МУНИЦИПАЛЬНОЕ АВТОНОМНОЕ ОБЩЕОБРАЗОВАТЕЛЬНОЕ УЧРЕЖДЕНИЕ СРЕДНЯЯ ОБЩЕОБРАЗОВАТЕЛЬНАЯ ШКОЛА №3

У пациентов с острой бактериальной простатит ,
a посев мочи – единственная лаборатория требуется оценка нижних мочевыводящих путей.
Было высказано предположение, что энергичный массаж простаты, необходимый для ЭПС может усугубить клиническую ситуацию, хотя таких опасений никогда не было. были обоснованы в литературе. Образец мочи в середине потока покажет значительный лейкоцитоз и бактериурия при микроскопии и культивировании обычно раскрывает типичные уропатогены.Посев крови может показать один и тот же организм.

Хотя классический 1968 Meares & Stamey тест на сбор мочи из четырех стаканов (методика) остается золотой стандартная диагностическая оценка для различения уретры, мочевого пузыря и простаты инфекций больных простатитом, многочисленные опросы подтвердили, что врачи более или менее отказались от этого трудоемкого и дорогостоящего строгая оценка .

Техника и интерпретация Мерс-Стейми тест на локализацию нижних мочевых путей с четырьмя стаканами для хронических простатит / синдром хронической тазовой боли.

1. Образец опорожненного мочевого пузыря-1 (VB1) включает первые 10 мл мочи и представляет образец уретры.
2. Образец из опорожненного мочевого пузыря-2 (VB2) аналогичен среднему потоку мочи. сбор и представляет собой мочевой пузырь.
3. EPS (выраженная простатическая секрет) следует собирать непосредственно в стерильный контейнер во время простатита массаж .
4. Образец опорожненного мочевого пузыря-3 (VB3) , выделены первые 10 мл мочи после массажа простаты , включая любые ЭПС попадает в простатическую уретру. Центрифугируют три образца мочи. в течение 5 минут и осадок исследовали под большим увеличением на лейкоциты (включая скопления лейкоцитов), макрофаги, овальные жировые тела, эритроциты, бактерии и гифы грибов. Влажное нанесение капли ЭПС (экспрессия предстательной железы). раздел) можно исследовать под покровным стеклом аналогичным образом.Фактически, когортное исследование хронического простатита NIH показало, что определение лейкоцитов не добавили существенной клинической информации к оценке пациента с ХП / СХТБ. Все четыре образца отправлены в лабораторию. для количественного культивирования.

Категория II, хронические бактериальные простатит , диагностируется при 10-кратном увеличении количества бактерий в образце EPS или VB3 по сравнению с VB1 и VB2. У пациента, который острый цистит, такая локализация невозможна; и в этом случае пациенты можно лечить коротким курсом (от 1 до 3 дней) терапии антибиотиками такой как нитрофурантоин, который плохо проникает в простату, но устраняет бактериурия мочевого пузыря.Последующая локализация бактерий в пост-простатический массаж мочой или ЭПС тогда диагностируют категорию II простатит.

СХТБ категории IIIA (хронический небактериальный простатит) диагностируется, когда не культивируются уропатогенные бактерии, но чрезмерный лейкоцитоз (обычно определяется как более 5-10 лейкоцитов на одну высокую мощность) поле [HPF]) отмечается в образцах, специфичных для простаты (EPS или VB3, или и то, и другое).

СХТБ категории IIIB (простатодиния) есть диагностирован, когда не культивируются уропатогенные бактерии и нет значимых лейкоцитоз, отмеченный при микроскопическом исследовании ЭПС или осадка VB3.

Таблица – Предлагаемое обследование мужчины с CPPS

Обязательно

• История
• Физикальное обследование, включая пальцевое ректальное исследование
• Общий анализ мочи и посев мочи

рекомендуется

• Тест локализации нижних мочевыводящих путей
• Инвентаризация или индекс симптомов (NIH-CPSI)
• Скорость потока
• Определение остаточной мочи
• Цитология мочи

Дополнительно

• Анализ спермы и посев
• Мазок из уретры для посева
• Исследования давления и расхода
• Видеоуродинамика (включая проточную электромиографию)
• Цистоскопия
• Трансректальное УЗИ
• Визуализация органов малого таза (УЗИ, КТ, МРТ)
• Антиген простатоспецифический

Лечение неосложненных ИМП у мужчин:
Даже если ИМП, казалось бы, неосложненная, лечить мужчин нельзя. с коротким курсом терапии из-за высокой вероятности ранних рецидивов.
Фторхинолон (как: Ципро 500 мг 2 раза в день) или с TMP-SMX (Bactrim-DS или Septra-DS1 tab bid) на 7-14 дней,
при условии, что организмы восприимчивы.

Лечение острого бактериального простатита:
Фторхинолон (как: Ципро 500 мг 2 раза в день) в течение 2 недель или с TMP-SMX (Ставка вкладки Bactrim-DS или Septra-DS1) не менее 4 недели ,
при условии, что микроорганизмы чувствительны.
Рецидив является обычным явлением и обычно означает устойчивый очаг в предстательной железе. это не искоренено.
В простате могут находиться камни, которые могут блокировать дренаж частей предстательной железе или действовать как инородное тело, в котором хроническая инфекция могут проживать. Увеличенная (и воспаленная) предстательная железа может вызвать выход из мочевого пузыря. непроходимость, приводящая к скоплению застойной мочи в мочевом пузыре, сложно стерилизовать.

Лечение хронического бактериального простатита:
Фторхинолон (как: Ципро 500 мг 2 раза в день) в течение 2 недель или с TMP-SMX (Ставка вкладки Bactrim-DS или Septra-DS1) минимум от 4 до 6 недель ,
при условии, что организмы восприимчивы.
Длительное лечение любым из этих препаратов имеет вероятность более 60%. искоренения инфекции. Большинство терапевтических неудач происходит из-за анатомических факторы или инфицирование Enterococcus faecalis или P. aeruginosa; эти двое микроорганизмы особенно часто вызывают рецидив после лечения в настоящее время рекомендуются противомикробные препараты. Рецидивы следует лечить от 12 недель. Если эта терапия не дает результатов, длительное подавление антимикробных препаратов или повторное Часто необходимы лечебные курсы при каждом рецидиве.

Лечебная терапия простатита

1. Противомикробные агенты
   Фторхинолон в составе антибиотиков TMP-SMX в течение 4-6 недель
   Фторхинолоны продемонстрировали улучшенные терапевтические результаты, особенно при ХП, вызванном E. coli и другими представителями Enterobacteriaceae, но не обязательно при простатите, вызванном P. aeruginosa или энтерококками.
   Похоже, что более продолжительная терапия (90 дней) обеспечивает наилучшие клинические полученные результаты.Триметоприм-сульфаметоксазол менее эффективен как при бактериальном искоренение и рентабельность по сравнению с более новыми фторхинолоны.
   За исключением хорошо изученных фторхинолонов, большинство антибиотиков (включая миноциклин, цефалексин и карбенициллин) не демонстрируют значительных клиническая эффективность в клинических исследованиях, в которых пациенты наблюдались в течение достаточное время. Заметным исключением были макролиды, эритромицины, азитромицин и кларитромицин, особенно когда C.trachomatis.
2. Терапия альфа-адреноблокаторами
   Уроки, извлеченные из этих хорошо спланированных и проведенных исследований Были ли это? -адреноблокаторы значительно улучшили симптомы? только после более чем 6 недель терапии у менее интенсивно леченных пациентов с недавним появлением умеренных и тяжелых симптомов.
3. Противовоспалительные средства и иммуномодуляторы
   Нестероидные противовоспалительные препараты, кортикостероиды и иммунодепрессанты препараты теоретически должны улучшать воспалительные параметры в пределах простаты и, возможно, приведет к уменьшению симптомов.
4. Гормональная терапия (Проскар / Финастерид) – антиандрогены 5 Ингибиторы альфа-редуктазы
   Шесть месяцев приема финастерида привели к количественному, но не статистическому значительное уменьшение симптомов по сравнению с отмеченным уменьшением симптомов в группе плацебо.
   Финастерид нельзя рекомендовать в качестве монотерапии, за исключением, возможно, мужчин. с ассоциированной аденомой простаты.
   Теоретически антиандрогены (включая ингибиторы 5α-редуктазы) могут в регрессии ткани предстательной железы (считается, что воспаление начинаются на уровне эпителия протоков), улучшаются параметры мочеиспускания (особенно у пожилых пациентов с аденомой простаты и простатитом) и снижается интрапростатический протоковый рефлюкс
5. Массаж простаты
   Некоторым пациентам действительно улучшается массаж простаты, но Североамериканские «эксперты по простатиту» не смогли прийти к единому мнению о потенциальной общей выгоде или даже о механизме ее достижения выгода, если это произойдет.

* Мультимодальная терапия с использованием нескольких одновременных стратегии лечения могут предложить наилучшие результаты в настоящее время ( Шоскес и др., 2003). Однако ряд хорошо контролируемых проспективных исследований не продемонстрировали повышенной эффективности за счет комбинации β-адреноблокаторов и антибиотики (Alexander et al, 2004) или блокаторы альфа-адренорецепторов и противовоспалительные средства (Batstone et al, 2005). Объяснение этому сложность лечения ХП может заключаться в том, что пациенты становятся периферическими и централизованная сенсибилизация и лечение, направленное на инициаторов процесса могут не работать, когда состояние становится хроническим (Yang et al, 2003 ).

другие:

• Balloon Dilatation:
  Этот лечебный эффект никогда не был подтвержден, а баллонная дилатация в клинической практике обычно не применяется.
• Микроволновая гипертермия и термотерапия:
  Тепловая терапия представляется многообещающим терапевтическим подходом, но до тех пор, пока проводятся более крупномасштабные исследования, их следует ограничивать пациентами с рефрактерные или терминальные симптомы.
• Хирургия
  Развивающийся абсцесс простаты , лучше всего обнаруживаемый при трансректальном ультразвуковое исследование или компьютерная томография (КТ) (Rovik and Doehlin, 1989), у пациентов, которые не могут быстро отреагировать на антибиотики, оптимально дренируется трансуретральным путем.
  Хирургия не играет важной роли в лечении большинства синдромов ХП если во время обследования пациента не обнаружено конкретных показаний .
  Радикальная трансуретральная резекция простаты не рекомендуется СХТБ категории III, но неофициально показана открытая радикальная простатэктомия для некоторых пациентов с симптомами небактериального простатита или простатодиния или и то, и другое.Нет окончательной клинической серии или длительного наблюдения когда-либо проводилась, и этот тип хирургии не следует поощрять или рекомендуется в настоящее время.
  

Медикаментозная терапия хронического простатита и синдрома хронической тазовой боли

2008 г.

* Как правило, терапии требуется только симптоматическая ИМП.

* Бессимптомная бактериурия

Бактериурия выявляется при отсутствии симптомов со стороны мочевыводящих путей. тракта не требует противомикробной терапии, за исключением особых случаев.К ним относятся во время беременности, перед операцией или инструментарием мочевыводящие пути и после трансплантации почки. Лечение бессимптомного бактериурия у пациентов с ослабленным иммунитетом из-за трансплантации кроме почек (т. е. другого твердого органа или костного мозга) или из-за нейтропения недостаточно изучена и в настоящее время не рекомендуется в качестве общепринятая практика.

Большое рандомизированное исследование у женщин с диабетом и бессимптомной бактериурией. лечения противомикробными препаратами по сравнению с отсутствием противомикробных препаратов не обнаружено разницы в время до появления первых симптомов ИМП между группами.Авторы делают вывод что нет никакой пользы от скрининга бессимптомной бактериурии или лечения это у женщин с сахарным диабетом.

