При 90 мин p.i. значительно меньше вирионов (~ 13.5%) были обнаружены в EL в группе ДМСО; тогда как значительно более высокие доли вирионов (~ 23,6%) оставались в пределах EL в группе, получавшей арбидол, что позволяет предположить, что лекарство захватило вирус в ELs ( P <0,001) (рис. 1e, f). Взятые вместе, эти результаты свидетельствуют о том, что арбидол препятствует не только прикреплению вируса, но и высвобождению SARS-CoV-2 из внутриклеточных везикул (EL).

Среди протестированных препаратов ланинамивир, осельтамивир, перамивир и занамивир являются ингибиторами нейраминидазы (НА), которые наиболее широко назначаются для профилактики и лечения гриппа.Хотя у SARS-CoV-2 аналогов NA не существует, ингибиторы NA, такие как осельтамивир, тем не менее, клинически используются для лечения пациентов с COVID-19 1,2 . Наши данные показали, что эти ингибиторы NA не активны против SARS-CoV-2 (рис. 1a), что согласуется с выводом о том, что осельтамивир и занамивир неэффективны в подавлении SARS-CoV 9 . Балоксавир марбоксил – это новое лекарство от гриппа, которое избирательно ингибирует эндонуклеазную активность вирусной полимеразы, ответственной за отрывание кэпированных праймеров от мРНК хозяина для инициации транскрипции вирусной мРНК.Однако этот эндонуклеазный механизм «захвата кэпа» не является общим для коронавирусов, которые кодируют свои собственные ферменты для образования кэп-структур 5ʹ-мРНК 10 . Это может объяснить, почему балоксавир не смог блокировать инфекцию SARS-CoV-2 (рис. 1а). В процессе обзора этого исследования Choy et al. также показали, что осельтамивир и балоксавир не могут ингибировать SARS-CoV-2 in vitro 11 .

Арбидол, производное индола, на протяжении десятилетий лицензировался в России и Китае против гриппа.Это препарат широкого спектра действия против широкого спектра вирусов в оболочке и без нее. Арбидол взаимодействует преимущественно с ароматическими аминокислотами и влияет на несколько стадий жизненного цикла вируса, либо напрямую воздействуя на вирусные белки, либо на связанные с вирусом факторы хозяина 7 . Например, в вирусе гриппа кристаллические структуры показали, что арбидол вставлен в гидрофобный карман субъединицы слияния HA, таким образом препятствуя конформационному изменению HA при низком pH и блокируя процесс слияния 12 .В вирусе гепатита С арбидол нарушал как прикрепление вируса, так и движение внутриклеточных пузырьков 13 . Сходным образом мы обнаружили, что арбидол играет роль в препятствовании связыванию SAS-CoV-2 (рис. 1d) и перемещению внутриклеточных пузырьков (рис. 1e, f). Арбидол также может связываться с липидными мембранами и может изменять конфигурацию мембран цитоплазмы или эндосомы, которые имеют решающее значение для прикрепления и слияния вирусов 7 . Можно дополнительно изучить, нацелен ли арбидол на вирус и / или клетки, используя опубликованный метод 14 .

Таким образом, из шести противогриппозных препаратов только арбидол эффективно подавлял инфекцию SARS-CoV-2. Функционально он, по-видимому, блокирует проникновение вируса, препятствуя прикреплению и высвобождению вируса из EL. Хотя SI арбидола относительно низок (SI = 7,73), его фармакокинетический профиль, такой как максимальная концентрация (Cmax), более важен для прогнозирования эффективности. Обычно считается, что если Cmax достигает EC 90 , лекарство, скорее всего, будет эффективным; тогда как если Cmax достигает EC 50 , лекарство, возможно, эффективно in vivo.У людей однократное пероральное введение 800 мг арбидола приводит к Cmax ~ 4,1 мкМ 15 , и эта доза является эффективной и безопасной в отношении различных вирусов гриппа со значениями EC 50 в диапазоне 2,5–20 мкМ 7,16 . Арбидол также показал противовоспалительную активность, что может повысить его эффективность in vivo 16 . Учитывая, что EC 50 (4,11 мкМ) арбидола против SARS-CoV-2 сопоставим или даже ниже, чем у вирусов гриппа, мы, следовательно, предполагаем, что арбидол потенциально эффективен для лечения пациентов с COVID-19.Однако текущая доза арбидола (200 мг, 3 раза в день), рекомендованная китайскими руководящими принципами, может не обеспечить идеальной терапевтической эффективности для подавления инфекции SARS-CoV-2, и ее следует повысить. Это необходимо подтвердить клиническими испытаниями.

Ссылки

  1. 1.

    Chen, N. et al. Эпидемиологические и клинические характеристики 99 случаев новой коронавирусной пневмонии 2019 г. в Ухане, Китай: описательное исследование. Ланцет 395 , 507–513 (2020).

    CAS Статья Google Scholar

  2. 2.

    Huang, C. et al. Клинические особенности пациентов, инфицированных новым коронавирусом 2019 г., в Ухане, Китай. Ланцет 395 , 497–506 (2020).

    CAS Статья Google Scholar

  3. 3.

    Wang, M. et al. Ремдесивир и хлорохин эффективно подавляют недавно появившийся новый коронавирус (2019-nCoV) in vitro. Cell Res. 30 , 269–271 (2020).

    CAS Статья Google Scholar

  4. 4.

    Ван, З., Ян, Б., Ли, К., Вэнь, Л. и Чжан, Р. Клинические особенности 69 случаев коронавирусной болезни в 2019 г. в Ухане, Китай. Clin. Заразить. Dis . ciaa272 (2020).

  5. 5.

    De Clercq, E. & Li, G. Утвержденные противовирусные препараты за последние 50 лет. Clin. Microbiol. Ред. 29 , 695–747 (2016).

    Артикул Google Scholar

  6. 6.

    Гаспарини, Р., Амициция, Д., Лай, П. Л., Брагацци, Н. Л. и Панатто, Д. Соединения с противогриппозной активностью: настоящее и будущее стратегий оптимального лечения и ведения гриппа. Часть I: Жизненный цикл гриппа и доступные в настоящее время лекарства. J. Prev. Med. Hyg. 55 , 69–85 (2014).

    CAS PubMed PubMed Central Google Scholar

  7. 7.

    Блейзинг, Дж., Поляк, С. Дж. И Пешер, Э. И. Арбидол как противовирусное средство широкого спектра действия: обновленная информация. Антивирь. Res. 107 , 84–94 (2014).

    CAS Статья Google Scholar

  8. 8.

    Liu, J. et al. Гидроксихлорохин, менее токсичное производное хлорохина, эффективно подавляет инфекцию SARS-CoV-2 in vitro. Cell Discov. 6 , 16 (2020).

    CAS Статья Google Scholar

  9. 9.

    Tan, E. L. et al. Подавление коронавирусной инфекции SARS in vitro клинически одобренными противовирусными препаратами. Emerg. Заразить. Дис. 10 , 581–586 (2004).

    CAS Статья Google Scholar

  10. 10.

    Декрол, Э., Феррон, Ф., Лескар, Дж. И Канард, Б. Обычные и нетрадиционные механизмы кэпирования вирусной мРНК. Nat. Rev. Microbiol. 10 , 51–65 (2011).

    Артикул Google Scholar

  11. 11.

    Choy, K. T. et al. Ремдесивир, лопинавир, эметин и гомохаррингтонин ингибируют репликацию SARS-CoV-2 in vitro. Antiviral Res. 178 , 104786 (2020).

    CAS Статья Google Scholar

  12. 12.

    Кадам Р. У. и Уилсон И. А. Структурные основы ингибирования слияния вируса гриппа противовирусным препаратом Арбидол. Proc. Natl Acad. Sci. США 114 , 206–214 (2017).

    CAS Статья Google Scholar

  13. 13.

    Blaising, J. et al. Арбидол подавляет проникновение вирусов, препятствуя клатрин-зависимому трафику. Антивирь. Res. 100 , 215–219 (2013).

    CAS Статья Google Scholar

  14. 14.

    Si, L. et al. Тритерпеноиды манипулируют широким спектром слияния вируса с хозяином посредством обертывания домена HR2, преобладающего в вирусных оболочках. Sci. Adv. 4 , eaau8408 (2018).

    CAS Статья Google Scholar

  15. 15.

    Sun, Y. et al. Фармакокинетика однократных и многократных пероральных доз арбидола у здоровых китайских добровольцев. Внутр. J. Clin. Pharmacol. Ther. 51 , 423–432 (2013).

    CAS Статья Google Scholar

  16. 16.

    Liu, Q. et al. Противовирусная и противовоспалительная активность арбидола гидрохлорида при инфицировании вирусом гриппа A (h2N1). Acta Pharmacol. Грех. 34 , 1075–1083 (2013).

