Инвитро тест на туберкулез цена: Инвитро. Туберкулёз, узнать цены на анализы и сдать в Москве

T-SPOT.TB, сдать анализ на туберкулез

Интерпретация результатов

Интерпретация результатов исследований содержит информацию для лечащего врача и не является диагнозом. Информацию из этого раздела нельзя использовать для самодиагностики и самолечения. Точный диагноз ставит врач, используя как результаты данного обследования, так и нужную информацию из других источников: анамнеза, результатов других обследований и т.д.

Форма представления результата и интерпретация:

В ответе указывается количество спотов (специфически сенсибилизированных Т-лимфоцитов) после инкубации по антигенам А (ESAT-6) и B (CFP-10). Приводится общая оценка результата теста в качественной форме. 

Интерпретация по количеству спотов: 

  • ≤ 4 – отрицательный; 
  • 5-7 – сомнительный; 
  • ≥ 8 – положительный. 

Возможные формы заключения: «положительный», «отрицательный», «сомнительный».

«Положительный»: образец содержит эффекторные Т-клетки, реактивные (специфически сенсибилизированные) к M. tuberculosis. 

«Отрицательный»:  образец не содержит эффекторных Т-клеток, реактивных (специфически сенсибилизированных) к M. tuberculosis в значимой концентрации.

«Сомнительный»:  Получен пограничный результат. Целесообразно провести повторное исследование через 1-2 месяца. При повторном получении пограничного результата для уточнения статуса пациента по ТВ инфекции следует использовать другие методы обследования и/или данные эпиданамнеза.

Для использования в целях установления диагноза или исключения туберкулеза, а также для оценки вероятности наличия латентной туберкулезной инфекции, при интерпретации результатов T-SPOT.TB необходимо принимать во внимание весь комплекс эпидемиологических, анамнестических и клинических данных и результаты других проведенных диагностических исследований.

Примечание. Отрицательный результат не исключает возможности экспозиции к M. tuberculosis или текущей инфекции. При получении отрицательного результата T-SPOT.TB теста лицам, имевшим недавний контакт с инфицированными и отрицательный результат T-SPOT.TB теста, а также при наличии значимых клинических признаков возможной инфекции следует повторить тестирование через шесть недель. По оценкам, приведенным производителем, чувствительность метода при исследовании лиц с подтвержденным культуральным методом туберкулезом составила 95,6%.

Положительный результат не позволяет различить латентную инфекцию и активное заболевание. Для подтверждения активной формы туберкулеза следует применить другие тесты (ПЦР или культуральное исследование мокроты, рентгенографию грудной клетки). Хотя применяемые в данном тесте антигены отсутствуют в вакцине БЦЖ и у большинства других микобактерий, ложноположительный результат может отмечаться у лиц с инфекцией M. kansasii, M. szulgai, M. gordonae или M. marinum.

При подозрении на такие инфекции могут потребоваться альтернативные тесты. Применение T-SPOT.TB теста не оценивали у лиц, получавших более одного месяца противотуберкулезную терапию. По оценкам, приведенным производителем, специфичность метода в группе лиц с низким риском туберкулеза составила 97,1%.

Микобактерии туберкулеза, определение ДНК (Mycobacterium tuberculosis, DNA) в сыворотке крови

Исследуемый материал Сыворотка крови

Метод определения ПЦР с детекцией в режиме «реального времени».

Определение ДНК возбудителей туберкулеза, комплекса микобактерий: M. tuberculosis, M. bovis, M. bovis BCG, M. microti, M. africanum в сыворотке крови методом полимеразной цепной реакции (ПЦР) с детекцией в режиме «реального времени».

Туберкулёз (от лат. tuberculum — бугорок) – распространённое, социально зависимое заболевание человека. Болеют им и животные. Возбудитель туберкулёза открыт Р. Кохом в 1882 г. Это кислотоустойчивые аэробные бактерии (74 вида) рода Мycobacterium, широко распространённые в почве, воде и у животных. У человека чаще всего возбудителем является Mycobacterium tuberculosis. Второй по частоте является Mycobacterium bovis. Оба вида очень устойчивы ко многим факторам внешней среды, а в организме очень долго остаются жизнеспособными и могут вызвать заболевание через многие годы после заражения. Очень важно, что микобактерии туберкулёза могут образовывать так называемые L-формы. Сохраняясь в организме, они создают противотуберкулёзный иммунитет.