* ИМП, ассоциированная с катетером

ИМП являются наиболее распространенными внутрибольничными инфекциями, составляющими 40% всех такие инфекции. Большинство внутрибольничных ИМП связаны с катетеризацией мочевого пузыря. Катетер-ассоциированные ИМП связаны с повышенной смертностью и затратами. Выявлены множественные факторы риска катетер-ассоциированных ИМП, в том числе длительность катетеризации, отсутствие системной антибактериальной терапии, женский пол, возраст старше 50 лет и азотемия.57 Факторы риска бактериемии связанные с катетер-ассоциированными ИМП, не установлены.

Можно следовать нескольким рекомендациям, чтобы свести к минимуму возникновение катетера. инфекция [см. Таблицу 5]. Самое главное, катетер должен быть вставлен с строгая асептическая техника обученным персоналом. Кроме того, закрытая система должна использоваться всегда. Даже при оптимальном осторожность, однако использование катетера в течение 1 месяца или дольше в конечном итоге приведет к при инфекции мочевого пузыря.Видимо, дополнительной защиты мало. антибиотиками для полосканий мочевого пузыря, мазей с антибиотиками в уретральный проход и закапывание дезинфицирующих средств, таких как в виде перекиси водорода в мешок для сбора мочи . Хотя системные антибиотики бесполезны, когда должна быть закрытая система в течение длительного периода антибиотики могут быть защитными, когда катетер на месте всего несколько дней .Однако это преимущество должно быть сбалансированным с риском выбора устойчивой флоры при катетеризации должен быть продлен неожиданно. У пациентов, которым требуется катетеризация уретры в течение 2-10 дней используйте мочевой катетер с покрытием из сплава серебра или пропитанный нитрофуразоном катетер может обеспечить некоторую защиту против инфекций грамотрицательных организмов.

Лечение катетер-ассоциированных ИМП зависит от клинические обстоятельства.
Пациенты с симптомами (например, пациенты с лихорадкой, ознобом, одышкой, и гипотония) требуют немедленной терапии антибиотиками [см. Осложненные ИМП, над]. Кроме того, может быть полезно удалить и заменить мочевой катетер. если он был на месте неделю или дольше. Это устраняет трудно уничтожаемые организмы в биопленке на катетере. В бессимптомный пациент, терапию следует отложить до тех пор, пока катетер не сможет удалить. Пациенты со стойкой бессимптомной бактериурией и пациенты с симптомы нижних мочевыводящих путей, у которых был удален катетер, хорошо реагируют к краткосрочному курсу терапии.61

Пациенты с длительно установленными постоянными катетерами редко становятся симптоматичными, если только катетер заблокирован или разрушается через слизистую мочевого пузыря. У пациентов у которых действительно проявляются симптомы, следует назначить соответствующие антибиотики, и катетер следует заменить. Терапия бессимптомной катетеризации пациентов приводит к отбору антибиотикоустойчивых бактерии.56,57,60 Таким образом, хотя при длительной катетеризации мочевого пузыря значительный риск хронического пиелонефрита (10% и более, если катетер находится на месте более 90 дней), этого события невозможно избежать, иначе чем при удалении катетера.62

Появление Candida в моче – все более частое осложнение. постоянной катетеризации, особенно для пациентов в интенсивной отделение медицинской помощи, принимающие противомикробные препараты широкого спектра действия или при диабете mellitus. 63C. albicans по-прежнему является наиболее распространенным изолятом, хотя C. glabrata и другие виды, не относящиеся к albicans, также часто изолированы. Клиническая Представление может варьироваться от бессимптомного лабораторного обнаружения до сепсиса. У бессимптомных пациентов удаление уретрального катетера приводит к разрешению кандидурии в одной трети случаев.Для пациентов с симптоматическим кандидурия (лихорадка с симптомами цистита или без них), флуконазол внутрь, 200 мг / день в течение 7-14 дней, как было показано, очень эффективен. Этот режим был эффективен даже для видов Candida, не относящихся к альбикансам, которые уменьшили восприимчивость к флуконазолу, возможно, из-за высоких концентраций достигается с мочой. Для более тяжелых пациентов возможность необходимо оценить пиелонефрит и кандидемию, а также системные противогрибковые терапия флуконазолом, 6 мг / кг / сут, или амфотерицином, 0.6 мг / кг или более в день, должен быть учрежден.

2008 г.

Эндоскопия (цистоскопия)

Клинический опыт (а не контролируемые клинические исследования) предполагает, что Эндоскопия нижних мочевых путей (т. е. цистоскопия) не указывается в большинство мужчин с ХП / СХТБ . Однако показана цистоскопия. у пациентов, у которых в анамнезе (например, гематурия ), оценка нижних мочевыводящих путей (е.g., анализ мочи на VB1) или дополнительные исследования (например, уродинамика) указывают на возможность диагностики, отличной от CP / CPPS . У этих пациентов иногда злокачественные новообразования нижних мочевых путей, камни, стриктуры уретры, аномалии шейки мочевого пузыря и т. д., которые можно исправить хирургическим путем обнаружены. Цистоскопия, вероятно, может быть оправдана у мужчин огнеупор по стандарту терапия .

Трансректальное ультразвуковое исследование простаты

Трансректальное ультразвуковое исследование стало одним из лучших рентгенологических методов. для оценки заболевания простаты и стал особенно полезным клиническим инструмент для оценки объема простаты и ультразвукового контроля биопсии иглы.Диагностическая ценность ультразвукового исследования в дифференциации доброкачественных от злокачественной болезни простаты является спорным, и дальнейшая дифференциация о различных доброкачественных заболеваниях простаты тем более.

Трансректальное ультразвуковое исследование может быть полезным при диагностике медиального отдела предстательной железы. кисты у пациентов с простатитоподобными симптомами, диагностика и дренирование абсцессы предстательной железы или диагностика и дренирование закупоренных семенных пузырьков. Это требуется не во всех случаях острого бактериального простатита, а скорее. только у тех пациентов, у которых отсутствует соответствующая антимикробная терапия (Horcajada et al, 2003).

Биопсия простаты

Иногда из-за повышенного уровня ПСА или аномальное пальцевое ректальное исследование, показана биопсия простаты . Некоторые врачи рассмотрит возможность начать лечение пациентов с повышенным уровнем ПСА. уровни и история простатита или симптомы СХТБ на антибиотиках, но такая практика действительно рациональна только у пациентов с острым или хроническим бактериальным заболеванием. простатит, состояния, которые неизменно приводят к повышению уровня ПСА. Диагноз CP / CPPS следует использовать только как причина против биопсии простаты, если врач ищет оправдание не на биопсию .

От отчаяния урологи иногда прибегают к биопсии простаты в попытаться продемонстрировать гистологические доказательства воспаления простаты или культивировать организм, который нельзя культивировать с использованием стандарта подход. Значение и интерпретация простаты биопсия при ХП, выполняемая по причинам, отличным от скрининга рака простаты непонятно .

Гематоспермия

Гематоспермия – это наличие крови в семенной жидкости. Почти всегда возникает в результате неспецифического воспаления. простаты и / или семенных пузырьков и разрешается спонтанно, обычно в течение нескольких недель. Это часто происходит после продолжительного периода полового акта. воздержание , и мы наблюдали это несколько раз у мужчин, чьи жены находятся на последних неделях беременности. Пациенты с гематоспермией, которые сохраняется более нескольких недель, необходимо пройти дальнейшее урологическое обследование, потому что, редко, будет выявлена ​​основная этиология .Генитальный и ректальное обследование необходимо сделать, чтобы исключить наличие туберкулеза, простатоспецифический антиген (ПСА) и ректальное обследование, чтобы исключить карцинома простаты и цитология мочи, чтобы исключить возможность переходно-клеточного рака простаты. Следует подчеркнуть, однако гематоспермия почти всегда проходит. спонтанно и редко связано с какими-либо значительными урологическими заболеваниями. Патология .

(REF: Wein: Campbell-Walsh Urology, 9-е изд.2007)

Механизм защиты хозяина, включающий секрецию бикарбоната, опосредованную CFTR, при бактериальном простатите

Абстрактные

Фон

Простатит связан с характерным повышением pH жидкости простаты; однако основной механизм и его физиологическое значение не выяснены.

Методология / основные выводы

В этом исследовании использовали первичную культуру эпителиальных клеток простаты крыс и модель простатита крыс.Здесь мы сообщили об участии CFTR, цАМФ-активированного анионного канала, проводящего как Cl ^– , так и HCO ₃ ^– , в опосредовании секреции HCO ₃ ^– простаты и его возможной роли в уничтожении бактерий. При провокации Escherichia coli ( E coli ) -LPS экспрессия CFTR и карбоангидразы II (CA II) вместе с несколькими провоспалительными цитокинами повышалась в первичной культуре эпителиальных клеток простаты крысы.Ингибирование функции CFTR in vitro или in vivo приводило к снижению уничтожения бактерий эпителиальными клетками предстательной железы или предстательной железой. Было обнаружено, что высокое содержание HCO ₃ ^– (> 50 мМ), а не щелочной pH, является причиной уничтожения бактерий. Прямое действие HCO ₃ ^– на уничтожение бактерий было подтверждено его способностью увеличивать продукцию цАМФ и подавлять бактериальные факторы инициации в E coli . Актуальность опосредованной CFTR секреции HCO ₃ ^– у людей была продемонстрирована усиленной экспрессией CFTR и CAII в тканях простатита человека.

Выводы / Значение

CFTR и его опосредованная HCO. ₃ ^– секреция может быть усилена при простатите как механизм защиты хозяина.

Образец цитирования: Xie C, Tang X, Xu W, Diao R, Cai Z, Chan HC (2010) Механизм защиты хозяина, включающий секрецию бикарбоната, опосредованную CFTR, при бактериальном простатите. PLoS ONE 5 (12): e15255. https://doi.org/10.1371/journal.pone.0015255

Редактор: Вэнь-Лян Чжоу, Университет Сунь Ят-Сен, Китай

Поступила: 2 сентября 2010 г .; Одобрена: 2 ноября 2010 г .; Опубликовано: 7 декабря 2010 г.

Авторские права: © 2010 Xie et al.Это статья в открытом доступе, распространяемая в соответствии с условиями лицензии Creative Commons Attribution License, которая разрешает неограниченное использование, распространение и воспроизведение на любом носителе при условии указания автора и источника.

Финансирование: Эта работа была поддержана Программой целевых инвестиций и Институтом медицинских наук Ли Ка Шинга Китайского университета Гонконга. Финансирующие организации не играли никакой роли в дизайне исследования, сборе и анализе данных, принятии решения о публикации или подготовке рукописи.

Конкурирующие интересы: Авторы заявили, что никаких конкурирующих интересов не существует.

Введение

Простатит – одно из наиболее частых урологических заболеваний у мужчин, и до половины мужского населения может когда-либо страдать от простатита [1]. Простатит обычно проявляется раздражающими или обструктивными симптомами мочеиспускания, мочеполовой, тазовой или ректальной болью и иногда связан с сексуальной дисфункцией и бесплодием [2], [3], [4], [5], [6].Согласно недавнему консенсусному определению Национального института здоровья (NIH), простатит можно разделить на 4 категории. Первые 2 категории включают простатит с бактериальной инфекцией, острый бактериальный простатит (Категория I) и хронический бактериальный простатит (Категория II). Хронический небактериальный простатит / синдром хронической тазовой боли относится к категории III, а бессимптомный воспалительный простатит – к категории IV. Клинически только 5–10% случаев простатита диагностируются с бактериальной инфекцией (категории I и II), из которых 50–80% вызваны E coli [7], в то время как небактериальный простатит составляет более 90–95. % клинических случаев [1], [8].Независимо от типа простатита, с бактериальной инфекцией или без, общей чертой в большинстве случаев является воспаление предстательной железы с присутствием лейкоцитов или повышенным уровнем цитокинов, особенно IL-1β и TNF-α, в выраженных секреция простаты (EPS) или моча после сообщения простаты [9], [10], [11].