    CAS Статья Google Scholar

Скачать ссылки

Благодарности

Мы благодарим профессора Чжэньхуа Чжэн из Уханьского института вирусологии за любезно предоставленные кроличьи поликлональные антитела против LAMP1; Beijing Savant Biotechnology Co., ltd за любезное предоставление моноклональных антител против NP; Цзя Ву, Цзюнь Лю и Хао Тан из лаборатории BSL-3 и доктору Дин Гао из основного факультета Уханьского института вирусологии за их критическую поддержку; ДокторВасилия Арифа за научное редактирование статьи. Эта работа была поддержана грантами Национального научно-технического проекта «Основные инновации и разработки в области новых лекарственных средств» (2018ZX09711003), Национальной программы ключевых исследований и разработок Китая (2020YFC0841700) и Национального фонда естественных наук Китая (31621061).

Информация об авторе

Заметки автора

  1. Эти авторы внесли равный вклад: Си Ван, Жуйюань Цао, Хуанью Чжан

Принадлежности

  1. Государственная ключевая лаборатория вирусологии, Институт вирусологии Ухани, Центр биобезопасности, мега-наука Китайская академия наук, Ухань, 430071, Китай

    Си Ван, Хуанью Чжан, Цзя Лю, Минюэ Сюй, Хенгруй Ху, Юйфэн Ли, Сюлянь Сунь, Синлоу Ян, Чжэнли Ши, Фэй Дэн, Чжихонг Ху и Манли Ван

    2. Национальный инженерный исследовательский центр по лекарствам неотложной помощи, Пекинский институт фармакологии и токсикологии, Пекин, 100850, Китай

    Жуйюань Цао, Лей Чжао, Вэй Ли и Ву Чжун

  2. Университет Китайской академии наук, Пекин, 100049 , Китай

    Huanyu Zhang, Mingyue Xu, Hengrui Hu & Yufeng Li

  3. Национальный центр вирусных ресурсов Уханьского института вирусологии Китайской академии наук, Ухань, 430071, Китай

    Фей Дэн

Вклады

М.W., W.Z. и Z.H. задумал и разработал эксперименты. X.W., R.C., H.Z., J.L., M.X., H.H., Y.L., L.Z., W.L., X.Y., Z.S. и F.D. участвовал во множестве экспериментов; M.W., Z.H., W.Z., X.W., R.C., H.Z., J.L., M.X., H.H. Y.L. и X.S. проанализировали данные. M.W., R.C. и Z.H. написал газету. Z.H., M.W. и W.Z. обеспечил окончательное одобрение статьи.

Авторы-корреспонденты

Переписка на Чжихун Ху или У Чжун или Манли Ван.

Этические декларации

Конфликт интересов

Авторы заявляют об отсутствии конфликта интересов.

Дополнительная информация

Примечание издателя Springer Nature сохраняет нейтралитет в отношении юрисдикционных претензий на опубликованных картах и ​​сведениях об учреждениях.

Дополнительная информация

Права и разрешения

Открытый доступ Эта статья находится под лицензией Creative Commons Attribution 4.0 International License, которая разрешает использование, совместное использование, адаптацию, распространение и воспроизведение на любом носителе или любом формате при условии, что вы надлежащим образом укажете автора (авторов) и источник, укажите ссылку на лицензию Creative Commons и укажите, были ли внесены изменения.Изображения или другие материалы третьих лиц в этой статье включены в лицензию Creative Commons для статьи, если иное не указано в кредитной линии для материала. Если материал не включен в лицензию Creative Commons для статьи и ваше предполагаемое использование не разрешено законодательными актами или превышает разрешенное использование, вам необходимо получить разрешение непосредственно от правообладателя. Чтобы просмотреть копию этой лицензии, посетите http://creativecommons.org/licenses/by/4.0/.

Перепечатки и разрешения

Об этой статье

Цитируйте эту статью

Wang, X., Cao, R., Zhang, H. et al. Препарат против вируса гриппа, арбидол, является эффективным ингибитором SARS-CoV-2 in vitro. Cell Discov 6, 28 (2020). https://doi.org/10.1038/s41421-020-0169-8

Скачать цитату

Дополнительная литература

  • Выявление и перепрофилирование противовирусных препаратов против коронавируса 2 тяжелого острого респираторного синдрома с использованием подходов in silico и in vitro

    Сообщения о биохимических и биофизических исследованиях (2021 год)

  • Характеристики SARS-CoV-2 и COVID-19

    • Бен Ху
    • , Хуа Го
    • , Пэн Чжоу
    • и Чжэн-Ли Ши

    Обзоры природы, микробиология (2021 год)

  • Внутренняя стабильность противовирусного препарата умифеновир по результатам стресс-тестирования и DFT-исследований

    • Philippe-Henri Secretan
    • , Hassane Sadou Yayé
    • , Audrey Sogaldi
    • , Marie Antignac
    • , Lionel Tortolano
    • , Olivier Thirion
    • , Victoire
      • Vieillagard
    • и Victoire Vieillard Журнал фармацевтического и биомедицинского анализа (2021 год)

    • CoViTris2020 и ChloViD2020: новая надежда на лечение COVID-19

      Молекулярное разнообразие (2021 год)

    • Снижение патологической активности белка SARS-CoV-2 с помощью малых молекул

      • Доната Плюскота-Карватка
      • , Марчин Хоффманн
      • и Ян Барцишевски

      Журнал фармацевтического анализа (2021 год)

    Арбидол и другие низкомолекулярные препараты, ингибирующие вирусы Ласса и Эбола

    Препараты, которые блокируют опосредованное GP LASV и EBOV проникновение, с аналогичной эффективностью.Мы начали это исследование со сравнения способности восьми препаратов подавлять LASV и EBOV GP-опосредованную инфекцию. Все восемь доступны перорально, устойчивые при комнатной температуре небольшие молекулы, которые блокируют вход EBOV (18–20, 22, 23, 40, 50) и процессы входа в цель, также используемые LASV (20–23, 51–53). Шесть одобрены для клинического использования, а два проходят расширенные клинические испытания. Эти коллективные особенности предлагают практические преимущества (например, чистые затраты и простоту транспортировки и доставки) по сравнению с новыми лекарствами, многие из которых разработаны по принципу «одно лекарство – одно средство» (54).

    Пять препаратов продемонстрировали схожую эффективность против LASV и EBOV GP-опосредованного входа (таблица 1). Зонипорид, ингибитор обменника Na + / H + в плазматической мембране, блокирует заражение аренавирусом LCMV, препятствуя макропиноцитотическому захвату вирусных частиц (52). Поскольку и LASV (30), и EBOV (55, 56) попадают в клетки посредством макропиноцитоза, мы ожидали и обнаружили, что зонипорид имеет сходную активность против обоих. Два препарата, которые ухудшают закисление эндосом, необходимые для проникновения обоих вирусов (25, 49) – амодиахин (противомалярийный) и никлозамид (противоглистный) – также показали схожую эффективность против этих двух вирусных терапевтов в наших прямых сравнительных тестах.Оба, хотя и не в прямых сравнительных исследованиях, показали, что они подавляют многие патогены, проникающие в клетки путем эндоцитоза (21–23, 57–60). Четвертым препаратом с аналогичной активностью против обоих вирусов является апилимод, который ингибирует PIKfyve, фермент, необходимый для позднего созревания эндосом (51, 53, 61) и проникновения EBOV (27). Apilimod блокирует транспортировку EBOV в поздние эндосомы (51, 53), которые служат порталами как для EBOV, так и для LASV (25, 26, 62–64). Пятым препаратом с аналогичной эффективностью против LASV GP- и EBOV GP-опосредованного входа является арбидол (Умифеновир), синтетический противовирусный препарат, одобренный и используемый в России и Китае для борьбы с гриппом и обладающий противовирусным действием широкого спектра действия (33, 34, 36). , 38, 39).

    Три других препарата – кломифен, торемифен и сертралин – показали в ~ 3-6 раз большую активность против EBOV GP-, чем LASV GP-опосредованное проникновение. Это ИБС, которые блокируют инфекции EBOV (19, 20, 22, 23, 40) и вызывают накопление холестерина в поздних эндосомах, имитируя эффекты дисфункционального NPC1, рецептора EBOV (27, 28, 65). Поскольку LASV также проникает в клетки через поздние эндосомы (31), CADs могут препятствовать проникновению LASV из-за общих нарушений функции поздних эндосом. Повышенная активность торемифена и сертралина против EBOV (таблица 1) может быть связана с тем, что они могут связываться как с EBOV GP, как показывают анализы термостабильности и рентгеновской кристаллографией (66, 67), так и с вирусной и / или эндосомной мембраной ( 35, 39, 45, 66).