Длительное время туберкулёз может протекать скрыто и обнаруживаться случайно, хотя нередко уже проявляются такие симптомы, как слабость, быстрая утомляемость, субфебрильная температура, ночная потливость, а в крови – анемия и лейкопения. В настоящее время, несмотря на все достижения антимикробной терапии, туберкулёз угрожает будущему нации. Поэтому все методы диагностики, особенно его латентных форм являются крайне важными.

Существует много методов лабораторной диагностики туберкулёза: микроскопия мазка (чаще всего для этого используют мокроту), классический культуральный метод, ИФА. Всем им присущи достоинства, но и определённые недостатки, в частности, обнаружение микобактерий только в случае их достаточного количества.

В последние годы для диагностики используют полимеразную цепную реакцию (ПЦР). Её высокая чувствительность позволяет обнаружить в исследуемом материале единичные клетки и даже их фрагменты ДНК. Метод исключает перекрёстные реакции и специфичность достигает 100%. ПЦР позволяет дифференцировать ограниченные и диссеминированные формы туберкулёза, особенно у детей даже при отрицательных результатах микробиологических исследований.

Аналитические показатели:

  • определяемый фрагмент – специфичные участки ДНК микобактерий;
  • специфичность определения – 100%;
  • чувствительность определения- 100 копий ДНК микобактерий в образце.

 

Литература

  1. Макаревич А. Э. Заболевания органов дыхания – М. Высшая школа, 2000. – 368 с.
  2. Jacobs D. et al. Laboratory test handbook/ Lexi-Comp./2002 – pр. 828 – 829.