Другой отличительной чертой простатита является щелочной сдвиг pH, постоянно обнаруживаемый в выраженном секрете простаты (EPS), который, по-видимому, сопровождает воспалительную реакцию простаты с бактериальной инфекцией или без нее [2], [12], [13], [14], [15], [16], [17].Значение pH жидкости предстательной железы, по-видимому, отражает интенсивность реакции воспаления, и в целом, чем более серьезное воспаление отражается большим количеством лейкоцитов, тем более щелочным является значение pH [16], [18]. Также сообщалось, что pH EPS при бактериальном простатите значительно выше, чем при небактериальном простатите [19]. Хотя заметное повышение pH EPS считается диагностическим [14], [16], [17], это также считается одной из причин плохих результатов антибактериальной терапии [15].Нормальная жидкость предстательной железы человека имеет значение pH от 6,2 до 6,6, что значительно ниже, чем значение pH в плазме 7,4 [14], [17]. Этот градиент pH позволяет электрически нейтральным молекулам, например лекарства и антибиотики, проникая в простату, ионизируются и задерживаются или концентрируются в жидкости простаты [2], [20], [21]. Однако при воспалении жидкость простаты может стать заметно щелочной (> pH 8,0), что может повлиять на концентрацию лекарств или антибиотиков в простате [14].Изменение pH при простатите может также значительно изменить терапевтическую эффективность антибиотиков, кроме их пониженной концентрации в простате [2].

Несмотря на диагностическое и терапевтическое значение pH в EPS, молекулярный механизм, управляющий регуляцией pH жидкости простаты в нормальном и воспалительном состоянии, остается неизвестным. Железистый эпителий простаты, как известно, секретирует лимонную кислоту, которая, как считается, поддерживает осмотическое давление и pH жидкости простаты.Было высказано предположение, что увеличение pH, наблюдаемое при простатите, связано с нарушением секреторной функции простаты (то есть снижением уровня лимонной кислоты) при воспалении [17]. Однако неясно, является ли увеличение pH, наблюдаемое при простатите, просто уменьшением относительного уровня лимонной кислоты или увеличением секреции щелочных веществ или ионов, таких как бикарбонат. Что еще более важно, вопрос о том, имеет ли характерное повышение pH жидкости предстательной железы при простатите какое-либо физиологическое значение, не рассматривался.

Регулятор трансмембранной проводимости при муковисцидозе (CFTR) представляет собой активируемый цАМФ ионный канал, который обнаруживается в широком спектре эпителиальных тканей, включая легкие, печень, поджелудочную железу, кишечник, репродуктивные тракты и потовые железы [22], [23], [24], [25]. Известно, что мутации в гене CFTR вызывают кистозный фиброз (CF), смертельное генетическое заболевание, обнаруживаемое среди европеоидов, которое характеризуется дефектной секрецией Cl ^– и HCO ₃ ^– [26]. CFTR может проводить HCO ₃ ^– непосредственно как анионный канал с измеренной проницаемостью HCO ₃ ^– [27] или косвенно как канал Cl ^– , работающий параллельно с Cl ^– / HCO ₃ ^– теплообменников для обеспечения пути рециркуляции [28], [29].Фактически, наши предыдущие исследования продемонстрировали участие CFTR в опосредовании секреции HCO ₃ ^– в матке и яйцеводах, которые имеют жизненно важное значение для оплодотворяющей способности сперматозоидов и развития эмбриона [30], [31], [32]. Поскольку известно, что CFTR экспрессируется в простате человека [33], [34], [35], он также может играть роль в секреции HCO в простате ₃ ^–, хотя физиологическая роль CFTR в простата не выяснена.

Сообщалось, что в условиях воспаления или при бактериальной инфекции повышенное высвобождение воспалительных цитокинов, таких как IL-1β и TNF-α, оказывает сильное влияние на повышающую регуляцию CFTR в эпителиальных клетках [36], [37] ].Поскольку повышенные уровни воспалительных цитокинов, включая IL-1β и TNF-α, также обнаруживаются при простатите с бактериальной инфекцией или без нее, они также могут активировать регуляцию CFTR в простате, тем самым увеличивая секрецию HCO ₃ ^– и приводя к характерное повышение pH при простатите. Интересно, что недавние исследования показали возможное участие дефектной CFTR-опосредованной секреции HCO ₃ ^– в патогенезе CF [30], [38], [39]. По-видимому, существует связь между дефектной секрецией HCO ₃ ^– и более высоким риском инфицирования при МВ.Большинство пациентов с МВ, около 95%, умирают от легочной инфекции с обнаруженным закислением дыхательных путей [40]. Сообщалось, что кислотность дыхательных путей при МВ может быть связана с дефектным переносом ионов HCO ₃ ^– [41], хотя точная роль HCO ₃ ^– в патогенезе МВ до сих пор полностью не изучена. Следует отметить, что HCO ₃ ^– участвует в уничтожении бактерий, однако, является ли его действие прямым или косвенным, остается неясным [42], [43], [44], [45].Недавно сообщалось, что в присутствии карбоната чувствительность бактерий к антимикробным пептидам может увеличиваться, поскольку карбонат может вызывать глобальные изменения в структуре и экспрессии генов бактерий [46]. Таким образом, повышенный pH, наблюдаемый при простатите, будет иметь физиологическое значение для защиты хозяина от бактериальной инфекции, а повышение pH должно быть связано с усилением секреции HCO в простате ₃ ^–.

В совокупности мы предположили, что CFTR может быть вовлечен в секрецию HCO в простате ₃ ^–, его активация воспалительными цитокинами и, таким образом, усиленная секреция HCO ₃ ^– может быть ответственной за характерное увеличение pH, наблюдаемое при простатите. .Мы также предположили, что усиленная секреция HCO ₃ ^–, опосредованная CFTR, при простатите может быть важным механизмом защиты простаты хозяином от бактериальной инфекции. Мы предприняли настоящее исследование, чтобы проверить эти гипотезы, используя первичную культуру эпителиальных клеток простаты крыс и модель простатита крыс. Мы продемонстрировали экспрессию CFTR в эпителии простаты крыс и его участие в секреции бикарбоната предстательной железы. Результаты показывают, что CFTR, а также карбоангидраза II (CAII), которая является ключевым ферментом, ответственным за превращение HCO ₃ ^– из CO ₂ , могут активироваться во время воспаления простаты на животной модели и ткани простаты человека с воспалением.Роль CFTR в защите предстательной железы хозяина была продемонстрирована нарушением активности уничтожения бактерий при вмешательстве в функцию CFTR in vitro и in vivo . Также были исследованы прямое влияние HCO ₃ ^– на уничтожение бактерий и возможные основные механизмы. Настоящие результаты предоставили молекулярный механизм, лежащий в основе давно наблюдаемого повышения pH при простатите, и продемонстрировали ранее неожиданную роль CFTR в защите предстательной железы хозяина.

Результаты

Экспрессия CFTR в эпителиальных клетках вентральной простаты крысы

Чтобы исследовать роль CFTR в простатите, мы сначала исследовали его экспрессию в простате крыс, поскольку экспрессия CFTR в простате не была продемонстрирована ни у одного вида, кроме человека. Иммуногистохимия показала, что иммунореактивность CFTR была обнаружена на апикальной поверхности эпителиальных клеток вентральной простаты крысы (рис. 1А). Мы также подтвердили экспрессию CFTR в первичной культуре эпителиальных клеток простаты крысы.Результаты ОТ-ПЦР выявили продукт ПЦР с ожидаемым размером крысиного CFTR (481 п.н.) (рис. 1В). Вестерн-блоттинг также показал полосу 160 кД, как и ожидалось для CFTR (рис. 1С). Иммунофлуоресцентное окрашивание также локализовало белок CFTR на плазматической мембране культуральных эпителиальных клеток (рис. 1D, справа), который также был окрашен положительно на цитокератин 5 и 8, маркер эпителиальных клеток (рис. 1D, в середине).

Рисунок 1. Экспрессия CFTR в эпителиальных клетках простаты крысы.

(A) Иммуногистохимическое окрашивание CFTR в простате крыс SD с отрицательным контролем в отсутствие первичных антител.CFTR экспрессировался на апикальной поверхности вентрального эпителия простаты крысы. Масштабная линейка: 100 мкм. (B) Транскрипт CFTR был обнаружен с помощью ОТ-ПЦР в культивируемых эпителиальных клетках простаты крысы с предсказанными продуктами амплификации при 481 п.н. (C) Белок CFTR был обнаружен в эпителиальных клетках простаты крысы с помощью вестерн-блоттинга, который распознает полосу с молекулярной массой 160 кДа. (D) Фазово-контрастное изображение (слева) и иммунофлуоресцентное окрашивание цитокератина 5 и 8 (средний, зеленый) или CFTR (справа, зеленый) в эпителиальных клетках простаты крысы.Ядра клеток контрастировали с DAPI (синий). Масштабная линейка: 100 мкм.

https://doi.org/10.1371/journal.pone.0015255.g001

Участие CFTR в опосредовании секреции бикарбоната предстательной железы

Чтобы исследовать роль CFTR в секреции HCO ₃ ^– простаты, мы измерили внутриклеточный pH (pH _i ) в установившейся культуре эпителиальных клеток простаты. Подщелачивание клеток было вызвано удалением HCO ₃ ^– / CO ₂ из перфузата (рис. 2A), и была измерена скорость восстановления pH _i , которая отражает экструзию HCO ₃ ^– .Когда внеклеточный Cl ^– был удален из апикального перфузионного раствора, скорость восстановления pHi была значительно снижена по сравнению с таковой в растворе, содержащем Cl ^– (Рисунок 2B), что указывает на работу Cl ^– – зависимый HCO ₃ ^– процесс экструзии, вероятно, с участием анионообменника. Однако скорость восстановления pH _– в отсутствие Cl ^– или инактивации обменника Cl ^– / HCO ₃ ^– может быть увеличена с помощью активатора аденилатциклазы, форсколина, что указывает на cAMP-зависимый путь экструзии HCO ₃ ^– (рисунок 2C).Вызванное форсколином восстановление pH _– может быть заблокировано NPPB (100 мкМ) (рис. 2D), блокатором, ингибирующим CFTR, что позволяет предположить, что CFTR может быть ответственным за секрецию HCO ₃ ^– в культивируемой простате. эпителиальные клетки. Эти результаты указывают на прямую роль CFTR в опосредовании секреции HCO ₃ ^– простаты и косвенную роль, возможно, работая параллельно с обменником Cl ^– / HCO ₃ ^– для HCO ₃ ^– экструзия.

Рисунок 2. Участие CFTR в опосредовании секреции бикарбоната, стимулированной цАМФ, эпителиальными клетками простаты крысы.