    Механизмы, с помощью которых арбидол может блокировать проникновение LASV и инфицирование. Арбидол продемонстрировал примерно эквивалентную эффективность против LASV и EBOV GP-опосредованной псевдовирусной инфекции (рис. 1 и таблица 1), блокировал заражение аутентичным LASV (рис. 3) и был в некоторой степени более эффективен при блокировании LASV GP- по сравнению с HA-опосредованным слиянием и проникновением вируса гриппа (фиг. 2B и фиг. 4B). Было предложено три механизма действия арбидола против гриппа: прямое связывание с HA ( K d [константа диссоциации], 47 мкМ для связывания с HA вируса гриппа PR8) (38, 44) и, как было предложено, для других вирусы, связывающиеся с вирусной и / или целевой мембраной, чтобы снизить способность к слиянию (34, 35).Связываясь с ГК и стабилизируя ее, арбидол сдвигает порог pH для конформационных изменений, вызывающих слияние, на ∼0,2–0,3 ед. В более кислом направлении (37, 38). Это примечательно, поскольку даже такие небольшие изменения рН слияния могут значительно повлиять на инфекционность вируса гриппа (67). Точно так же мы обнаружили, что арбидол сдвигает pH-зависимость диссоциации LASV GP1 от GP2 на ~ 0,5 ед. (В более кислую сторону). Считается, что это событие разжимает субъединицу слияния LASV (GP2), аналогично разжиманию гриппа HA2 и gp41 ВИЧ.Следовательно, в дополнение к его вероятным общим эффектам нарушения слияния, вызванным интеркаляцией в вирусную и / или эндосомную мембрану (35, 45, 66), вероятно, что арбидол дополнительно влияет на стабильность LASV GP аналогично его эффектам. на грипп HA (37–39). И, как описано в другом месте (36), арбидол также может влиять на стадии до или после слияния.

    Терапевтический потенциал препаратов с аналогичной эффективностью против LASV и EBOV. Как указано во введении, долгосрочная цель состоит в том, чтобы идентифицировать лекарственный коктейль, который ингибирует как LASV, так и EBOV.Наше внимание уделяется перорально доступным, стабильным при комнатной температуре лекарствам, которые нацелены на процессы, общие для проникновения LASV и EBOV в клетки. В этом исследовании мы определили пять лекарств, которые нацелены на дискретные этапы входа и демонстрируют примерно равную эффективность против LASV и EBOV GP-опосредованного входа: ингибитор макропиноцитоза зонипорид, ингибиторы закисления эндосом амодиахин и никлозамид, ингибитор трафика апилимод и ингибитор слияния. арбидол.

    Хотя зонипорид не одобрен, он прошел стадию II клинических испытаний для лечения сердечно-сосудистых заболеваний.В качестве альтернативы может иметь применение одобренный FDA лекарственный препарат арипипразол (торговое название Abilify). Арипипразол блокирует инфекцию EBOV и действует синергетически с другими ингибиторами проникновения (20, 23). Предварительные данные свидетельствуют о том, что он блокирует интернализацию частиц EBOV, а также LASV GP-опосредованную инфекцию (лаборатория Дж. М. Уайта, неопубликованные данные). Ингибиторы закисления эндосом амодиахин и никлозамид доступны перорально и одобрены FDA для лечения малярии и глистных заболеваний соответственно. Для обоих максимальная концентрация в сыворотке ( C max ) находится в пределах диапазона IC 50 для активности против EBOV / LASV (20–23, 57, 68, 69).Новые производные амодиахина (59) или синергетические пары препаратов, содержащие амодиахин или никлозамид и другой агент, могут снизить необходимые дозы (23). И хотя ингибитор трафика апилимод хорошо переносится и является мощным антагонистом EBOV и LASV (51, 53, 70; также это исследование), в раннем тесте он не защищал мышей от летального заражения EBOV (см. Ссылку 23), вероятно, из-за его ингибирования продукции интерлейкина 12/23 (IL-12/23) (ссылка 61 и К. Роджерс, Л. Штунц, О. Штанко, Л.Мэллинджер, Дж. М. Уайт, М. Шмидт, С. Варга, Н. Батлер, Г. Бишоп и У. Мори, представлены для публикации).

    Среди протестированных ингибиторов слияния арбидол является кандидатом для дальнейшего рассмотрения, поскольку он показывает сходную активность против LASV и EBOV и, по нашим исследованиям, оказывается несколько более сильным против LASV- и EBOV GP- по сравнению с HA-опосредованным слиянием гриппа и Вход. Арбидол одобрен и используется в Китае и России против гриппа и показал поразительно широкую противовирусную активность (33, 36, 71).Однократная стандартная доза для человека (200 мг) арбидола дает на C max меньше (33, 72–74), чем наши предварительные показания (рис. 3) его IC 50 по сравнению с аутентичным LASV. Отметим, однако, что расчетные IC 50 s для арбидола против аутентичного LASV (рис. 3) и гриппа (39, 45, 75) аналогичны (примерно ~ 10 мкМ; варьируются для разных штаммов вируса гриппа). Поскольку стандартная доза арбидола при гриппе составляет 200 мг три (72) или четыре (75) раза в день, а так как арбидол имеет длительный период полувыведения (36), чистый (кумулятивный) C max при многократном ежедневном применении. ожидается, что дозировка будет значительно выше (M.Пейн, личное сообщение). Следовательно, поскольку стандартная доза арбидола клинически эффективна против гриппа (см., Например, ссылку 75), она может быть полезна против LASV и EBOV. Однако единственное заметное умеренное снижение титра (рис. 3) в сочетании с опытом с другим вирусом геморрагической лихорадки (76) свидетельствует против предложения арбидола в качестве самостоятельного терапевтического средства. Переносимая более высокая доза арбидола (74), нового производного арбидола (39, 44) или комбинация арбидола с другим лекарством (23, 77, 78) может снизить дозу, необходимую для достижения достижимой противовирусной эффективности.Что касается потенциального лекарственного коктейля, включающего арбидол, интересно, что, как сообщается, амантадин, римантадин, рибавирин и рибамидил усиливают активность арбидола против гриппа (79).

    Мы предполагаем, что доступный для перорального приема, стабильный при комнатной температуре, одобренный препарат или коктейль из одобренных препаратов можно было бы быстро развернуть для лечения или профилактики (подозреваемых) случаев LASV и EBOV, особенно в регионах по всему миру, которые сталкиваются с проблемами ресурсов, инфраструктуры и доступности.Такое лекарство или лекарственный коктейль может быть ценным до того, как будет поставлен окончательный диагноз, одновременно с вакцинацией (например, для медицинских работников и / или первых ответчиков на вспышки) и / или во время установки кольцевой вакцинации. Здесь мы идентифицировали несколько препаратов с этими атрибутами, которые демонстрируют сходную степень ингибирования входа LASV и EBOV. Более того, три из них – амодиахин, никлозамид и арбидол – подавляют множественные вирусы в оболочке (33, 36, 57, 60, 71, 80–83). Следовательно, лекарство или лекарственный коктейль, содержащий эти лекарства, может ингибировать несколько вирусов в оболочке, которые проникают в клетки через эндоцитарный путь (49).

    Количественный анализ следов широкого спектра противовирусных препаратов в мышцах птицы с использованием жидкостной хроматографии с переключателем колонок в сочетании с тандемной масс-спектрометрией

    Реагенты и оборудование

    Метанол (MeOH) и ацетонитрил (ACN) для ВЭЖХ были получены от Biosolve (Валкенсваард) , Нидерланды). Муравьиная кислота (ФК) и аммиак (25% раствор в воде) были получены от Merck (Дармштадт, Германия). Вода Milli-Q была приготовлена ​​с использованием системы Milli-Q при удельном сопротивлении не менее 18.2 МОм · см −1 (Миллипор, Биллерика, Массачусетс, США). Римантадин HCl (чистота 99%) и амантадин HCl (чистота 100%) были получены от Sigma-Aldrich (Сент-Луис, Миссури, США) и арбидол (чистота 99,3%) от Amplachem (Кармель, Индиана, США). Занамивир (чистота 100%), рибавирин (чистота 99,5%), фосфат осельтамивира (чистота 98%) и карбоксилат осельтамивира (чистота 98%) и внутренние стандарты занамивир- 13 C 15 N 2 , рибавирин- 13 C 5 , осельтамивир- d 3 фосфат, осельтамивир- d 3 карбоксилат, римантадин- d 4 HCl и амантадин – d 15 HCl были получены от Toronto Research Chemicals (North York, ON, Canada).Исходные растворы осельтамивира, амантадина, римантадина, их соответствующих меченных изотопами внутренних стандартов и арбидола готовили в концентрации 100 мг / л -1 в МеОН. Исходные растворы занамивира, рибавирина, осельтамивира карбоксилата и их меченных изотопами внутренних стандартов были приготовлены в концентрации 100 мг / л -1 в воде. Все разведения исходных растворов готовили свежими ежедневно в воде Milli-Q.