Рейтинг

1 АлкоМед на Осеннем бульваре

Специализированная клиника

12.16

0.00

отзывы не определено
2 Бест Клиник в Спартаковском переулке

Многопрофильный медицинский центр

12.04

0.00

отзывы высокие
3 Бест Клиник на Новочерёмушкинской

Многопрофильный медицинский центр

11.57

0.00

отзывы высокие
4 К+31 на Лобачевского

Многопрофильный медицинский центр

11.14

0.00

отзывы очень высокие
5 Поликлиника №6

Лечебно-диагностический центр

11.04

0.00

отзывы высокие
6 КБ МГМУ им. Сеченова

Многопрофильный медицинский центр

10.98

0.00

отзывы очень высокие
7 МЕДСИ в Марьино

Многопрофильный медицинский центр

10.72

0.00

отзывы высокие
8 Бест Клиник на Ленинградском шоссе

Многопрофильный медицинский центр

10.62

0.00

отзывы высокие
9 МЕДСИ в Бутово

Многопрофильный медицинский центр

10.59

0.00

отзывы высокие
10 GMS Clinic на 2-й Ямской

Многопрофильный медицинский центр

10.44

0.00

отзывы очень высокие
11 МЕДСИ на Дубининской

Многопрофильный медицинский центр

10.44

0.00

отзывы высокие
12 ЦЭЛТ на шоссе Энтузиастов

Многопрофильный медицинский центр

10.34

0.00

отзывы высокие
13 НМХЦ им. Пирогова на Нижней Первомайской 70

Многопрофильный медицинский центр

10.28

0.00

отзывы низкие
14 МедЦентрСервис на Земляном Валу

Лечебно-диагностический центр

10.25

0.00

отзывы низкие
15 МЕДСИ на Солянке

Многопрофильный медицинский центр

10.24

0.00

отзывы высокие
16 МЕДСИ на Полянке

Многопрофильный медицинский центр

10.23

+0.01

отзывы высокие
17 МЕДСИ в Хорошевском проезде

Лечебно-диагностический центр

10.21

0.00

отзывы высокие
18 Детская клиника МЕДСИ в Благовещенском переулке

Детский медицинский центр

10.16

0.00

отзывы высокие
19 ФМБЦ им. А.И. Бурназяна на Маршала Новикова

Многопрофильный медицинский центр

10.16

0.00

отзывы низкие
20 Клиника №1 в Люблино

Многопрофильный медицинский центр

10.13

0.00

отзывы высокие
21 Клиника Столица на Арбате

Многопрофильный медицинский центр

10.11

0.00

отзывы высокие
22 Клиника Столица на Летчика Бабушкина

Многопрофильный медицинский центр

10.09

0.00

отзывы высокие
23 МедикСити на Полтавской

Многопрофильный медицинский центр

10.08

0.00

отзывы высокие
24 МЕДСИ на Ленинградском проспекте

Многопрофильный медицинский центр

10.04

0.00

отзывы высокие
25 СМ-Клиника на Клары Цеткин

Многопрофильный медицинский центр

10.00

0.00

отзывы высокие
26 Клиника Столица на Ленинском проспекте

Многопрофильный медицинский центр

9.95

0.00

отзывы высокие
27 Медицина на Академика Анохина

Лечебно-диагностический центр

9.94

0.00

отзывы низкие
28 Юсуповская больница на Нагорной

Специализированная клиника

9.93

0.00

отзывы высокие
29 МедЦентрСервис на Тверской-Ямской

Лечебно-диагностический центр

9.91

0.00

отзывы низкие
30 Клиника Столица на Юго-Западной

Многопрофильный медицинский центр

9.90

0.00

отзывы высокие

Стоимость INVITRO – Главная

Діагностика інфекційних захворювань
Код Наименование услуги Стоимость
25Д Дослідження вій на демодекс 165 грн Заказать услугу
Бактеріальні інфекції
1318 Антитіла класу IgА до антигенів Helicobacter рylori, імуноблот 85 грн Заказать услугу
1391 Антитіла, асоційовані з аутоімунними хворобами печінки 960 грн Заказать услугу
1815 ІМУНОБЛОТ IgA, IgG к Воrdetella pertussis 895 грн Заказать услугу
1385 ИМУНОБЛОТ КАШЛЮК IgG 490 грн Заказать услугу
1384 ІМУНОБЛОТ КАШЛЮК IgA 490 грн Заказать услугу
1813 ІМУНОБЛОТ ХЕЛІКОБАКТЕР IgА 515 грн Заказать услугу
1386 ІМУНОБЛОТ ХЕЛІКОБАКТЕР IgG 515 грн Заказать услугу
3113 Збудник кашлюка, визначення ДНК (Bordetella pertussis, B. parapertussis, B. bronchiseptica) 505 грн Заказать услугу
Загальні оглядові дослідження: бактеріоскопічні та культуральні
441-А Посів на флору та чутливість до антибіотиків (сеча) 395 грн Заказать услугу
443 Чутливість до бактеріофагів 205 грн Заказать услугу
446-А Посів на флору та чутливість до антибіотиків (речовини, що відділяються від статевих органів) 395 грн Заказать услугу