(A) pH _– быстро восстанавливается после подщелачивания клеток, вызванного удалением бикарбоната / CO ₂ из перфузата в присутствии Cl ^–. (B) Скорость восстановления pH _– была заметно снижена, когда внеклеточный Cl ^– был удален из перфузата. (C) В отсутствие Cl ^– форсколин (форск, 10 мкМ) стимулировал восстановление pH _– .(D) Вызванное форсколином восстановление pHi может быть заблокировано NPPB (100 мкМ). Масштабы в A – D такие же. (E) Краткое изложение скоростей восстановления pH _– в различных условиях после клеточного подщелачивания, вызванного удалением бикарбоната / CO ₂ из перфузата. (* P <0,05).

https://doi.org/10.1371/journal.pone.0015255.g002

Эпителиальные клетки предстательной железы крысы отвечают на

Чтобы имитировать вызванное бактериями воспаление при простатите, Ecoli -LPS использовали эндотоксин, присутствующий во внешней мембране бактерий.Мы провоцировали культивированные эпителиальные клетки предстательной железы 2 мкг / мл E.coli -LPS в течение 24 часов и проводили ОТ-ПЦР для изучения экспрессии провоспалительного цитокина IL-6 (414 п.н.), IL-1β (313 п.н.) и TNF-α (292 п.н.) с GAPDH (340 п.н.) в качестве внутреннего маркера. Мы наблюдали, что экспрессия мРНК IL-6, IL-1β и TNF-α была повышена с помощью -LPS E.coli (фиг. 3A). Мы также исследовали влияние -LPS E.coli на экспрессию CFTR и CAII в культивируемых эпителиальных клетках простаты.Как показано на фиг. 3B и 3C, экспрессия мРНК и белка CFTR и CAII была значительно повышена при стимуляции E.coli -LPS, соответственно. Эти результаты предполагают, что CFTR и его опосредованная секреция HCO ₃ ^– могут быть усилены воспалительными цитокинами при бактериальной инфекции / воспалении, что приводит к щелочному сдвигу pH, наблюдаемому при простатите.

Рисунок 3. LPS-индуцированная повышающая регуляция цитокинов, экспрессии CFTR и CAII в эпителиальных клетках простаты крысы.

Первичные эпителиальные клетки простаты крысы обрабатывали 1 мкг / мл E.coli -LPS в течение 24 часов. Уровни экспрессии IL-6, IL-1β, TNF-α, CFTR и CAII оценивали с помощью RT-PCR (A, B), и GAPDH использовали в качестве контроля. Данные были из трех экспериментов. (C) E.coli -LPS повышала экспрессию белков CFTR (160 кДа) и CAII (29 кДа), как обнаружено с помощью вестерн-блоттинга, с β-тубулином (55 кДа), используемым в качестве контроля нагрузки. Данные были из трех экспериментов. (* P <0,05, ** P <0.01, *** P <0,001).

https://doi.org/10.1371/journal.pone.0015255.g003

Бактерицидная способность эпителиальных клеток предстательной железы

Каково физиологическое значение активации CFTR и возможного усиления секреции HCO простаты, опосредованной CFTR ₃ ^– секреции во время простатита? Поскольку HCO ₃ ^– участвует в уничтожении бактерий, усиленная секреция HCO ₃ ^–, опосредованная CFTR, может служить механизмом защиты хозяина.Чтобы проверить это, мы инокулировали 1 × 10 ⁴ колониеобразующих единиц (КОЕ) грамотрицательных бактерий E.coli , которые вызывают до 80% бактериального простатита у людей, в первичную культуру. эпителиальных клеток простаты крысы и не обнаружили роста бактериальных колоний в собранной среде, что указывает на бактерицидную способность эпителиальных клеток. Когда 1 × 10 ⁵ КОЕ E . coli были добавлены к клеткам в отсутствие или в присутствии ингибитора CFTR, CFTR _inh -172 (10 мкМ) или антитела против CFTR, мы наблюдали значительно большее количество бактериальных колоний в среде, собранной из CFTR _inh – 172 и группы лечения антителом CFTR по сравнению с необработанной контрольной группой (фиг. 4A, B).Чтобы проверить, связана ли эта бактерицидная активность с HCO ₃ ^–, клетки были предварительно обработаны ингибитором карбоангидразы, ацетазоламидом (50 мкМ), и было обнаружено, что бактерицидная способность культуры значительно уменьшилась (рис. 4C). . В качестве контроля прямое добавление ингибитора CFTR / антитела или ацетазоламида к бактериальной культуре (1 × 10 ⁵ КОЕ) в используемых концентрациях не влияло на рост E.coli , за исключением прямого воздействия ингибиторов и антител на бактерии.

Рисунок 4. Участие CFTR и CAII в уничтожении бактерий in vitro .

(A) Когда 1 × 10 ⁴ КОЕ E.coli было инокулировано в апикальный компартмент эпителиальных клеток простаты крысы в ​​течение 18 часов, в культуральной среде не было обнаружено бактериальной активности. 10 мкМ CFTR _inh -172 (A), 1500 антител против CFTR (B) или 50 мкМ ацетазоламида (C) были добавлены с 1 × 10 ⁵ E.coli для блокирования активности CFTR или CAII и их эффекта. на активность бактерий через 18 часов после инкубации.(** P <0,01, *** P <0,001).

https://doi.org/10.1371/journal.pone.0015255.g004

Участие CFTR в уничтожении бактерий

Для дальнейшего подтверждения участия CFTR-опосредованной секреции HCO ₃ ^– в уничтожении бактерий в физиологическом контексте мы создали модель in vivo бактериальной инфекции простаты. После бактериальной инокуляции (2 × 10 ⁷ КОЕ) в простату все образцы, взятые из групп с бактериальным простатитом, показали острое воспаление с серьезной инфильтрацией полиморфно-ядерных клеток (PMN) в пространство, содержащее бактерии.Введение E.coli в сочетании с 10 мкМ CFTR _inh -172 привело к значительно большему количеству бактерий, выделенных из предстательной железы, по сравнению с контролем, 6,422 ± 0,168 log ₁₀ КОЕ / г против 5,224 ± 0,102 log ₁₀ КОЕ / г соответственно (Фигура 5А). Мы дополнительно исследовали экспрессию CFTR, CAII, IL-1β и TNF-α, и все они были активированы в инфицированной бактериями предстательной железе (рис. 5B, C). Эти результаты предполагают, что секреция HCO ₃ ^–, опосредованная CFTR, может быть усилена при бактериальной инфекции и участвовать в уничтожении бактерий in vivo .

Фигура 5. Эффект уничтожения бактерий CFTR in vivo и активация цитокинов, CFTR и CAII в простате крысы, инфицированной E coli .

(A) Сравнение активности бактерий E coli , выделенных на моделях простатита крыс без или с CFTR _inh -172 (10 мкМ). Каждая точка указывает количество КОЕ бактерий на грамм массы ткани простаты (*** P <0,001). (B) E.coli повышала экспрессию генов цитокинов, CFTR и CAII в простате крысы, как определено с помощью ОТ-ПЦР.Данные были из трех экспериментов. (C) Экспрессия белков CFTR (160 кДа) и CAII (29 кДа) была значительно повышена в простате крысы, инфицированной E.coli , по данным вестерн-блоттинга. Данные были из трех экспериментов. (* P <0,05, ** P <0,01, *** P <0,001).

https://doi.org/10.1371/journal.pone.0015255.g005

Бикарбонат, но не щелочной pH, в основном отвечает за уничтожение бактерий

Поскольку HCO ₃ ^– является слабым основанием, и бактерицидный эффект, который мы наблюдали, in vitro, и in vivo, может быть обусловлен его буферным действием на pH, а не самой HCO ₃ ^–.Чтобы различать эти два, мы проверили бактерицидную способность растворов с различными концентрациями HCO ₃ ^– . Наши результаты показали, что количество бактерий E.coli было значительно снижено на 80 мМ HCO ₃ ^– со значительно более низким коэффициентом поглощения по сравнению с другими испытанными концентрациями HCO ₃ ^– (Рисунок 6A) . Чтобы исключить возможное участие pH в убийстве бактерий, мы приготовили растворы с различным pH (7.35–8.24) при постоянной концентрации HCO ₃ ^– на уровне 25 мМ. Результаты показали, что не было значительной разницы в способности убивать бактерии между группами с разными значениями pH (фигура 6B). Эти результаты предполагают, что антибактериальная активность, наблюдаемая при использовании 80 мМ или 50 мМ HCO ₃ ^–, в основном обусловлена ​​самой HCO ₃ ^–, а не щелочным pH.

Рис. 6. HCO ₃ ^–, но не pH, проявляет бактерицидную способность in vitro .

(А). Активность E.coli подавлялась 80 мМ HCO ₃ ^– и 50 мМ HCO ₃ ^–. (B) Незначительное влияние на активность бактерий при различных значениях pH (при постоянных 25 мМ HCO ₃ ^–) при 7,35, 7,95, 8,14 и 8,24, что соответствует значению pH для различных концентраций HCO ₃ ^– . Данные были из трех экспериментов. (** P <0,01vs 0 мМ HCO ₃ ^– , ^$$$ p <0.001 против 25 мМ HCO ₃ ^– , ^## P <0,01 против 50 мМ HCO ₃ ^– , ^и P <0,05 против 25 мМ HCO ( ₃ ^– ).

https://doi.org/10.1371/journal.pone.0015255.g006

Бикарбонат увеличивает внутриклеточный цАМФ

Каким может быть молекулярный механизм, лежащий в основе действия HCO по уничтожению бактерий ₃ ^– ? Поскольку известно, что повышенные уровни цАМФ в бактериях подавляют синтез белка [47], [48], а HCO ₃ ^–, как известно, активирует растворимую форму аденилатциклазы (sAC) [49], мы проверили, действительно ли HCO ₃ ^– воздействие может привести к повышению уровня цАМФ в бактериях.Когда E.coli подвергались воздействию различных концентраций HCO ₃ ^–, их внутриклеточные уровни цАМФ повышались в зависимости от концентрации HCO ₃ ^– (Рисунок 7), как измерено с помощью набора Elisa. .

Рисунок 7. Зависимое от концентрации влияние HCO ₃ ^– на внутриклеточную продукцию цАМФ в E.coli .

Внутриклеточная концентрация цАМФ в E.coli , обработанной 60 мМ HCO ₃ ^–, была значительно выше, чем концентрация 0 мМ или 25 мМ HCO ₃ ^– (* P <0.05). Данные были из трех экспериментов.

https://doi.org/10.1371/journal.pone.0015255.g007

Бикарбонат подавляет экспрессию факторов инициации IF1, IF2 и IF3 в

Для дальнейшего подтверждения прямой бактерицидной активности HCO ₃ ^– было исследовано его влияние на подавление генов бактериальных факторов инициации. Как показано на рисунке 8, анализ ОТ-ПЦР E.coli , культивированных в отсутствие или в разных концентрациях NaHCO ₃ , показал, что экспрессия генов IF1, IF2 и IF3 значительно ингибировалась HCO ₃ ^– при концентрации 80 мМ по сравнению с HCO ₃ ^– при 0 мМ.Однако щелочной pH с постоянным значением HCO ₃ ^–, равным 25 мМ, не подавлял экспрессию этих генов, за исключением значительного участия pH в уничтожении бактерий.

Рисунок 8. Влияние HCO ₃ ^– и pH на экспрессию факторов инициации E. coli IF1, IF2 и IF3.

(A) Экспрессия мРНК факторов инициации значительно ингибировалась 80 мМ HCO ₃ ^–. (B) Щелочной pH с постоянным значением HCO ₃ ^–, равным 25 мМ, не подавлял экспрессию генов IF1, IF2 и IF3.16 с использовались в качестве контроля. Данные были из трех экспериментов. (* P <0,05).

https://doi.org/10.1371/journal.pone.0015255.g008

При простатите человека повышается экспрессия CFTR и CAII

Хотя эксперименты in vitro и in vivo на эпителиальных клетках простаты крыс убедительно показали, что секреция HCO, опосредованная CFTR ₃ ^–, усиливается при простатите, который обладает бактерицидной способностью, остается подтвердить, что это Механизм защиты хозяина также присутствует в простате человека.Таким образом, мы исследовали экспрессию CFTR и CAII в образцах гиперплазии предстательной железы человека с воспалением. Иммуногистохимические результаты показали иммуноактивный сигнал CFTR на апикальной границе эпителия предстательной железы человека (фиг. 9A). По сравнению с тканью без воспаления, экспрессия CFTR в предстательной железе, очевидная из-за инфильтрации лимфоцитов (фиг. 9B), была намного сильнее, что указывает на то, что экспрессия CFTR повышается при простатите человека. Экспрессия CAII была обнаружена в цитоплазме эпителиальных клеток предстательной железы человека (фиг. 9C), которая также была активирована в воспаленной области клинических образцов гиперплазии предстательной железы (фиг. 9D).Повышенная регуляция как CFTR, так и CAII в воспаленных тканях предстательной железы человека указывает на то, что опосредованная CFTR секреция HCO ₃ ^– может также усиливаться при воспалении, что может быть причиной высокого pH, наблюдаемого при простатите человека.