    Подготовка образца

    Один грамм ткани птицы переносили в полипропиленовую (РР) пробирку для центрифуги и добавляли 4 мл МеОН при встряхивании с использованием вихревой мешалки.Затем пробирку встряхивали в течение 15 мин на роторном стакане. После центрифугирования (3600 г , 15 мин) верхний слой был изолирован путем декантации в центрифужную пробирку из полипропилена и подкислен путем добавления 20 мкл ЖК перед процедурой тандемной твердофазной экстракции (ТФЭ) (рис. 2а). .

    Рис. 2

    Схематическое изображение ( a ) двойной процедуры SPE и ( b ) процедуры ЖХ. Z занамивир, RB рибавирин, O осельтамивир, OC осельтамивир карбоксилат, AM амантадин, RM римантадин, AB арбидол

    Картридж Phenomenex (Торранс, Калифорния, США) Strata-X C 200 мг / 6 мл для ТФЭ с сильным катионообменником кондиционировали 4 мл 0.5 об.% FA в MeOH, pH 2. Чистую центрифужную пробирку из PP помещали под картридж Strata-X C перед тем, как подкисленный экстракт образца, а затем 1 мл MeOH, pH 2, наносили на картридж. Полный прорыв собирали в центрифужной пробирке из полипропилена (фракция А). После добавления 200 мкл 25% аммиака фракцию А центрифугировали (3600 г , 15 мин) и отставляли. Картридж Strata-X C промывали 4 мл МеОН, pH 2. Чистую центрифужную пробирку из РР помещали под картридж SPE, и противовирусные соединения элюировали из картриджа, используя 4 мл 0.75 об.% Аммиака в МеОН, pH 12, который собирали в центрифужной пробирке из РР (фракция В). Картридж с фенилбороновой кислотой (PBA) 100 мг / 3 мл для ТФЭ Agilent Technologies (Санта-Клара, Калифорния, США) кондиционировали 2 мл 0,5 об.% FA в H 2 O, pH 2, а затем 4 мл. MeOH, pH 12. Подщелоченную фракцию A наносили на картридж PBA, который затем промывали 4 мл MeOH, pH 12. Центрифужную пробирку PP, содержащую фракцию B, помещали под картридж PBA, и рибавирин элюировали из картриджа с использованием 4 мл MeOH, pH 2, который объединяли с фракцией B.Растворитель объединенных фракций упаривали в слабом потоке азота при 50 ° C до высыхания. Остаток повторно растворяли в 250 мкл воды и переносили во флакон автосэмплера жидкостной хроматографии и тандемной масс-спектрометрии (ЖХ-МС / МС).

    Анализ ЖХ – МС / МС

    Схематическое представление системы переключения колонок представлено в дополнительном электронном материале на рис. S1. «LC 1» состоял из вакуумного дегазатора Acquity, автоматического пробоотборника и насоса для бинарных растворителей (Waters, Milford, MA, USA).«LC 2» состояла из вакуумного дегазатора Separations (Hendrik-Ido-Ambacht, Нидерланды), камеры смешения и двух насосов для ВЭЖХ типа K-1001. «V1» и «V2» – это 6-ходовые клапаны (разделения), которые управляются «LC 1». «MS» – это масс-спектрометр Quattro Premier XE (Waters, Milford, MA, USA). «Колонка 1» представляет собой аналитическую колонку Waters Symmetry C 18 (3,0 × 150 мм, 5 мкм), а «колонка 2» – аналитическая колонка Hypercarb (3,0 × 100 мм, 5 мкм) Thermo Fisher Scientific (Waltham MA, США). .

    Из начального момента времени «LC 1» запускает градиент (растворитель A, 50 мМ FA в воде; растворитель B, 50 мМ FA в ACN): 0–6.0 мин, линейное увеличение от 0% до 5% B; 6,0–14,0 мин, линейное увеличение до 100% B; 14,0–14,5 мин, линейное уменьшение до 0% В; 14,5–20,0 мин, уравновешивание при 0% B, работа при потоке 0,4 мл мин. –1 . «LC 2» имеет градиент с использованием тех же растворителей: 0–6,0 мин, 5% B; 6,0–10,0 мин, линейное увеличение до 100% B; 10,0–11,0 мин, 100% B; 11,0 – 12,0 мин, линейное уменьшение до 0% В; 12,0–20,0 мин, уравновешивание при 0% B, работа при потоке 0,4 мл мин. –1 . Объем инъекции (введенный в «LC 1») составляет 50 мкл.

    Во время фазы 1, продолжающейся с начального времени до 6 мин, обе колонки размещаются последовательно. В начале фазы 2 (6,0 мин) «V2» переключается, и подвижная фаза «LC 1» проходит только через колонку Symmetry C 18 и отводится в отходы, тогда как мобильная фаза «LC 2» работает. через колонку Гиперкарб и попадает в МС. В начале фазы 3 (10,0 мин) ‘V1’ переключается, и подвижная фаза ‘LC 1’ проходит только через колонку Symmetry C 18 и входит в МС, тогда как подвижная фаза, проходящая через колонку Hypercarb, отклоняется. тратить.

    Детектирование проводили с использованием масс-спектрометра в режиме положительной ионизации электрораспылением (ESI). Рабочие параметры: капиллярное напряжение 1,0 кВ; смещение источника, 50 В; напряжение на конусе, таблица 1; температура источника 150 ° C; температура десольватации 450 ° С; конусный газовый поток, 100 л · ч −1 ; и десольватационный газ, 600 л · ч −1 . Противовирусные соединения были фрагментированы с использованием диссоциации, вызванной столкновением, и выбранные переходы для мониторинга реакции (SRM) приведены в таблице 1.Данные были получены и обработаны с использованием программного обеспечения MassLynx 4.1 (Waters). Занамивир- 13 C 15 N 2 , рибавирин- 13 C 5 , осельтамивир- d 3 , осельтамивир карбоксилат- d 3 , амантадин- d 15 и римантадин- d 4 использовались в качестве внутренних стандартов. Внутренний стандарт на арбидол отсутствовал.

    Таблица 1 Время удерживания, конусное напряжение, переходы SRM и время измерения противовирусных соединений и их внутренних стандартов

    Оптимизация метода

    В процессе разработки метода отслеживалось извлечение и влияние матрицы. Восстановление рассчитывали путем деления сигнала холостого образца птицы с добавлением соединений перед очисткой образца (матричный стандарт, MMS) на сигнал холостого образца мышц птицы с добавлением эквивалентного количества соединений, исходя из после 100% извлечения, после очистки образца (матричный стандарт извлечения, MMRS).Матричный эффект рассчитывали путем деления сигнала MMRS на сигнал стандартного раствора в воде эквивалентной концентрации. Матричные эффекты отсутствуют, если результат этого расчета равен 100%. Если результат ниже 100%, происходит подавление, а если результат выше 100%, происходит усиление сигнала.

    В качестве альтернативы установке переключателя колонок были протестированы различные отдельные аналитические колонки. zic-HILIC (Sequant, Умео, Швеция) испытывали в сочетании с градиентным элюированием с использованием формиата аммония в воде и ACN или MeOH в качестве подвижной фазы при pH в диапазоне от 3 до 10.Обращенная фаза (RP) C 18 была протестирована в сочетании с градиентным элюированием с использованием воды и ACN или MeOH в качестве подвижной фазы при pH в диапазоне от 3 до 11. Hypercarb был протестирован в сочетании с градиентным элюированием с использованием воды и ACN. МеОН или тетрагидрофуран в качестве подвижной фазы. Для каждого хроматографического условия влияние матрицы оценивали на основе образцов мышц птицы с добавками, используя только метанольную экстракцию в сочетании с выпариванием экстракционного растворителя и повторным растворением в подходящем растворителе.Мы стремились создать хроматографическую систему, которая обеспечивает достаточное удерживание всех соединений и адекватное отделение противовирусных препаратов от компонентов матрицы для минимизации эффектов матрицы.

    SPE с использованием сильного катионообменника и PBA были протестированы для очистки образцов. Экстракт пробы метанола с добавлением 50 мкг кг -1 подкисляли и наносили на картридж Strata-X C. Прорыв при нанесении и промывании собирали отдельно. Их и элюент анализировали с использованием системы ЖХ-МС / МС.Та же процедура была проделана для картриджей PBA, но затем метанольный экстракт с добавками подщелачивался перед нанесением.

    Валидация метода

    Полная валидация была проведена в соответствии с 2002/657 / EC [1]. Были определены следующие параметры: линейность, правильность, повторяемость, внутрилабораторная воспроизводимость, предел принятия решения (CCα), способность обнаружения (CCβ), селективность и надежность. Валидация проводилась в трех разных случаях двумя разными техниками с использованием разных партий картриджей SPE и включала 21 образец мышечной ткани птицы.