464-А Посів на флору та чутливість до антибіотиків (грудне молоко) 395 грн Заказать услугу
465-А Посів на флору та чутливість до антибіотиків ( речовини, що виділяються з ока) 395 грн Заказать услугу
467-А Посів на флору та чутливість до антибіотиків (зів, ніс, пазухи) 395 грн Заказать услугу
473-А Посів на флору та чутливість до антибіотиків ( речовини, що виділяються з вуха) 395 грн Заказать услугу
474-А Посів на флору та чутливість до антибіотиків (гній, речовини, що виділяються з ран) 395 грн Заказать услугу
477-А Посів на флору та чутливість до антибіотиків 395 грн Заказать услугу
478 Антибіотикограма 125 грн Заказать услугу
472-А Посів на флору та чутливість до антибіотиків ( з мікроскопією нативного препарату) 395 грн Заказать услугу
490 Мікрофлора порожнини рота, ротоглотки, носа (скринінг аеробів, мікроаерофілів), ідентифікація та кількісний облік нормальної, умовно-патогенної, патогенної флори, визначення чутливості до антимікробних препаратів 400 грн Заказать услугу
Бореліоз (Хвороба Лайма)
1383 ІМУНОБЛОТ БОРЕЛОЗ IgG — антитіла класу IgG до антигенів Borrelia burgdorferi sensu lato (Anti-Borrelia burgdorferi s.l. IgG, immunoblot) 615 грн Заказать услугу
1382 ІМУНОБЛОТ БОРЕЛІОЗ IgM — антитіла класу IgM до антигенів Borrelia burgdorferi sensu lato (Anti-Borrelia burgdorferi s.l. IgM, immunoblot) 615 грн Заказать услугу
1816 ІМУНОБЛОТ БОРЕЛІОЗ IgM/IgG — антитіла класу IgM/IgG до антигенів Borrelia burgdorferi sensu lato (Anti-Borrelia burgdorferi s.l. IgM/IgG, immunoblot) 1020 грн Заказать услугу
244 Антитіла класу IgM до Borrelia burgdorferi sensu lato (Anti-Borrelia burgdorferi s.l. IgM) 250 грн Заказать услугу
243 Антитіла класу IgG до Borrelia burgdorferi sensu lato (Anti-Borrelia burgdorferi s.l. IgG) 250 грн Заказать услугу
Гонорея
306УРО Гонокок, визначення ДНК у зішкрібі епітеліальних клітин урогенитального тракту 220 грн Заказать услугу
306СП Гонокок, визначення ДНК у секреті простати, еякулянті 220 грн Заказать услугу
306РОТ Гонокок, визначення ДНК у зішкрібі епітеліальних клітин ротоглотки 220 грн Заказать услугу
306ПРК Гонокок, визначення ДНК у зішкрібі епітеліальних клітин слизової прямої кишки 220 грн Заказать услугу
306МОЧ Гонокок, визначення ДНК у сечі 220 грн Заказать услугу
306ГЛЗ Гонокок, визначення ДНК у зішкрібі епітеліальних клітин кон’юнктиви 220 грн Заказать услугу
449 Посів на гонокок та чутливість до антибіотиків 355 грн Заказать услугу
Мікоплазмова інфекція
181 Anti-Mycoplasma pneumoniae IgМ (Антитіла класу IgМ до Mycoplasma pneumoniae) 255 грн Заказать услугу
182 Anti-Mycoplasma pneumoniae IgG (Антитіла класу IgG до Mycoplasma pneumoniae) 255 грн Заказать услугу
347СЛН Мікроплазма, визначення ДНК в слині 560 грн Заказать услугу
347РОТ Мікроплазма, визначення ДНК у зішкрібі епітеліальних клітин ротоглотки 560 грн Заказать услугу
347МК Мікроплазма, визначення ДНК в мокротинні, змивах, лаважній рідині 560 грн Заказать услугу
308УРО Мікроплазма, визначення ДНК у зішкрібі епітеліальних клітин урогенитального тракту 220 грн Заказать услугу
308СП Мікроплазма, визначення ДНК у секреті простати, еякулянті 220 грн Заказать услугу
308МОЧ Мікроплазма, визначення ДНК у сечі 220 грн Заказать услугу
302УРО Мікроплазма, визначення ДНК у зішкрібі епітеліальних клітин урогенитального тракту 220 грн Заказать услугу
302СП Мікроплазма, визначення ДНК у секреті простати, еякулянті 220 грн Заказать услугу
302МОЧ Мікроплазма, визначення ДНК у сечі 220 грн Заказать услугу
440/444 Посів на уреаплазму, мікроплазму та чутливість до антибіотиків 420 грн Заказать услугу
180 Антитіла класу IgG до Mycoplasma hominis 210 грн Заказать услугу
Правець
876 Антитіла до правця анатоксину, IgG 435 грн Заказать услугу
Сифіліс
69ДНП Сифіліс RPR (Rapid Plasma Reagin – антикардіоліпіновий тест) 280 грн Заказать услугу