Фиг.9. Экспрессия CFTR и CAII в гиперплазии предстательной железы человека с воспалением.

CFTR (A, B) и CAII (C, D) были обнаружены в тканях гиперплазии человека. Была обнаружена инфильтрация лимфоцитов (желтая стрелка, B, D) в воспаленной области клинических образцов гиперплазии простаты.Обратите внимание, что экспрессия CFTR и CAII была сильнее в области с инфильтрацией лимфоцитов (красная стрелка, B, D), чем экспрессия без инфильтрации (красная стрелка, A, C). (E) Отрицательный контроль. Масштабная линейка: 50 мкм.

https://doi.org/10.1371/journal.pone.0015255.g009

Обсуждение

Почти во всех случаях простатита, бактериального или небактериального, наблюдается характерный щелочной сдвиг pH [12], [13], [14], [15], [16]; однако вопрос о том, как это изменение pH происходит при простатите, не рассматривался в сколько-нибудь значительной степени.Настоящее исследование изучило возможный механизм, лежащий в основе этого изменения pH, и впервые продемонстрировало участие CFTR в опосредовании секреции HCO в простате ₃ ^–, которая может усиливаться при бактериальной инфекции или воспалении. Помимо демонстрации экспрессии CFTR в эпителии простаты крыс, которая согласуется с экспрессией, ранее обнаруженной в простате человека [33], [34], [35], мы также выяснили функциональную роль CFTR в простате для здоровья и болезни.Путем измерения скорости восстановления pHi от клеточного подщелачивания в присутствии или отсутствии внеклеточного Cl ^– в сочетании с использованием агониста цАМФ и ингибитора CFTR мы продемонстрировали, что эпителий предстательной железы может вытеснять HCO ₃ ^– в нестимулированных условиях через обменник Cl ^– / HCO ₃ ^– , поскольку удаление внеклеточного Cl ^– значительно снижает скорость восстановления pHi. В этом состоянии, когда анионообменник инактивирован, эпителий предстательной железы может быть стимулирован к секреции HCO ₃ ^– через цАМФ-зависимый путь, который может быть заблокирован ингибитором CFTR.Следовательно, подобно тому, что мы ранее обнаружили в матке [30] и яйцеводе [32], CFTR в предстательной железе, по-видимому, участвует в секреции HCO ₃ ^– прямо или косвенно как путь рециркуляции Cl ^– . для облегчения работы анионообменника, хотя идентичность теплообменника еще предстоит выяснить. Следует отметить, что экспрессия SLC26A3 в простате человека была описана [50], и мы также обнаружили SLC26A6 в простате крысы (неопубликованные данные Xie C), оба из которых, как известно, способны транспортировать HCO ₃ ^– через апикальную мембрану многих эпителиев [51] и работают совместно с CFTR.CFTR-опосредованная секреция HCO ₃ ^– простаты может быть важна для подвижности сперматозоидов при эякуляции, поскольку секреция простаты, как известно, способствует увеличению объема спермы, а HCO ₃ ^– является ключевым фактором, запускающим подвижность сперматозоидов [52] , [53]. Физиологическая роль секреции HCO, опосредованной CFTR ₃ ^– при нормальных условиях требует дальнейших исследований.

Одним из важных наблюдений, сделанных в этом исследовании, является повышенная регуляция CFTR и CAII, наряду с несколькими важными воспалительными цитокинами, на E.coli- LPS, заражение in vitro или E. coli инфекция in vivo . Это предполагает, что физиологическим последствием бактериальной инфекции или заражения LPS в предстательной железе будет усиление опосредованной CFTR секреции HCO ₃ ^–, которая может быть ответственной за повышение pH, наблюдаемое при простатите. Сообщалось, что цитокины, такие как IL-1β и TNF-α, повышают экспрессию CFTR [36], [37], [54]. IL-1β может активировать белок NF-κB, позволяя ему проникать в ядро ​​и связываться с κB-подобным ответным элементом в положениях от -1103 до -1093 в 5′-регуляторном элементе CFTR с последующим увеличением активности промотора CFTR, что приводит к увеличению мРНК CFTR [55].Наблюдаемая повышающая регуляция CFTR и CAII при бактериальной инфекции или заражении LPS может быть связана с повышенными уровнями цитокинов, индуцированными патогенами. Поскольку как бактериальный, так и небактериальный простатит имеют повышенные уровни цитокинов, включая IL-1β и TNF-α [9], [10], эти цитокины могут увеличивать продукцию HCO ₃ ^– и HCO ₃ ^– транспорт путем усиления CAII и CFTR. Этим можно объяснить характерный щелочной сдвиг pH почти для всех категорий простатита.Клинический интерес представляет тот факт, что при простатите уже давно наблюдается более серьезное воспаление (например, чем больше инфильтрированных PMN), тем больше обнаруживается щелочной сдвиг pH [16]. Интересно, что настоящее исследование также обнаружило повышенную экспрессию CFTR и CAII в тканях с гиперплазией человека, где воспаление было более выраженным. В совокупности, настоящее исследование предоставило молекулярный механизм, лежащий в основе секреции HCO ₃ ^– в предстательной железе и его активацию при бактериальной инфекции или воспалении, что может объяснить длительное наблюдаемое повышение pH, связанное с простатитом.

Что еще более важно, настоящее исследование также продемонстрировало физиологическое значение CFTR-опосредованной секреции HCO простаты ₃ ^– в защите хозяина от бактериальной инфекции. Хотя характерное повышение pH при простатите считается диагностическим [18], его физиологическая роль не исследована. В этом исследовании эксперименты in vitro и in vivo продемонстрировали, что эпителиальные клетки предстательной железы обладают бактерицидной активностью, которая в значительной степени зависит от секреции HCO, опосредованной CFTR ₃ ^–, поскольку ингибитор CFTR или CAII значительно ослабляет уничтожение бактерий как первичной эпителиальной культурой предстательной железы, так и простатой крысы.Поскольку CFTR участвует в секреции HCO ₃ ^– простаты, CFTR-зависимая способность простаты убивать бактерии может быть обусловлена ​​прямым действием HCO ₃ ^– или косвенным действием через изменение pH. Мы продемонстрировали, что HCO ₃ ^–, а не щелочной pH, в основном ответственен за уничтожение бактерий, поскольку изменение pH при постоянной концентрации HCO ₃ ^– не оказывает значительного бактерицидного эффекта, тогда как значительное уничтожение бактерий может наблюдаться при концентрации HCO ₃ ^– более 50 мМ.Отсюда сразу возникает вопрос, может ли простата секретировать такие высокие концентрации HCO ₃ ^–. Ответ – да, поскольку средний pH, часто наблюдаемый при простатите, составляет 8–8,3 [56], что, согласно уравнению Хендерона-Хассельбаха, эквивалентно более чем 90 мМ HCO ₃ ^–. Эта высокая концентрация HCO ₃ ^–, как продемонстрировано в настоящем исследовании, способна значительно снизить активность бактерий. Мы также продемонстрировали, что HCO ₃ ^– делает это за счет повышения уровня бактериального цАМФ, предположительно за счет хорошо зарекомендовавшей себя сенсорно-растворимой аденилатциклазы [49], тем самым подавляя гены бактериальных факторов инициации, которые, как известно, участвуют в этом процессе. биосинтеза белка в E. coli [57], [58]. IF1 может стимулировать активность IF2 и IF3 и действовать как белковый фактор для стабилизации комплекса инициации, который важен для жизнеспособности клеток [59]. Наблюдаемый подавляющий эффект HCO ₃ ^– на эти факторы инициации согласуется с его бактерицидной активностью.

Бактерицидный эффект HCO ₃ ^– можно объяснить его продемонстрированной в настоящее время способностью вызывать увеличение цАМФ в бактериях, поскольку, как сообщается, активация цАМФ подавляет синтез белка в бактериях [48].Следует отметить, что экспрессия sAC, отличительной формы аденилатциклазы, в бактериях хорошо задокументирована [60], [61], и ее роль в качестве сенсора HCO ₃ ^–, как сообщалось, вызывает увеличение количества цАМФ в количестве типов клеток, включая легкие, сперму [62], [63]. Взятые вместе, HCO ₃ ^– может оказывать бактерицидное действие, воздействуя на sAC, вызывая увеличение продукции цАМФ, что, в свою очередь, подавляет синтез белка и, таким образом, снижает жизнеспособность бактерий.В то время как большинство предыдущих исследований предполагали участие HCO ₃ ^– в уничтожении бактерий либо за счет изменения pH [64], либо за счет увеличения чувствительности бактерий к антимикробным пептидам [46]. В настоящем исследовании мы продемонстрировали прямой эффект уничтожения бактерий HCO ₃ ^– через цАМФ-зависимый путь. Вместе с продемонстрированной активацией CFTR и CAII, следовательно, усилением секреции HCO в простате ₃ ^– при бактериальной инфекции, настоящее открытие предполагает механизм защиты хозяина от бактериальной инфекции в простате.Длительно наблюдаемый щелочной сдвиг pH при простатите оказывается физиологически важным. Следует отметить, что сообщалось, что pH при бактериальном простатите значительно выше, чем при небактериальном простатите [19]. Фактически, это могло быть причиной того, что удивительно низкая распространенность бактериального простатита, всего 5–10%, обнаруживается среди всех случаев простатита [65]. Мы подозреваем, что значительное количество случаев бактериальной инфекции останется незамеченным из-за усиления секреции HCO, опосредованной CFTR ₃ ^– при бактериальной инфекции.В соответствии с этим представлением, настоящее исследование показало, что когда низкое количество КОЕ E coli было инокулировано в культуру клеток простаты, бактериальная активность не была обнаружена после 18 часов инкубации, что указывает на бактерицидную способность эпителиальных клеток простаты. Однако эта бактерицидная способность значительно снижается при лечении ингибитором CFTR или антителом. Взятые вместе, настоящие открытия выявили ранее неопределенную роль CFTR и его опосредованную секрецию HCO в простате ₃ ^– в защите хозяина от бактериальной инфекции.Настоящие результаты могут иметь значение не только для простатита, поскольку CFTR экспрессируется в самых разных тканях, где легко передаются бактериальные инфекции. Например, пациенты с муковисцидозом, генетическим заболеванием, вызванным мутациями CFTR, часто имеют хроническую инфекцию легких, но точная причина остается неясной. В свете настоящего открытия это теперь можно объяснить возможным дефектом секреции бактериального киллинга HCO ₃ ^– из-за мутаций CFTR.