    Линейность

    В три разных дня была подготовлена ​​согласованная с матрицей калибровочная линия, включающая следующие уровни калибровки: 0, 2,5, 5, 10, 15 и 20 мкг кг -1 (шесть точек данных, включая ноль) путем добавления растворов противовирусных препаратов для холостых проб мышц птицы. Калибровочные линии были построены путем нанесения площадей пиков, нормированных на площади пиков внутренних стандартов, в зависимости от добавленной концентрации и проведения линейной регрессии методом наименьших квадратов.Линейность считалась приемлемой, если коэффициент корреляции составлял не менее 0,990.

    Правильность, повторяемость и воспроизводимость в лабораторных условиях

    В каждый из 3 дней отбирали и анализировали семь различных холостых образцов мышц домашней птицы и добавляли 5, 10 и 15 мкг кг -1 . Для каждого образца уровень отдельных противовирусных препаратов рассчитывали с использованием калибровочной линии, построенной в тот же день. Правильность рассчитывалась для каждого уровня путем деления общей средней рассчитанной концентрации на номинальную концентрацию.Согласно 2002/657 / EC [1] правильность на выбранных уровнях валидации должна составлять от 80 до 110%.

    Воспроизводимость и внутрилабораторная воспроизводимость рассчитывались с использованием однофакторного дисперсионного анализа (ANOVA). Согласно 2002/657 / EC [1] относительная внутрилабораторная воспроизводимость (RSD RL ) и относительная повторяемость (RSD r ) считаются приемлемыми, если они ниже значения, рассчитанного по уравнению Хорвица [40] и два трети этой стоимости, соответственно (т.е. ниже 31,7% и 21,1% соответственно при уровне валидации 10 мкг кг -1 ). Томпсон [41], однако, продемонстрировал, что уравнение Хорвица не применимо к более низкому диапазону концентраций (<120 мкг кг -1 ), и предложил дополнительную модель. На основе этой модели допустимы RSD RL и RSD r , если они ниже 22% и 14,7% соответственно. Для этого валидационного исследования были приняты последние, более строгие критерии. Утверждается, что, поскольку в течение 1 дня использовались разные образцы мышц домашней птицы, повторяемость не является чистой воспроизводимостью, как указано в 2002/657 / EC [1].Однако использование различных образцов мышц птицы в течение 1 дня позволяет лучше понять различия между образцами, а валидация лучше отражает ситуацию обычного анализа.

    Предел принятия решения и способность обнаружения

    В ЕС не установлены правила использования противовирусных препаратов в производстве продуктов питания. В США FDA запретило использование противовирусных препаратов вне маркировки [20]. Следовательно, подтверждение подлинности противовирусных препаратов должно проводиться на как можно более низких уровнях.Следовательно, предел принятия решения (CCα) был рассчитан на основе нулевой толерантности в соответствии с 2002/657 / EC [1] для определения образцов, которые содержат противовирусные препараты и, таким образом, отклоняются от холостого образца (α-ошибка составляет 1%). CCα рассчитывали на основе ширины полосы сигнала в холостых пробах ( n = 21) во временном окне, в котором ожидается наличие аналита. CCβ – это способность обнаружения и выражает концентрацию противовирусных препаратов в мышцах птицы, при которой образец будет признан несоответствующим (β-ошибка составляет 5%).CCβ определяли на основе ширины полосы сигнала в холостых пробах ( n = 21) и ширины полосы сигнала в пробах с добавлением 10 мкг кг -1 (занамивир и рибавирин, n = 21). ) или 5 мкг кг -1 (другие противовирусные препараты, n = 21) во временном окне, в котором ожидается аналит. Отдельные холостой пробы и пробы с добавками анализировались в трех разных случаях, и вычисления проводились, как было предложено Antignac et al.[42], но без нормализации по сигналу внутренних стандартов.

    Селективность

    Селективность метода была изучена на основе практических и теоретических исследований. Во-первых, 21 проанализированный холостой образец был проверен на интерференцию при временах удерживания, соответствующих противовирусным препаратам. Во-вторых, в базах данных был произведен поиск соединений, имеющих молекулярную массу, равную противовирусным препаратам, которые могли присутствовать в образцах мышц птицы.Стандартные растворы 100 мкг L -1 андроста-1,4-диен-3,17-диона (ADD), 5-гидроксифлуниксина и тетрагидрогестринона (THG), указанных как возможные мешающие соединения, были проанализированы с использованием разработанного метода. Полученные хроматограммы проверяли на наличие интерференции при временах удерживания, соответствующих противовирусным препаратам.

    Устойчивость

    Устойчивость метода стала очевидной во время оптимизации подготовки проб, хроматографических условий и параметров МС.Кроме того, некоторые незначительные изменения в методе были протестированы в двух экземплярах: (1) экстракция в течение 30 минут вместо 15, (2) сушка картриджей PBA путем применения вакуума в течение 1 минуты после нанесения экстракта и после промывки картриджа и (3) испарение растворителя при 55 ° C вместо 50 ° C. Правильность и повторяемость результатов сравнивали с характеристиками обычного метода.

    Применение к реальным образцам

    Пригодность разработанного метода была проверена путем его применения к затронутым материалам образцов.Пораженная амантадином птица и мышцы индейки были любезным подарком от Агентства по исследованию пищевых продуктов и окружающей среды (FERA), Йорк, Великобритания. Определенные уровни с помощью разработанного метода сравнивали с указанной концентрацией амантадина в образцах, составляющей примерно 4 мкг -1 для мышц птицы и 8-25 мкг -1 для мышц индейки.

    римантадин

    Римантадин (МНН, продаваемый под торговым наименованием Флумадин ) представляет собой пероральный противовирусный препарат, используемый для лечения и в редких случаях предотвращения инфекции, вызванной вирусом гриппа А.При приеме в течение одного-двух дней после появления симптомов римантадин может сократить продолжительность и уменьшить тяжесть гриппа. Это производное адамантана, как и аналогичный препарат амантадин. Он был одобрен Управлением по санитарному надзору за качеством пищевых продуктов и медикаментов (FDA) в 1994 году.

    Рекомендуемые дополнительные знания

    Механика

    Ученые не понимают, почему работает римантадин, но считают, что он подавляет репликацию вируса гриппа, возможно, предотвращая снятие оболочки с защитных оболочек вируса, которые являются оболочкой и капсидом.Генетические исследования показывают, что вирусный белок M2, ионный канал, определяемый геном вириона M2, играет важную роль в чувствительности вируса гриппа A к ингибированию римантадином. Устойчивость к римантадину может возникать в результате аминокислотных замен в определенных местах трансмембранной области M2. Это предотвращает связывание противовирусного препарата с каналом. [необходимо ссылок ]

    Лекарственные взаимодействия

    Известно, что прием парацетамола (тайленола) или аспирина во время приема римантадина снижает усвоение римантадина организмом примерно на 12%.[1] Циметидин также влияет на усвоение организмом римантадина.

    Побочные эффекты

    Римантадин может вызывать побочные эффекты со стороны желудочно-кишечного тракта и центральной нервной системы. Исследования показали, что он вызывает меньше побочных эффектов, чем другие противовирусные препараты от гриппа. Примерно 6% пациентов (по сравнению с 6% пациентов, принимавших плацебо) сообщили о побочных эффектах [2]. Общие побочные эффекты включают:

    • тошнота
    • расстройство желудка
    • нервозность
    • усталость
    • легкомысленность
    • проблемы со сном
    • трудности с концентрацией внимания
    907avir 42 Пикавир 907avir42 907avirin 907avirin 907avir4 (РНК, IV)
    Противовирусные препараты, кроме ВИЧ (в основном J05, а также S01AD и D06BB)
    Антигерпесвирус (ДНК, I) аналоги гуанина (ацикловир, фамцикловир, валцикловир, валцикловир, валцикловир, валцикловир ) • аналогов нуклеозидов (идоксуридин, трифлуридин, Видарабин) • Цидофовир • Докозанол • Фомивирсен • Фоскарнет • Тромантадин
    HPV / MC (ДНК, I) Имиквимод • Имиквимод • ДНК Подофилло- ) Адефовир дипивоксил • Интерферон альфа-2b • Пегилированный интерферон альфа-2а • Ламивудин • Энтекавир • Телбивудин • Тенофовир †
    Гепатит С (RNA,
    Плеконарил
    Противогриппозные средства (РНК, V) Арбидол

    Производные адамантана / ингибиторы M2 (Амантадин, Римантадин )