70 Сифіліс EIA (ИФА) IgG/IgM (антитіла до антигенів Treponema pallidum IgG/IgM) 225 грн Заказать услугу
Стафілококова інфекція
459-А Посів на золотистий стафілокок та чутливість до антибіотиків 255 грн Заказать услугу
Стрептококова інфекція
488 Стрептокок групи В (S.pyogenes), антигенний тест 310 грн Заказать услугу
487 Стрептокок групи А (S.pyogenes), антигенний тест 310 грн Заказать услугу
Туберкульоз
1266 Anti-M.tuberculosis IgG+IgM+IgA (Антитіла сумарні до Mycobacterium tuberculosis) 265 грн Заказать услугу
Уреаплазмова інфекція
264 Anti-U.urealyticum -IgG (Антитіла класу IgG до Ureaplasma urealiticum) 210 грн Заказать услугу
Хелікобактерна інфекція
484 Хелікобактер пілорі 250 грн Заказать услугу
Хламідійна інфекція
105 Антитіла класу IgA до Chlamydia trachomatis 230 грн Заказать услугу
106 Антитіла класу IgG до Chlamydia trachomatis 210 грн Заказать услугу
105/6 Антитіла класу IgG, IgA до Chlamydia trachomatis 400 грн Заказать услугу
301УРО Хламідії, визначення ДНК у зішкрібі епітеліальних клітин урогенитального тракту 230 грн Заказать услугу
301СП Хламідії, визначення ДНК в секреті простати, еякулянті 230 грн Заказать услугу
301РОТ Хламідії, визначення ДНК у зішкрібі епітеліальних клітин ротоглотки 230 грн Заказать услугу
301ПРК Хламідії, визначення ДНК у зішкрібі епітеліальних клітин слизової прямої кишки 230 грн Заказать услугу
301МОЧ Хламідії, визначення ДНК у сечі 230 грн Заказать услугу
301ГЛЗ Хламідії, визначення ДНК у зішкрібі епітеліальних клітин кон’юнктиви 230 грн Заказать услугу
301ВПТ Хламідії, визначення ДНК у випоті 230 грн Заказать услугу
349МК Хламідії, визначення ДНК в мокротинні, змивах, лаважній рідині 560 грн Заказать услугу
301СМЖ Хламідії, визначення ДНК у спинномозковій рідині 230 грн Заказать услугу
185 Anti-Chlamydophila pneumoniae IgG (Антитіла класу IgG до Chlamydophila pneumoniae) 255 грн Заказать услугу
Вірусні інфекції
1814 ІМУНОБЛОТ IgM/IgG до Epstein-Barr virus) 1020 грн Заказать услугу
1390 ІМУНОБЛОТ ВЕБ IgG (IgG к Epstein-Barr virus) 545 грн Заказать услугу
40ПР Вірус Епштейна-Барр (комплексна серологічна діагностика) 540 грн Заказать услугу
Ротавирус
463 Ротавирус (Rotavirus, диарейный синдром), антигенный тест, (кал) 250 грн Заказать услугу
Вірус імунодефіциту людини (ВІЛ)
68 ВІЛ 1/2 (антитіла і антиген) 335 грн Заказать услугу
Гепатит A
72 Антитіла класу IgM до вірусу гепатиту А 230 грн Заказать услугу
Гепатит B
73 HBs-антиген, Австралійский антиген (якісний) 180 грн Заказать услугу
74 Hbе-антиген вірусу гепатиту В 295 грн Заказать услугу
75 Антитіла класів IgM і IgG до HB-core антигену вірусу гепатиту B 230 грн Заказать услугу
76 Антитіла класів IgM до HB-core антигену вірусу гепатиту B 400 грн Заказать услугу
77 Антитіла до HBе-антигену вірусу гепатиту B 320 грн Заказать услугу
78 Антитіла до HBs-антигену вірусу гепатиту B 295 грн Заказать услугу
319СВ Вірус гепатиту В, визначення ДНК (HBV-DNA) якісне в сироватці крові 400 грн Заказать услугу
320 Вірус гепатиту В, визначення ДНК (HBV-DNA) кількісне в сироватці крові 625 грн Заказать услугу
Гепатит C
79 Антитіла до антигенів вірусу гепатиту С 265 грн Заказать услугу
321СВ Вірус гепатиту С в сироватці крові 460 грн Заказать услугу
324ДНП Вірус гепатиту С, визначення РНК, генотипування, в плазмі крові 695 грн Заказать услугу
350-ДНП Вірус гепатиту С, визначення РНК (кількісне) 925 грн Заказать услугу
2447 ІмуноГенетика IL28В: (прогнозування відповіді на противірусну терапію при лікуванні вірусного гепатиту С) 700 грн Заказать услугу
Гепатит D, G
325 Вірус гепатиту D, визначення РНК (HDV-RNA) в сироватці крові 350 грн Заказать услугу
326 Вірус гепатиту G, визначення РНК (HDV-RNA) в сироватці крові 380 грн Заказать услугу
Інфекції, викликані вірусами герпесу
3090ВПТ Герпес-вірус людини 1 та 2 типу (вірус простого герпесу 1 та 2 типу), визначення ДНК, типування (Human herpesvirus 1, 2 (HHV-1, HHV-2), Herpes simplex virus 1, 2 (HSV-1, HSV-2), DNA) у зішкрібі епітеліальних клітин кон’юнктиви 230 грн Заказать услугу