Хотя настоящие результаты объясняют характерное повышение pH как при бактериальном, так и при небактериальном простатите, мы только выяснили его важность при бактериальном простатите. Остается неясным, будет ли повышенное содержание HCO ₃ ^– или щелочной pH иметь какое-либо физиологическое значение при небактериальном простатите, наиболее распространенной и наименее изученной форме простатита. Следует отметить, что сообщалось, что цАМФ является ключевым внутриклеточным вторичным посредником, который, как было показано, при повышенных уровнях оказывает противовоспалительное и тканезащитное действие [66].Было показано, что повышение уровня цАМФ во время воспаления подавляет провоспалительные и разрушающие ткани свойства лейкоцитов [67]. Поэтому возникает соблазн предположить, что усиленная секреция HCO в простате, опосредованная CFTR ₃ ^–, не только важна для уничтожения бактерий при бактериальном простатите, но также может играть ключевую роль в небактериальном простатите, повышая уровень цАМФ в иммунные клетки для подавления их воспалительных реакций. Интересно, что внеклеточный pH также играет роль в модуляции воспаления.Например, сообщалось, что нейтрофилы менее активны при pH 7,4, чем при более низком pH [68]. Следовательно, как повышенное содержание HCO ₃ ^–, так и щелочной pH (по сравнению с нормальным pH 6,3 в простате), наблюдаемый при небактериальном простатите, могут иметь важное значение для подавления воспаления. Для изучения этих возможностей требуется дальнейшая работа.

Таким образом, настоящее исследование прояснило молекулярный механизм, лежащий в основе давно наблюдаемого, но необъяснимого характерного щелочного сдвига pH при простатите, и выявило ранее неопределенную роль CFTR в защите хозяина от бактериальной инфекции в простате.Настоящие результаты также указывают на возможную роль CFTR-опосредованной секреции HCO ₃ ^– в противовоспалительном процессе. Дальнейшая работа в этом направлении не только подтвердит диагностическую ценность характерного повышения pH при простатите, но также может предоставить новые стратегии лечения простатита.

Материалы и методы

Животные

Самцов 4-недельных и 12-недельных крыс SD содержали в Центре обслуживания лабораторных животных Китайского университета Гонконга.Перед исследованием было получено одобрение комитета по этике (идентификатор разрешения: 07/090 / MIS), и эксперимент на животных проводился в соответствии с руководящими принципами Центра обслуживания лабораторных животных.

Культура клеток

Эпителиальные клетки простаты были выделены ферментативно из простаты крысы в ​​соответствии с методом, описанным Shigeo Taketa [69] с некоторыми модификациями. Вкратце, вентральные простаты 4-недельных крыс удаляли и помещали в чашку Петри, содержащую стерильный HBSS.После промывания HBSS простаты разрезались на мелкие кусочки. Срезы ткани помещали в среду RIPM 1640, содержащую 0,1% коллагеназы I (Sigma), и инкубировали при 35 ° C в течение 45 мин при постоянном встряхивании. После ферментного расщепления фракцию супернатанта пропускали через сетчатый фильтр для клеток с ячейками 100 мкм (BD Falcon ™). Фильтрат центрифугировали при 1000 об / мин в течение 5 мин. Кусочки ткани, оставшиеся в пробирке, дважды подвергали перевариванию, и последний супернатант после просеивания объединяли с первой фракцией.Объединенные клетки собирали центрифугированием при 1000 об / мин в течение 5 мин, а затем дважды промывали. Наконец, клетки суспендировали в среде RIPM 1640, содержащей 10% FBS, и инкубировали при 37 ° C в увлажненной атмосфере, содержащей 5% CO ₂ , в течение ночи для удаления фибробластов. Клеточный супернатант собирали и культивировали в новой культуральной колбе со средой McCoy 5A (Sigma), содержащей 5% FBS, 10 мкг / мл инсулина (Sigma), 10 мкг / мл EGF (Sigma), 5 мкг / мл для переноса (Sigma). , 10 нг / мл холерного токсина (Sigma), 25 мкг / мл экстракта бычьего гипофиза (BD), 100 Ед / мл пенициллина, 100 мкг / мл стрептомицина для дальнейшего изучения.

Экстракция тотальной РНК и полуколичественная ПЦР с обратной транскрипцией (ОТ-ПЦР)

Приблизительно 2 × 10 ⁵ клеток / лунку высевали в 6-луночные планшеты для культивирования клеток и выращивали до 80% конфлюэнтности. Тотальную РНК экстрагировали из клеток с использованием реагента TRIzol (Invitrogen) в соответствии с рекомендациями производителя. РНК E.coli DH5 α в различных концентрациях бикарбоната и pH экстрагировали с использованием набора Trizol Bacterial изоляции ( Invitrogen).Комплементарную ДНК синтезировали из общей РНК с использованием обратной транскриптазы M-MLV (USB, GE Healthcare). Полученный образец первой цепи кДНК непосредственно использовали для полимеразной цепной реакции (ПЦР). Последовательности праймеров и температуры отжига в реакции ПЦР показаны в таблице 1.

Вестерн-блоттинг

Культивируемые клетки лизировали с использованием буфера для анализа радиоиммунопреципитации (RIPA). Экстракты целых клеток очищали центрифугированием и определяли общую концентрацию белка с использованием системы анализа белков Брэдфорда (Bio-Rad, США).Образцы денатурированного белка 40 мкг разделяли на 8% SDS-полиакриламидных гелях и затем переносили на нитроцеллюлозную мембрану Hybond ™ (Amersham). После блокирования 4% обезжиренным молоком в трис-буферном физиологическом растворе-твин 20 (TBST) мембрану инкубировали с поликлональным кроличьим антителом CFTR (Alomone Labs), антителом CAII (Santa Cruz Biotechnology) и β-тубулином (Santa Cruz Biotechnology). с последующими соответствующими вторичными антителами. Полосы белка визуализировали с использованием реагентов ECL.

Иммунофлуоресцентное окрашивание

Изолированные первичные клетки простаты выращивали на покровных стеклах для иммунофлуоресцентных исследований.Клетки промывали PBS и фиксировали в 4% параформальдегиде (PFA) в течение 10 мин. После пермеабилизации в 0,5% Triton X-100 клетки блокировали 10% нормальной козьей сывороткой в ​​течение 30 мин при комнатной температуре, затем антителами CFTR (Alomone Labs), антителами к цитокератину 5 и 8 (NeoMarkers от Research Diagnostics Inc) при 4 °. C на ночь. Клетки промывали PBS и инкубировали со вторичным антителом (IgG, конъюгированный с Alex 488 (Molecular Probes)) в темной комнате. Неограниченное антитело удаляли промыванием и затем окрашивали DAPI (Sigma).Наконец, слайды были установлены для наблюдения под микроскопом Nikon eclipse 80i с передатчиком флуоресценции Nikon Intensilight C-HGF1. Отрицательный контроль выполняли путем исключения первичных антител и замены их на PBS.

Иммуногистохимия

SD были вырезаны и высушены на предметных стеклах микроскопа Superfrost. После депарафинирования и регидратации активность эндогенной пероксидазы гасили с помощью инкубации с 3% перекисью водорода в течение 30 мин.Затем предметные стекла помещали в 10 мМ натрий-цитратный буфер (pH 6) путем кипячения для извлечения антигена. Образцы блокировали в 10% козьей сыворотке и затем инкубировали в течение ночи при 4 ° C с антителом CFTR (Alomone Labs) для тканей крысы или антителом CFTR (Alexis Biochemicals) и антителом CAII (Santa Cruz Biotechnology) для тканей человека. Визуализацию специфических взаимодействий контролировали с помощью системы обнаружения полимеров UltraVision One HRP (Thermo Fisher Scientific) в соответствии с инструкциями производителя, а окрашивание визуализировали с помощью DAB Plus Chromogen с последующим контрастным окрашиванием гематоксилином.Отрицательный контроль выполняли для срезов тканей с использованием PBS.

Измерение внутриклеточного pH в первичных эпителиальных клетках простаты

Для создания системы культуры клеток поляризованных первичных эпителиальных клеток предстательной железы с апикальным и базолатеральным компартментами изолированные клетки высевали с плотностью примерно 2 × 10 ⁵ клеток / мл на мембраны Transwell-Col с порами 0,45 мкм и предварительно покрытый матрицей базальной мембраны Matrigel (1-8 в PBS, BD Bioscience), плавающей в культуральной среде для достижения слияния в течение 5-6 дней.Для измерения внутриклеточного pH (pHi) добавляли 5 мкМ 2 ‘, 7’-бис-2 (2-карбозиэтил) -5- (и-6) -карбоксифлуоресценцию, ацетоксиметиловый эфир (BCECF AM, Molecular Probes). Сигнал флуоресценции регистрировали с помощью флуоресцентного микроскопа (Nikon Eclipse Ti). Используя длину волны возбуждения 490/440 нм и эмиссию 530 нм, радиометрический анализ данных флуоресценции был выполнен с использованием программного обеспечения Metafluor.

Эксперимент по стимуляции проводили на культивируемых эпителиальных клетках.Использовали ЛПС из E.coli 055: B5 (Sigma). Первичные эпителиальные клетки простаты стимулировали 1 мкг / мл LPS в течение 24 часов.

Антибактериальный анализ

Выделенные клетки высевали на мембраны Transwell-Col (0,45 см. ² ), покрытые матригелем, и культивировали, как раньше. Для инфицирования в апикальный компартмент эпителиальных клеток добавляли всего 1 × 10 ⁵ колониеобразующих единиц (КОЕ) E.coli DH5 α.Для блокирования CFTR или карбоангидразы обработанные E coli эпителиальные клетки предварительно инкубировали с 10 мкМ CFTR _inh -172 (Sigma), специфическим блокатором каналов CFTR или антителом против CFTR (1-500, Alomone labs) или 50 мкМ ацетазоламида (Sigma), ингибитора карбоангидразы в течение 24 часов перед добавлением бактерий. Такая же концентрация ДМСО или контрольного IgG была добавлена ​​в качестве контроля. Через 18 ч апикальную среду собирали для подсчета КОЕ на чашке с агаром с бульоном Лурия.

Уничтожение бактерий

Самцам крыс SD в возрасте 12 недель вводили 200 мкл 1 × 10 ⁸ КОЕ / мл E.coli или в сочетании с 10 мкМ CFTR _inh -172 непосредственно под капсулами с двух сторон вентральных долей. Мы исключили из исследования двух крыс, умерших от сепсиса. Животных умерщвляли через 48 часов после операции, и вентральные простаты каждой крысы взвешивали, разрезали на кусочки и обрабатывали ультразвуком в течение 30 минут в PBS для подсчета бактерий. Количество бактерий выражали в логарифме КОЕ на грамм простаты.

Антибактериальный анализ при различной концентрации бикарбоната и pH

E.coli DH5 α выращивали в бульоне Луриа при 37 ° C в шейкере для роста до логарифмической фазы. Растворы для анализа были приготовлены, как указано в таблице 2, с использованием NaCl для поддержания той же концентрации натрия в растворах. Растворы были приготовлены без фиксации pH и позволяли изменять HCO ₃ ^– для изменения его pH. Осмолярность каждого раствора была одинаковой. Концентрация 1 × 10 ⁹ КОЕ / мл E.coli инкубировали при 37 ° C в отсутствие или в присутствии различных концентраций NaHCO ₃ в течение 2 часов, а затем считывали OD ₆₀₀ .Другая серия экспериментов заключалась в изучении бактерицидной активности pH. Был достигнут диапазон различных значений pH (7,35, 7,95, 8,14 и 8,24) в 25 мМ HCO ₃ ^–, который соответствовал значению pH при различной концентрации бикарбоната. E.coli инкубировали в течение 2 часов и считывали OD ₆₀₀ .

Измерение внутриклеточного цАМФ

E.coli подвергали воздействию различных концентраций HCO ₃ ^– в бульоне LB в течение 2 ч, и культуры собирали центрифугированием при 3000 × g в течение 10 мин.Концентрации цАМФ в E.coli определяли с использованием набора Elisa (Assay Designs, Ann Arbor, MI) в соответствии с инструкциями производителя. Средняя внутриклеточная концентрация цАМФ (определенная в трех повторностях) выражалась в пикомолях на миллилитр (пмоль / мл).