    Ингибиторы нейраминидазы (Осельтамивир, Перамивир † , Занамивир)
    ВИЧ (обратный, VI) См. HIV Pharm
    Другие противовирусные средства Инозин 9075 общий,
    † Проходит клинические испытания, не одобрено FDA.
    90 744 Пандемии гриппа
    Грипп
    Грипп Исследования – Вакцина – Птичий грипп – Лечение – Секвенирование генома – Сезон
    Вирусы гриппа Influenza Influenza C 9075 – Influenza 9075 – вируса гриппа A h2N1 – h2N2 – h3N2 – h4N1 – h4N2 – h4N8 – H5N1 – H5N2 – H5N3 – H5N8 – H5N9 – H7N1 – H7N2 – H7N3 – H7N4 – H7N1 – H7N2 – H7N3 – H7N4 – H7N4 – h204 907 907 907 907 907 – H7N7 907 907 h20 – H9N7 907 907 905 – Передача и инфекция – Глобальное распространение – Клинические испытания – Смертность человека
    Противовирусные препараты Арбидол – производных адамантана (Амантадин, Римантадин ) – Ингибиторы нейраминидазы (Осельтамивир, Зельтамивир, Перамивир 900) (Перамивир)
    Вакцины против гриппа FluMist – Fluzone
    Азиатский грипп – Гонконгский грипп – Испанский грипп – Фуцзянский грипп – Индекс серьезности пандемии
    Грипп у млекопитающих, кроме человека Грипп собак – Грипп лошадей – Грипп свиней

    молекул | Бесплатный полнотекстовый | Антиоксидантный потенциал противовирусного препарата Умифеновир

    1.Введение

    Свободнорадикальные реакции играют важную роль в биологических функциях живых систем. Баланс между прооксидантами и антиоксидантами необходим для нормального гомеостаза клеток и организмов. Окислительный стресс играет важную роль во многих патологических процессах, включая вирусные инфекции, такие как грипп [1]. Избыточные активные формы кислорода (АФК) вызывают окислительное повреждение липидных мембран и дыхательной цепи митохондрий. Митохондрии служат платформой для противовирусного врожденного иммунитета.Передача митохондриальных противовирусных сигналов включает активацию I-подобных рецепторов гена, индуцируемого ретиноевой кислотой, что требует активности окислительного фосфорилирования. Клетки с респираторными дефектами демонстрировали серьезное нарушение индуцированной вирусом индукции интерферонов и провоспалительных цитокинов. Мыши с дефектами дыхательной цепи были очень восприимчивы к вирусной инфекции и демонстрировали выраженное воспаление легких [2]. Окислительный и нитрозативный стресс также может способствовать снижению противовирусного иммунитета, изменяя ось MDA-5 / IRF-3 / phosphoIRF-3, а также внося свой вклад в механизмы воспалительной реакции за счет увеличения NF-kappaB и увеличения скорости оборота клетки тимоцитов посредством активации Bcl2 / Bax [3].С другой стороны, противовирусные препараты могут сами проявлять генотоксические эффекты в результате чрезмерного производства активных форм кислорода (АФК) [4]. Следовательно, противовирусные препараты с антиоксидантным потенциалом будут защищать клетки, ингибируя перекисное окисление липидов и / или предотвращая окислительное окисление. повреждение митохондриальной дыхательной цепи. Противовирусная функция антиоксиданта также может включать модуляцию множества сигнальных путей / мишеней, полезных для репликации вируса [5]. Фактически, многие эффективные антиоксиданты обладают мощным противовирусным действием [6,7,8,9].Эффективность противовирусных препаратов можно повысить в сочетании с некоторыми антиоксидантами. В качестве примера продемонстрировано синергическое противовирусное действие интерферона альфа-2b в сочетании с унитиолом in vitro на различные варианты Herpes simplex [10]. Смесь эхинохрома А, аскорбиновой кислоты и альфа-токоферола (5: 5: 1) показала более высокие антиоксидантные и противовирусные эффекты, чем эхинохром А [11]. Внутрибрюшинное введение мышам природного антиоксиданта силимарина нейтрализовало генотоксические эффекты рибавирина в отношении митохондриальной ДНК [4].Силимарин также проявлял мощную противовирусную активность против вируса Маяро и снижал уровни малонового диальдегида и карбонильного белка, которые являются биомаркерами окислительного стресса [12]. Грипп часто вызывает пневмонию. Вирус повреждает эпителиальные клетки нижних дыхательных путей из-за репликации вируса в цилиндрическом мерцательном эпителии легких, что приводит к прогрессирующему повреждению альвеолярных клеток, бронхопневмонии (вирусной или комбинированной вирусно-бактериальной) и массивному бронхиту. Активные формы кислорода и НАДФН-оксидаза, продуцирующая АФК, имеют отношение к вирус-индуцированному эпителиальному апоптозу и повреждению легких [13].Комбинация противовирусных препаратов и конъюгатов пиран-СОД резко снижает продукцию АФК в альвеолярных макрофагах инфицированных гриппом мышей и защищает животных от гибели [14].

    Подводя итог, можно сказать, что окислительный баланс имеет решающее значение для поддержания нормального функционирования организма-хозяина, тогда как окислительный стресс, вызванный вирусом, влияет на внутриклеточный окислительно-восстановительный баланс, что приводит к значительным изменениям в системе защиты. Это обеспечивает терапевтический вариант для предотвращения вирусной инфекции и борьбы с ней.Противовирусные препараты должны характеризоваться своей про- и антиоксидантной активностью, поскольку это может влиять на терапевтическую эффективность.

    Умифеновир (C 22 H 25 BrN 2 O 3 S, этил-6-бром-4 – [(диметиламино) метил] -5-гидрокси-1-метил-2- [(фенилсульфанил) метил ] -1H-индол-3-карбоксилат) – пероральный противовирусный препарат, лицензированный для лечения и профилактики вирусных инфекций гриппа A и B в России в 1993 г. (Арбидол ® , ОАО «Фармстандарт-Лексредства») и в Китае. в 2006 году.Умифеновир быстро всасывается и распределяется по органам и тканям. Максимальная концентрация в плазме крови после приема разовой дозы 200 мг составляет около 415 нг / мл (примерно 0,9 мкМ) [15]. Умифеновир взаимодействует с белком гемагглютинина (HA) вирусов гриппа, стабилизирует его против перехода низкого pH в его фузогенное состояние и ингибирует HA-опосредованное слияние мембран во время инфицирования вирусом гриппа [16]. Противовирусная активность умифеновира была показана в исследованиях. vitro и in vivo для различных вирусов, включая типы гриппа A и B, а также других возбудителей острых респираторных инфекций (аденовирус, респираторно-синцитиальный вирус, коронавирус или вирус SARS, риновирус, вирус парагриппа) [17,18,19].Умифеновир подавляет различные штаммы вируса гриппа A, включая варианты, устойчивые к римантадину и озельтамивиру, а также вирусы гриппа B (IC50 2-8,5 мкг / мл), включая пандемический грипп A / California / 04/2009 (h2N1), A / California / 07/2009 (h2N1) и A / Moscow / 01/2009 (h2N1) вирусы swl в культивируемых клетках MDCK (IC50 = 1,5–4,0 мкг / мл), высокопатогенные вирусы птиц A (H5N1) с EC50 от 7,2 до 23,0 мкМ. Легкие мышей, получавших умифеновир, имели менее серьезные гистопатологические поражения по сравнению с контрольной группой [20].Умифеновир обладает противовирусным действием на микромолярном уровне (значения EC50 в диапазоне от 10,57 +/- 0,74 до 19,16 +/- 0,29 мкМ) в клетках Vero, инфицированных вирусом Зика, вирусом Западного Нила и вирусом клещевого энцефалита. Таким образом, арбидол может стать многообещающим терапевтическим средством для селективного лечения флавивирусных инфекций [21]. Чувствительность к умифеновиру вирусов гриппа, циркулирующих в сезонах 2012–2014 годов, а также чувствительность вируса гриппа А, выделенного от пациентов, была доказана в исследовании ARBITR [18].Все 18 клинических изолятов вирусов гриппа А, которые были получены до и во время терапии, были чувствительны к умифеновиру с 50% эффективной концентрацией в диапазоне от 8,4 +/- 1,1 до 17,4 +/- 5,4 мкМ без развития лекарственно-устойчивых вариантов [22]. Экспериментальные исследования при концентрациях 25–100 мг / мл доказали прямую противовирусную активность умифеновира в отношении ранней репликации вируса тяжелого острого респираторного синдрома (SARS) в культивируемых клетках GMK-AH-1 [23]. Умифеновир (Арбидол) лицензирован и широко используется в России для профилактики и / или лечения гриппа.Клинические испытания Умифеновира проводились в бывшем СССР в период 1980–1995 годов, а постмаркетинговые испытания фазы IV – в сезон гриппа 2011–2017 годов. В двойном слепом рандомизированном плацебо-контролируемом клиническом исследовании ARBITR (идентификатор ClinicalTrials.gov: NCT01651663) по изучению эффективности и безопасности арбидола среди 359 взрослых, которое проводилось в России, умифеновир (800 мг в день в течение пяти дней) значительно ( стр. 24]. Постмаркетинговое наблюдение за эффективностью умифеновира в клинической практике проводилось путем ретроспективного анализа 5287 больных гриппом и другими ОРВИ в 88 больницах из 50 регионов Российской Федерации.У пациентов, получавших умифеновир (в первые 48 ч от начала заболевания), продолжительность лихорадки и частота пневмонии оказались ниже, чем у пациентов, не получавших противовирусную терапию. Терапия умифеновиром существенно снижает продолжительность лихорадки и риск осложнений, особенно у пациентов с лабораторно подтвержденной инфекцией гриппа [25]. Профилактический эффект арбидола также изучался в рандомизированном плацебо-контролируемом исследовании у детей. Исследование проводилось в 1995 году Институтом Пастера в Санкт-Петербурге.-Петербург, и в него вошли 155 детей, получавших арбидол дважды в неделю в течение трех недель до пика заболеваемости гриппом. Профилактика арбидолом в 1,2–4 раза снизила общую заболеваемость (в зависимости от возрастной группы), продолжительность заболевания также сократилась на 1,8–3,5 дня [26]. Эффективность арбидола для профилактики и лечения гриппа может быть связана с сосуществованием двух его действий: (1) специфическая противовирусная активность против гриппа и других респираторных вирусов; (2) интерферон-индуцирующие и иммуномодулирующие свойства, которые были продемонстрированы на культивируемых клетках животных [27] и людей [28].Пациенты, получавшие арбидол с более низким исходным иммунитетом, показали улучшение иммунологических показателей (количество CD4, CD8 лимфоцитов и В-лимфоцитов, а также концентрация сывороточных иммуноглобулинов). Прием однократной пероральной дозы 0,1 г умифеновира здоровыми взрослыми добровольцами приводил к индукции сывороточного интерферона до 40–80 единиц интерферона / мл. Для детей введение 0,01 г / кг / сут приводит к увеличению выработки эндогенного интерферона в 5,3 раза у 70% испытуемых [28].Есть некоторые свидетельства того, что умифеновир способствует фагоцитарному действию макрофагов [29]. Наличие не только прямого противовирусного действия, но и других косвенных эффектов послужило поводом для исследования антиоксидантной активности умифеновира – свободной гидроксильной группы, обеспечивающей антиоксидантную активность умифеновира (рисунок 1). Ранее in vitro изучали антиоксидантный эффект умифеновира для предотвращения перекисного окисления липидов [30]. Авторы доказали, что это вещество является липидным антиоксидантом.Однако перекисное окисление липидов не ограничивает окислительный стресс. Оценка антиоксидантного потенциала по отношению к ROS-реакциям в водной фазе не менее важна, поскольку нелипидные ROS могут вызывать окислительную модификацию белков и ДНК. Необходимы дополнительные исследования, чтобы всесторонне охарактеризовать антиоксидантные свойства умифеновира. Традиционный подход основан на количественном сравнении с эталонным соединением для оценки антиоксидантной способности вещества. Этот параметр отражает способность вещества улавливать свободные радикалы.Например, широко используется метод TRAP (Total Radical-Tracking Antioxidant Potential), который основан на улавливании свободных радикалов, образованных термолабильными азосоединениями [31]. Однако этот метод не учитывает физико-химические характеристики антиоксиданта. Другая стратегия основана на оценке констант скорости взаимодействия антиоксиданта с радикалами [32,33]. В данной работе мы изучили антиоксидантные свойства умифеновира с использованием модифицированного протокола TRAP [34].При компьютерном моделировании химической кинетики предложены схема антиоксидантных реакций и константы скорости.

    3. Обсуждение

    Ранее было показано, что действие любого антиоксиданта на кинетику хемилюминесценции можно описать единственной реакцией между антиоксидантом и свободным радикалом [35]:

    R • + In → P (k In )

    В этом случае кинетика хемилюминесценции сильно зависит от константы скорости k In . В зависимости от значения k In и используемой системы хемилюминесценции все антиоксиданты можно разделить на сильные, средние и слабые (рис. 6а).Сильные антиоксиданты характеризуются высокими константами скорости и резко и полностью гасят хемилюминесценцию в течение фиксированного интервала времени, называемого «латентным периодом». Полное исчерпание антиоксиданта с последующим резким увеличением свечения приводит к окончанию латентного периода, который возвращает прежний стационарный уровень. В качестве примера на рис. 6а представлена ​​смоделированная хемулиминограмма для антиоксиданта с k In = 2000 нМ -1 мин. -1 .Слабые антиоксиданты с низкими константами скорости (например, k In = 10 нМ -1 мин -1 на рисунке 6a) не дают латентного периода. Вместо этого свечение немного уменьшается. Эффект слабых антиоксидантов пролонгирован, так как они очень медленно реагируют. Эффект средних антиоксидантов (k In = 100 нМ -1 мин. -1 на рисунке 6a) находится между эффектами сильных и слабых антиоксидантов. Добавление Trolox в систему хемилюминесценции приводит к полному подавлению хемилюминесценции, что типично для сильных антиоксидантов (рис. 5а).Одноступенчатая схема с k В = 2000 нМ −1 мин. −1 оказалось достаточно для успешного компьютерного моделирования. Тролокс можно отнести к категории сильных антиоксидантов с точки зрения кинетики. Для умифеновира кинетика хемилюминесценции более сложна (рис. 3а). Во-первых, сразу после добавления антиоксиданта происходит значительное, но неполное снижение интенсивности, что характерно для антиоксидантов средней силы. Во-вторых, имеется стадия небольшого снижения интенсивности хемилюминесценции с медленным и длительным подъемом люминесценции до стационарного уровня, что характерно для слабых антиоксидантов.Таким образом, необходима двухэтапная модель, состоящая из двух последовательных антиоксидантных реакций с разными константами скорости. На рисунке 6b приведены примеры смоделированных графиков для абстрактных антиоксидантов. Компьютерное моделирование подтвердило двухэтапный механизм антиоксидантного действия умифеновира. Найденные константы скорости 300 нМ −1 мин. −1 и 4 нМ −1 мин. -1 характерны для среднего и слабого антиоксиданта. Таким образом, с точки зрения кинетики Умифеновир можно отнести к средним антиоксидантам.Различие в механизмах действия тролокса и умифеновира делает невозможным использование методов TRAP и TAR для количественной оценки антиоксидантной способности умифеновира. В качестве меры антиоксидантной способности мы предлагаем использовать общую площадь депрессии хемилюминесценции, включая «быструю» и «медленную» части хемилюминограмм. Для 0,9 мкМ умифеновира, что соответствует максимальной концентрации в крови после перорального приема 200 мг, антиоксидантная способность эквивалента Тролокса составляла 1.65 мкМ. Следовательно, с термодинамической точки зрения Умифеновир является более эффективным антиоксидантом, чем Тролокс в 1,65 / 0,9 = 1,8 раза. Обратите внимание, что эффект умифеновира длится около часа (рис. 4), а эффект 0,9 мкМ Trolox длится около 12 минут. Таким образом, умифеновир действует в пять раз дольше, чем тролокс. Давайте сравним наши результаты с данными, полученными Васильевой и соавт. [30]. Используя хемилюминесцентную систему, состоящую из фосфолипидных липосом, FeSO 4 и кумарина C 525 в трис-буферном растворе, они определили антиоксидантный эффект умифеновира на перекисное окисление липидов как концентрацию 50% депрессии (C50%) амплитуды медленной вспышки.Это значение (5 мкМ) было на два порядка ниже, чем C50% α-токоферола (0,06 мкМ). Авторы связывают этот факт с плохой растворимостью умифеновира в липидах. Обратите внимание, что из-за всеобъемлющего механизма перекисного окисления липидов амплитуда медленной вспышки сложным образом коррелирует с антиоксидантной способностью и может использоваться только для полуколичественной оценки. Измерения амплитуды быстрой вспышки были бы более адекватными, но это было невозможно с хемилюминометром, используемым авторами.Основываясь на латентном времени медленной вспышки, авторы предположили, что антиоксидантный эффект умифеновира был вызван реакцией со свободными радикалами, а не с железом. Однако эти выводы требуют подтверждения компьютерным моделированием, что может стать целью следующего исследования. В этом исследовании мы использовали 2,2’-азобис (2-амидинопропан) гидрохлорид, хорошо известный водорастворимый радикальный инициатор, который успешно применяется в качестве инициатора перекисного окисления липидов [36]. Это вещество образует алифатический углерод-центрированный радикал, который в присутствии кислорода превращается в более реакционноспособный пероксильный радикал.Считается, что это хорошее модельное вещество для воздействия озона и УФ-В [37]. ABAP, как генератор радикалов, предлагает полезный инструмент для изучения окислительного стресса на биохимических и биологических моделях и антиоксидантных свойств веществ благодаря простому химическому механизму разложения и возможности работать при физиологической температуре. Однако такие исследования можно проводить только в водной фазе, а не в липидах.