Сбор образцов простаты человека

Семь образцов предстательной железы человека были получены путем трансуретральной резекции у пациентов с подозрением на доброкачественную гиперплазию. Четыре образца пациентов с простатитом показали наличие инфильтратов лимфоцитов, которые в основном сосредоточены в периацинарной области и строме вокруг ацинусов и протоков.Образцы тканей были получены сразу после операции и зафиксированы в 4% параформальдегиде (PFA) для парафинового среза. Утверждение этики исследования было получено от этического комитета больницы Шэньчжэня Пекинского университета (идентификатор разрешения: 200), и все пациенты подписали информированное согласие на использование их тканей в исследовательских целях.

Статистический анализ

Данные выражены как среднее значение ± S.E.M. Двухсторонний t-критерий Стьюдента использовался для сравнения различий между двумя группами.Вероятность P <0,05 считалась статистически значимой.

Вклад авторов

Задумал и спроектировал эксперименты: HCC CX. Проведены эксперименты: CX XT WX RD. Проанализированы данные: ZC. Написал статью: CX HCC.

Ссылки

1. 1. Snow DC, Shoskes DA (2010) Фармакотерапия простатита. Эксперт Opin Pharmacother.
2. 2. Липский Б.А., Байрен И., Хоуи CT (2010) Лечение бактериального простатита.Clin Infect Dis 50: 1641–1652.
3. 3. Giamarellou H, Tympanidis K, Bitos NA, Leonidas E, Daikos GK (1984) Бесплодие и хронический простатит. Андрология 16: 417–422.
4. 4. Wolff H, Bezold G, Zebhauser M, Meurer M (1991) Влияние клинически скрытого воспаления на органы мужских половых путей, отраженное биохимическими маркерами в сперме. Дж. Андрол 12: 331–334.
5. 5. Leib Z, Bartoov B, Eltes F, Servadio C (1994) Снижение качества спермы, вызванное хроническим абактериальным простатитом: загадка или реальность? Fertil Steril 61: 1109–1116.
6. 6. Каннингем К.А., Бигли К.В. (2008) Хламидийная инфекция мужских половых путей: последствия для патологии и бесплодия. Биол Репрод 79: 180–189.
7. 7. Mitsumori K, Terai A, Yamamoto S, Ishitoya S, Yoshida O (1999) Характеристики вирулентности Escherichia coli при остром бактериальном простатите. J Infect Dis 180: 1378–1381.
8. 8. de la Rosette JJ, Hubregtse MR, Meuleman EJ, Stolk-Engelaar MV, Debruyne FM (1993) Диагностика и лечение 409 пациентов с синдромами простатита.Урология 41: 301–307.
9. 9. Александр RB, Ponniah S, Hasday J, Hebel JR (1998) Повышенные уровни провоспалительных цитокинов в сперме пациентов с хроническим простатитом / синдромом хронической тазовой боли. Урология 52: 744–749.
10. 10. Jang TL, Schaeffer AJ (2003) Роль цитокинов при простатите. Мировой журнал J Urol 21: 95–99.
11. 11. He L, Wang Y, Long Z, Jiang C (2010) Клиническое значение IL-2, IL-10 и TNF-альфа в секрете простаты у пациентов с хроническим простатитом.Урология 75: 654–657.
12. 12. Fair WR, Cordonnier JJ (1978) pH простатической жидкости: переоценка и терапевтические последствия. Дж. Урол 120: 695–698.
13. 13. Pfau A, Perlberg S, Shapira A (1978) pH простатической жидкости в состоянии здоровья и болезни: последствия лечения хронического бактериального простатита. Дж. Урол 119: 384–387.
14. 14. Blacklock NJ, Beavis JP (1974) Реакция рН простатической жидкости на воспаление. Br J Urol 46: 537–542.
15. 15. Weidner W (1992) Простатит – диагностические критерии, классификация пациентов и рекомендации по терапевтическим испытаниям. Инфекция 20: Suppl 3S227–231; обсуждение S235.
16. 16. White MA (1975) Изменение pH выраженного секрета предстательной железы при течении простатита. Proc R Soc Med 68: 511–513.
17. 17. Chen J, Xu Z, Zhao H, Jiang X (2007) Цитрат в выраженных секретах предстательной железы может использоваться в качестве полезного индикатора для диагностики простатита категории IIIB.Урол Инт 78: 230–234.
18. 18. Тонкий Р.Н. (1991) Диагноз простатита: обзор. Генитурин Мед 67: 279–283.
19. 19. Chandiok S, Fisk PG, Riley VC (1992) Простатит – клинические и бактериальные исследования. Int J STD AIDS 3: 188–190.
20. 20. Winningham DG, Nemoy NJ, Stamey TA (1968) Распространение антибиотиков из плазмы в простатическую жидкость. Природа 219: 139–143.
21. 21. Bjerklund Johansen TE, Gruneberg RN, Guibert J, Hofstetter A, Lobel B и др.(1998) Роль антибиотиков в лечении хронического простатита: согласованное заявление. Eur Urol 34: 457–466.
22. 22. Hug MJ, Tamada T, Bridges RJ (2003) CFTR и секреция бикарбоната путем [коррекции] эпителиальных клеток. Новости Physiol Sci 18: 38–42.
23. 23. Strong TV, Boehm K, Collins FS (1994) Локализация мРНК регулятора трансмембранной проводимости муковисцидоза в желудочно-кишечном тракте человека путем гибридизации in situ. Дж. Клин Инвест 93: 347–354.
24. 24. Cohn JA, Melhus O, Page LJ, Dittrich KL, Vigna SR (1991) CFTR: разработка высокоаффинных антител и локализация в потовых железах. Biochem Biophys Res Commun 181: 36–43.
25. 25. Чан Х.С., Ши QX, Чжоу CX, Ван XF, Сюй WM и др. (2006) Критическая роль CFTR в секреции бикарбоната матки и оплодотворяющей способности сперматозоидов. Mol Cell Endocrinol 250: 106–113.
26. 26. Копельман Х., Кори М., Гаскин К., Дьюри П., Вейцман З. и др.(1988) Нарушение секреции хлоридов, а также секреция бикарбонатов лежат в основе дефекта секреции жидкости в муковисцидозе поджелудочной железы. Гастроэнтерология 95: 349–355.
27. 27. Poulsen JH, Fischer H, Illek B, Machen TE (1994) Бикарбонатная проводимость и способность регулятора трансмембранной проводимости при муковисцидозе регулировать pH. Proc Natl Acad Sci U S A 91: 5340–5344.
28. 28. Ли М.Г., Чхве Дж.Й., Ло Икс, Стрикленд Э., Томас П.Дж. и др. (1999). Регулятор трансмембранной проводимости при муковисцидозе регулирует люминальный обмен Cl- / HCO3- в подчелюстных и поджелудочных протоках мышей.J Biol Chem 274: 14670–14677.
29. 29. Ishiguro H, Steward M, Naruse S (2007) Муковисцидоз, трансмембранный регулятор проводимости и транспортеры SLC26 в секреции HCO3 (-) клетками протока поджелудочной железы. Шэн Ли Сюэ Бао 59: 465–476.
30. 30. Ван XF, Чжоу CX, Ши QX, Юань YY, Yu MK и др. (2003) Участие CFTR в секреции бикарбоната матки и оплодотворяющей способности сперматозоидов. Nat Cell Biol. 5: 902–906.
31. 31. Чан ХК, Руан Ю.С., Хе Кью, Чен М.Х., Чен Х. и др.(2009) Регулятор трансмембранной проводимости при муковисцидозе в репродуктивном здоровье и болезнях. J Physiol 587: 2187–2195.
32. 32. Chen MH, Chen H, Zhou Z, Ruan YC, Wong HY и др. (2010) Участие CFTR в секреции HCO3-яйцевода и его влияние на зависимое от растворимой аденилатциклазы раннее развитие эмбриона. Hum Reprod 25: 1744–1754.
33. 33. Walker J, Watson J, Holmes C, Edelman A, Banting G (1995) Производство и характеристика моноклональных и поликлональных антител к различным областям регулятора трансмембранной проводимости при муковисцидозе (CFTR): обнаружение иммунологически связанных белков.J Cell Sci 108 (Pt 6): 2433–2444.
34. 34. Хихнала С., Куяла М., Топпари Дж., Кере Дж., Холмберг С. и др. (2006) Экспрессия SLC26A3, CFTR и NHE3 в мужском репродуктивном тракте человека: роль в мужской субфертильности, вызванной врожденной хлоридной диареей. Мол Хум Репрод 12: 107–111.
35. 35. Qiao D, Yi L, Hua L, Xu Z, Ding Y и др. (2008) Аллель 5T гена трансмембранного регулятора проводимости муковисцидоза (CFTR) может защищать от рака простаты: исследование случай-контроль в китайской ханьской популяции.J Cyst Fibros 7: 210–214.
36. 36. Cafferata EG, Gonzalez-Guerrico AM, Giordano L, Pivetta OH, Santa-Coloma TA (2000) Интерлейкин-1бета регулирует экспрессию CFTR в клетках T84 кишечника человека. Biochim Biophys Acta 1500: 241–248.
37. 37. Ajonuma LC, He Q, Sheung Chan PK, Yu Ng EH, Fok KL и др. (2008) Участие регулятора трансмембранной проводимости муковисцидоза в отеке, вызванном инфекцией. Cell Biol Int 32: 801–806.
38. 38. Choi JY, Muallem D, Kiselyov K, Lee MG, Thomas PJ, et al.(2001) Аберрантный CFTR-зависимый транспорт HCO3 при мутациях, связанных с муковисцидозом. Nature 410: 94–97.
39. 39. Quinton PM (2001) Заброшенный ион: HCO3. Nat Med 7: 292–293.
40. 40. Tate S, MacGregor G, Davis M, Innes JA, Greening AP (2002) Подкислены дыхательные пути при муковисцидозе: обнаружение по конденсату выдыхаемого воздуха. Грудь 57: 926–929.
41. 41. Coakley RD, Grubb BR, Paradiso AM, Gatzy JT, Johnson LG и др. (2003) Аномальная регуляция рН поверхностной жидкости, вызванная культивированием эпителия бронхов при муковисцидозе.Proc Natl Acad Sci U S A 100: 16083–16088.
42. 42. Thompson KD, Welykyj S, Massa MC (1993) Антибактериальная активность лидокаина в сочетании с бикарбонатным буфером. J Dermatol Surg Oncol 19: 216–220.
43. 43. Drake DR, Vargas K, Cardenzana A, Srikantha R (1995) Повышенная бактерицидная активность Arm and Hammer Dental Care. Am J Dent 8: 308–312.
44. 44. Craig SB, Concannon MJ, McDonald GA, Puckett CL (1999) Антибактериальные эффекты тумесцентной жидкости для липосакции.Plast Reconstr Surg 103: 666–670.
45. 45. Джарвис Г. Н., Филдс М. В., Адамович Д. А., Артур С. Е., Рассел Дж. Б. (2001) Механизм карбонатного уничтожения Escherichia coli. Lett Appl Microbiol 33: 196–200.
46. 46. Доршнер Р.А., Лопес-Гарсия Б., Пешель А., Краус Д., Морикава К. и др. (2006) Ионная среда млекопитающих определяет чувствительность микробов к пептидам противомикробной защиты. FASEB J 20: 35–42.
47. 47. Бхаттачарья А., Датта А. (1977) Влияние циклического АМФ на РНК и синтез белка у Candida albicans.Biochem Biophys Res Commun 77: 1483–1444.
48. 48. Kaul R, Tao S, Wenman WM (1990) Циклический AMP ингибирует синтез белка в Chlamydia trachomatis на уровне транскрипции. Biochim Biophys Acta 1053: 106–112.
49. 49. Чен Ю., Канн М.Дж., Литвин Т.Н., Юргенко В., Синклер М.Л. и др. (2000) Растворимая аденилатциклаза как эволюционно консервативный бикарбонатный сенсор. Наука 289: 625–628.
50. 50. Хоглунд П., Хайла С., Соха Дж., Томашевски Л., Саариалхо-Кере У. и др.(1996) Мутации гена с пониженной регуляцией аденомы (DRA) вызывают врожденную хлоридную диарею. Нат Генет 14: 316–319.
51. 51. Щейников Н., Ван И, Парк М., Ко С.Б., Дорварт М. и др. (2006) Режимы связывания и стехиометрия обмена Cl- / HCO3- с помощью slc26a3 и slc26a6. J Gen Physiol 127: 511–524.
52. 52. Tajima Y, Okamura N, Sugita Y (1987) Активирующие эффекты бикарбоната на подвижность сперматозоидов и дыхание при эякуляции. Biochim Biophys Acta 924: 519–529.
53. 53. Zhou CX, Wang XF, Chan HC (2005) Секреция бикарбоната женскими репродуктивными путями и ее влияние на способность к оплодотворению сперматозоидов. Шэн Ли Сюэ Бао 57: 115–124.
54. 54. He Q, Tsang LL, Ajonuma LC, Chan HC (2010) Аномально повышенная экспрессия регулятора трансмембранной проводимости при муковисцидозе и накопление маточной жидкости способствуют женскому бесплодию, индуцированному Chlamydia trachomatis. Fertil Steril 93: 2608–2614.
55. 55.Brouillard F, Bouthier M, Leclerc T., Clement A, Baudouin-Legros M, et al. (2001) NF-каппа B опосредует повышающую регуляцию экспрессии гена CFTR в клетках Calu-3 с помощью интерлейкина-1beta. J Biol Chem 276: 9486–9491.
56. 56. Wagenlehner FM, Weidner W, Sorgel F, Naber KG (2005) Роль антибиотиков при хроническом бактериальном простатите. Int J Antimicrob Agents 26: 1–7.
57. 57. Gualerzi CO, Pon CL (1990) Инициирование трансляции мРНК у прокариот. Биохимия 29: 5881–5889.
58. 58. Grill S, Moll I, Hasenohrl D, Gualerzi CO, Blasi U (2001) Модуляция рибосомного рекрутирования на 5′-концевые стартовые кодоны с помощью факторов инициации трансляции IF2 и IF3. FEBS Lett 495: 167–171.
59. 59. Cummings HS, Hershey JW (1994) Фактор инициации трансляции IF1 необходим для жизнеспособности клеток Escherichia coli. J Bacteriol 176: 198–205.
60. 60. Билер Дж. А., Тан В. Дж. (2004) Экспрессия и очистка растворимой аденилатциклазы из Escherichia coli.Методы Мол Биол 237: 39–53.
61. 61. Roelofs J, Van Haastert PJ (2002) Определение происхождения растворимой аденилатциклазы, гена, потерянного в нескольких линиях. Mol Biol Evol 19: 2239–2246.
62. 62. Xie F, Garcia MA, Carlson AE, Schuh SM, Babcock DF и др. (2006) Растворимая аденилилциклаза (sAC) незаменима для функции сперматозоидов и оплодотворения. Дев Биол 296: 353–362.
63. 63. Sayner SL, Alexeyev M, Dessauer CW, Stevens T (2006) Растворимая аденилатциклаза показывает значение компартментации цАМФ на барьере эндотелиальных клеток микрососудов легких.Circ Res 98: 675–681.
64. 64. Corral LG, Post LS, Montville TJ (1988) Антимикробная активность бикарбоната натрия. J food Sci 53: 981–982.
65. 65. Schaeffer AJ, Wendel EF, Dunn JK, Grayhack JT (1981) Распространенность и значение воспаления простаты. Дж. Урол 125: 215–219.
66. 66. Erdogan S, Aslantas O, Celik S, Atik E (2008) Влияние повышенного содержания цАМФ на воспаление, окислительный стресс и транскрипты PDE4 во время инфекции Brucella melitensis.Res Vet Sci 84: 18–25.
67. 67. Houslay MD, Adams DR (2003) PDE4 cAMP фосфодиэстеразы: модульные ферменты, которые организуют перекрестные передачи сигналов, десенсибилизацию и компартментализацию. Biochem J 370: 1–18.
68. 68. Trevani AS, Andonegui G, Giordano M, Lopez DH, Gamberale R, et al. (1999) Внеклеточное закисление вызывает активацию нейтрофилов человека. J Immunol 162: 4849–4857.
69. 69. Такета С., Ниши Н., Такасуга Х., Окутани Т., Такенака И. и др.(1990) Различия в потребностях роста эпителиальных и стромальных клеток, полученных из вентральной простаты крысы в ​​бессывороточной первичной культуре. Простата 17: 207–218.