    Подводя итог, умифеновир обладает мощным антиоксидантным действием по отношению к органическим радикалам в водной фазе за счет двухэтапного механизма.Это явление может внести серьезный вклад в компенсацию окислительного стресса, вызванного вирусным заболеванием, и в терапевтический эффект препарата. Особый интерес представляют дальнейшие исследования терапевтического эффекта умифеновира на моделях гриппа животных в сравнении с его антиоксидантным потенциалом.

    4. Материалы и методы

    Протокол усиленной хемилюминесценции позволил количественно определить антиоксидантную активность умифеновира. Хемилюминесцентная система состояла из источника свободных радикалов 2,2’-азобис (2-амидинопропан) дигидрохлорида (ABAP, Sigma, Сент-Луис, Миссури, США) и хемилюминесцентного зонда люминола (Sigma).Метод описан в [34]. Раствор люминола 1 мМ (Sigma, Сент-Луис, Миссури, США) и раствор ABAP 50 ммоль / л готовили растворением навески в фосфатном буферном растворе (100 мМ KH 2 PO 4 , pH 7,4). Сигма, Сент-Луис, Миссури, США). Общий объем кюветы – 1.000 мл. Смесь ABAP и люминола (конечные концентрации составляли 2,5 мМ и 2 мкМ соответственно) добавляли к буферному раствору (pH 7,4) при 37 ° C. Хемилюминесценцию регистрировали до достижения стационарного уровня, а затем добавляли аликвоту раствора антиоксиданта тролокса или умифеновира.Регистрация проводилась до тех пор, пока не был достигнут новый установившийся уровень (рис. 2а).

    В качестве контрольного соединения использовали Trolox (Sigma, Saint Louis, MO, USA), водорастворимый аналог витамина E. Исходный раствор 100 мМ Trolox готовили в фосфатном буферном растворе. Рабочие растворы готовили разбавлением исходного раствора буферным раствором. Умифеновир (Erregierre S.P.A., San Paolo d’Argon, BG, Италия, M = 477,4 г / моль) растворяли в ацетоне (99,9% PanReac, Castellar del Vallès, Барселона, Испания).

    Измерения проводились на 12-канальном хемилюминометре Lum-1200 (DISoft, Москва, Россия). Хемилюминометр обеспечивает обнаружение видимого света в диапазоне от 300 до 700 нм. В наших экспериментах светофильтры не использовались.

    Обработка сигналов проводилась с помощью программы PowerGraph 3.3 Professional (DISoft, Москва, Россия). Статистическую обработку данных проводили с помощью программы STATISTICA v.10.0 (StatSoft Inc., Tulsa, OK, USA).

    В отличие от методологий TRAP и TAR, при определении общего антиоксидантного потенциала умифеновира мы рассчитали общую площадь депрессии S как сумму S 1 и S 2 , где S 1 – площадь депрессии. для «быстрой» фазы улавливания свободных радикалов, S 2 – это область депрессии «медленной» фазы улавливания свободных радикалов (заштрихованная область на рисунке 4).Площадь депрессии рассчитывалась с помощью PowerGraph 3.3. Профессиональное программное обеспечение.

    Компьютерное моделирование проводилось с помощью специально разработанной компьютерной программы «Кинетический анализатор» (Д.Ю. Измайлов). Для набора заданных реакций и начальных концентраций реагентов были выбраны константы скорости, обеспечивающие максимальное соответствие экспериментальных и расчетных графиков. В качестве критерия максимального соответствия минимальная сумма квадратов остатков была рассчитана с помощью программного обеспечения OriginPro (OriginLab, Нортгемптон, Массачусетс, США).

    Грипп

    Существует три основных класса противовирусных препаратов, лицензированных для профилактики и лечения гриппа: препараты, направленные против протонного канала M2, препараты против нейраминидазы и препараты против РНК-полимеразы. Ингибитор активности слияния мембран ГК, который представляет четвертый класс, лицензирован в ряде стран.

    Ингибиторы М2

    Амантадин (Symmetrel ® ) , разработанный в 1960-х годах, и римантадин (Флумадин ® ) подавляют функцию белка M2 гриппа A в распаковке вируса, но не эффективны против вирусов гриппа B.Они не получили широкого распространения, а устойчивость циркулирующих в настоящее время вирусов A (h2N1) pdm09 и A (h4N2) лишила их возможности противостоять сезонному гриппу.

    Ингибиторы нейраминидазы

    Занамивир (Relenza ® ) и осельтамивир (Тамифлю ® ) были разработаны в 1990-х годах против нейраминидазы, которая участвует в высвобождении и распространении потомства вируса. Они эффективны против вирусов гриппа A и B и широко доступны.В то время как занамивир вводят ингаляционно, осельтамивир вводят перорально, как пролекарство, и оказалось, что он получил более широкое распространение и был основным выбором для создания запасов противовирусных препаратов в качестве компонента обеспечения готовности к пандемии. Однако резистентность к осельтамивиру возникает чаще, чем к занамивиру. Недавно были лицензированы два других ингибитора нейраминидазы: ланинамивир (Инавир ® ) аналог занамивира длительного действия, вводимый путем ингаляции в виде единой терапевтической дозы, был лицензирован в Японии; перамивир, , который содержит активные части как занамивира, так и осельтамивира, был лицензирован в Японии (Rapiacta ® ) и Корее ( PeramiFlu ® ) для внутривенного введения.

    Ингибиторы полимеразы

    Балоксавир Марбоксил (Xofluza TM ) пероральное пролекарство, нацеленное на PA, cap-зависимую эндонуклеазу, субъединицу РНК-полимеразы, было одобрено в Японии и США в 2018 году для лечения неосложненных инфекций гриппа A и B.

    Фавипиравир (T705) нацелен на РНК-полимеразу и обладает широким спектром активности против различных семейств РНК-вирусов и эффективен против всех трех типов гриппа: A, B и C.Он был одобрен в Японии для использования против новых или вновь появляющихся вирусов гриппа.

    Пимодивир (VX-787) , который ингибирует кэп-связывающую субъединицу РНК-полимеразы вирусов гриппа A, но не гриппа B, еще не одобрен для клинического использования.

    Ингибиторы НА

    Арбидол нацелен на слияние с мембраной HA in vitro . Он проявляет широкий спектр противовирусной активности in vitro , в том числе против гриппа A и B, и было показано, что он обладает иммуномодулирующей активностью in vivo ; поэтому основа его клинической эффективности против гриппа еще не установлена.Изначально арбидол был лицензирован для применения против гриппа в России, а с тех пор был лицензирован в Китае и ряде других стран.

    Ряд других противовирусных препаратов, направленных как против вирусов, так и против хозяев, находится в разработке рядом компаний, в том числе широко реактивные моноклональные антитела, как показано на «ландшафте» разработки противовирусных препаратов гриппа в США (рис. 1).

    Рис. 1. Противовирусный ландшафт против гриппа 2020 , предоставлено Управлением передовых биомедицинских исследований и разработок (BARDA), Офис HHS помощника секретаря по готовности и реагированию, США

    Арбидол работает в области профилактики и лечения гриппа, включая h2N1 и H5N1

    Опубликованные исследования показать Арбидол работает.Вот несколько выдержек со ссылками на их источник:

    ‘Арбидол не хуже как адамантиновые препараты, ингибиторы нейраминидазы, рибавирин и рибамидил в своем ингибирующем действии по вирусу гриппа A и B. ‘ Институт биоорганической химии

    ‘Наши результаты показывают что арбидол обладает способностью вызывать защитную противовирусную активность широкого спектра действия против ряд патогенных респираторных вирусов человека ». Институт медицинской вирусологии

    ‘Коммерческие препараты римантадин, амантадин, рибавирин и арбидол эффективны при подавлении репродукции in vitro. высокопатогенных вирусов птичьего гриппа A / H5N1.’ Эффективность противовирусных препаратов in vitro

    ‘Молекулярно-биологический Действие, которое отличает Арбидол от других препаратов, заключается в его способности подавлять размножение вирусов. на ранних стадиях; препарат действует, изменяя регуляцию клеточного метаболизма ». Химическая- Фармацевтический научно-исследовательский институт

    ‘ARB (арбидол) ингибировал инфекционный JFH-1 продуцирование вируса в 1000 раз при введении в клетки за 48 часов до заражения ‘ Кафедры лабораторной медицины, микробиологии и патобиологии, Вашингтонский университет, Сиэтл, США.

    No related posts.

    Добавить комментарий

    Ваш адрес email не будет опубликован. Обязательные поля помечены *

    © МУНИЦИПАЛЬНОЕ АВТОНОМНОЕ ОБЩЕОБРАЗОВАТЕЛЬНОЕ УЧРЕЖДЕНИЕ СРЕДНЯЯ ОБЩЕОБРАЗОВАТЕЛЬНАЯ ШКОЛА №3