Острая задержка мочи при остром простатите: трансуретральный или подлобковый катетер?

Цель: Оценить текущую практику лечения острой задержки мочи (ОЗМ) у мужчин с доброкачественной гиперплазией предстательной железы (ДГПЖ) во Франции. Пациенты и методы: В общей сложности 2618 мужчин (средний возраст 72 года) с нефебрильными ОЗМ были включены 658 французскими урологами в проспективное поперечное исследование.Были собраны демография пациентов, история ДГПЖ, тип ОЗМ и ее лечение (испытание без катетера, TWOC, использование альфа (1) -блокаторов, немедленное или плановое хирургическое вмешательство, другие альтернативы). Полученные результаты: Из 2618 проанализированных мужчин 1875 (71,6%) имели спонтанную ОЗМ (sAUR) и 743 (28,4%) имели преждевременную ОЗМ (pAUR), в основном после операции под местной или общей анестезией. ДГПЖ была выявлена ​​с помощью ОЗМ у 52,3% мужчин с ЗАВР и 25,9% мужчин с ЗАВР. Уретральный катетер устанавливали в большинстве случаев (82.7%), в то время как только 16,7% имели надлобковый катетер. После начальной катетеризации 72,8% мужчин имели TWOC (pAUR 89,4%, sAUR 66,2%, P <0,001) после 3 дней катетеризации в среднем, 17,9% перенесли плановую операцию после 8 дней катетеризации в среднем (pAUR 7,1%). , sAUR 22,1%, P <0,001), 5,7% перенесли немедленную операцию после медианы 4 дней катетеризации (pAUR 1,1%, sAUR 7,5%, P <0,001), 0,4% имели установленный уретральный стент и 1,1% имели постоянный стент. катетер. Из 1906 мужчин, у которых был TWOC, 79% получали альфа (1) -блокатор (в основном альфузозин) перед удалением катетера.TWOC был успешным у 50,2% мужчин (pAUR 52,3%, sAUR, 49,0%, P = 0,17), а показатель успеха был значительно выше у мужчин, получавших альфа (1) -блокатор (53,0% против 39,6%, P <0,001). ) перед TWOC. Если TWOC не удалось, у 33,4% был второй TWOC (pAUR 39,9%, sAUR 30,2%, P = 0,003) после средней 7-дневной повторной катетеризации, 57,5% перенесли плановую операцию (pAUR 49,1%, sAUR, 61,7%, P <0,001) после 8-дневной повторной катетеризации в среднем у 1,5% был установлен стент, а у 1,1% - постоянный катетер.Общий уровень успеха второго TWOC составил 25,9% (pAUR 32,2%, sAUR 21,9%, P = 0,04). Мужчины, катетеризованные на срок более 3 дней, имели несколько меньшую вероятность успеха для TWOC, большую коморбидность и вдвое большую частоту длительной госпитализации из-за побочных эффектов, чем те, кто катетеризовался на срок менее или = 3 дней. Выводы: TWOC после трехдневной катетеризации в среднем стал стандартной практикой во Франции для мужчин с ДГПЖ и ОЗМ. альфа (1) -блокада перед TWOC значительно увеличивает шанс успешного TWOC.Если TWOC потерпит неудачу, только четверть мужчин будет иметь успешный второй TWOC. Следует приложить все усилия, чтобы сократить продолжительность катетеризации, уменьшить сопутствующую патологию.

SCIRP с открытым доступом

Недавно опубликованные статьи

Подробнее >>

Предварительная оценка фауны рукокрылых в лесу Каям ( Inucarpus fagifer ) в Барангае Пагатпатане, город Бутуан, Филиппины ()

Гленн Л.Бетко, Мельджан Т. Деметилло, Клайд Саланатин, Арчи А. Алонг, Элвин Б. Голоран

Журнал библиотеки открытого доступа Том 8 No3, 25 марта 2021 г.

DOI: 10.4236 / oalib.1107251 12 Загрузок 64 Просмотры

Мгновенно распространяющиеся состояния ()

Александр Сойгуин

Журнал прикладной математики и физики Vol.9 No3, 25 марта 2021 г.

DOI: 10.4236 / jamp.2021.93032 19 Загрузок 40 Просмотры

Контрастная среда осадконакопления железообразования в районе Энденге, Северо-Западный кратон Конго, Южный Камерун: новые выводы из геохимии следов и редкоземельных элементов ()

Робинсон Чатчуенг, Тимолеон Нгнотуэ, Эвин Лауре Танко Ньоссе, Сильвестр Ганно, Эрве Вабо, Жан Поль Нзенти

Международный журнал наук о Земле Vol.12 No3, 25 марта 2021 г.

DOI: 10.4236 / ijg.2021.123016 19 Загрузок 45 Просмотры

Расчет теплоемкости и энергии диссоциации связи некоторых фторированных этанолов и его радикалов: CH _3-x CH ₂ F _x OH, CH ₃ CH _2-x F _x OH ()

Хебах М.Абдель-Вахаб, Джозеф В. Боззелли

Открытый журнал физической химии Том 11 No2, 25 марта 2021 г.

DOI: 10.4236 / ojpc.2021.112002 18 Загрузок 37 Просмотры

Анализ тенденций засухи с помощью непараметрического подхода во Вьетнаме: тематическое исследование в провинции Ниньтхуан ()

Nguyen Hoang Tuan, Truong Thanh Canh

Американский журнал изменения климата Vol.10 No1, 25 марта 2021 г.

DOI: 10.4236 / ajcc.2021.101004 17 Загрузки 40 Просмотры

Разработка системы бесконтактного обнаружения заряженного проводника и визуализации ()

Казума Ноги, Ёсихико Кувахара, Такудзи Усимото

Открытый журнал науки и техники безопасности Vol.11 No1, 25 марта 2021 г.

DOI: 10.4236 / ojsst.2021.111002 13 Загрузок 29 Просмотры

Переоценка каменных артефактов с древнейших занятий человека в убежище на скале Пуэнте, долина Аякучо, Перу ()

Хуан Ятако Капча, Хьюго Г.Нами, Уилмер Хуиза

Археологическое открытие Том 9 No2, 25 марта 2021 г.

DOI: 10.4236 / ad.2021.

27 Загрузок 94 Просмотры

Уязвимость мелких фермерских хозяйств в Южном Котабато, Филиппины ()

Розалина Паланка-Тан, Леонора Ф.Gio

Сельскохозяйственные науки Том 12 No3, 25 марта 2021 г.

DOI: 10.4236 / as.2021.123016 14 Загрузки 35 Просмотры

Возвращаясь к расчетам Эйлера орбиты кометы 1742 г. ()

Сильвио Р.Бистафа

Успехи в исторических исследованиях Том 10 No1, 25 марта 2021 г.

DOI: 10.4236 / ahs.2021.101007 13 Загрузок 30 Просмотры

Исследование по интеграции красной культуры Баодин в преподавание английского языка в колледжах ()

Чэнь Гуань, Хуэйцзюнь Фу, Янь Лю

Творческое образование Vol.12 No3, 25 марта 2021 г.

DOI: 10.4236 / ce.2021.123042 12 Загрузки 31 Просмотры

Обшивка из отбеленного дерева