3090ГЛЗ Герпес-вірус людини 1 та 2 типу (вірус простого герпесу 1 та 2 типу), визначення ДНК, типування (Human herpesvirus 1, 2 (HHV-1, HHV-2), Herpes simplex virus 1, 2 (HSV-1, HSV-2), DNA) у зішкрібі епітеліальних клітин кон’юнктиви 230 грн Заказать услугу
3090КОЖ Герпес-вірус людини 1 та 2 типу (вірус простого герпесу 1 та 2 типу), визначення ДНК, типування (Human herpesvirus 1, 2 (HHV-1, HHV-2), Herpes simplex virus 1, 2 (HSV-1, HSV-2), DNA) у зішкрібі епітеліальних клітин шкіри 230 грн Заказать услугу
3090КР Герпес-вірус людини 1 та 2 типу (вірус простого герпесу 1 та 2 типу), визначення ДНК, типування (Human herpesvirus 1, 2 (HHV-1, HHV-2), Herpes simplex virus 1, 2 (HSV-1, HSV-2), DNA) в сечі 230 грн Заказать услугу
3090МОЧ Герпес-вірус людини 1 та 2 типу (вірус простого герпесу 1 та 2 типу), визначення ДНК, типування (Human herpesvirus 1, 2 (HHV-1, HHV-2), Herpes simplex virus 1, 2 (HSV-1, HSV-2), DNA) в сечі 230 грн Заказать услугу
3090НОС Герпес-вірус людини 1 та 2 типу (вірус простого герпесу 1 та 2 типу), визначення ДНК, типування (Human herpesvirus 1, 2 (HHV-1, HHV-2), Herpes simplex virus 1, 2 (HSV-1, HSV-2), DNA) у зішкрібі епітеліальних клітин слизової носа 230 грн Заказать услугу
3090РОТ Герпес-вірус людини 1 та 2 типу (вірус простого герпесу 1 та 2 типу), визначення ДНК, типування (Human herpesvirus 1, 2 (HHV-1, HHV-2), Herpes simplex virus 1, 2 (HSV-1, HSV-2), DNA) у зішкрібі епітеліальних клітин ротоглотки 230 грн Заказать услугу
3090СЛН Герпес-вірус людини 1 та 2 типу (вірус простого герпесу 1 та 2 типу), визначення ДНК, типування (Human herpesvirus 1, 2 (HHV-1, HHV-2), Herpes simplex virus 1, 2 (HSV-1, HSV-2), DNA) в слині 230 грн Заказать услугу
3090СМЖ Герпес-вірус людини 1 та 2 типу (вірус простого герпесу 1 та 2 типу), визначення ДНК, типування (Human herpesvirus 1, 2 (HHV-1, HHV-2), Herpes simplex virus 1, 2 (HSV-1, HSV-2), DNA) у спинномозковій рідині 230 грн Заказать услугу
3090СП Герпес-вірус людини 1 та 2 типу (вірус простого герпесу 1 та 2 типу), визначення ДНК, типування (Human herpesvirus 1, 2 (HHV-1, HHV-2), Herpes simplex virus 1, 2 (HSV-1, HSV-2), DNA) в серкреті простати, еякулянті 230 грн Заказать услугу
3090УРО Герпес-вірус людини 1 та 2 типу (вірус простого герпесу 1 та 2 типу), визначення ДНК, типування (Human herpesvirus 1, 2 (HHV-1, HHV-2), Herpes simplex virus 1, 2 (HSV-1, HSV-2), DNA) у зішкрібі епітеліальних клітин урогенитального тракту 230 грн Заказать услугу
3215 Вітряна віспа, оперізувальний герпес (Varicella-zoster virus), визначення ДНК 315 грн Заказать услугу
3327 Вітряна віспа, оперізувальний герпес (Varicella-zoster virus), визначення ДНК (плазма крові) 315 грн Заказать услугу
Вітряна віспа: опоясывающий лишай; вірус varicella zoster; вірус герпесу людини 3 типу
257 Anti-Varicella-Zoster-IgМ (Антитіла класу IgМ до вірусу вітряної віспи оперізувального герпесу) 440 грн Заказать услугу
256 Anti-Varicella-Zoster-IgG (Антитіла класу IgG до вірусу вітряної віспи оперізувального герпесу) 440 грн Заказать услугу
Герпесвірус людини 6 типу
352УРО Вірус Герпесу 6 типу у зішкрібі епітеліальних клітин урогенитального тракту, визначення ДНК 250 грн Заказать услугу
352СП Вірус Герпесу 6 типу в секреті простати, еякулянті, визначення ДНК 250 грн Заказать услугу
352СМЖ Вірус Герпесу 6 типу у спинномозковій рідині, визначення ДНК 250 грн Заказать услугу
352СЛН Вірус Герпесу 6 типу в слині, визначення ДНК 250 грн Заказать услугу
352РОТ Вірус Герпесу 6 типу у зішкрібі епітеліальних клітин ротоглотки, визначення ДНК 250 грн Заказать услугу
352НОС Вірус Герпесу 6 типу у зішкрібі епітеліальних клітин слизової носа, визначення ДНК 250 грн Заказать услугу
352МОЧ Вірус Герпесу 6 типу в сечі, визначення ДНК 250 грн Заказать услугу
352КР Вірус Герпесу 6 типу в крові, визначення ДНК 250 грн Заказать услугу
352ВПТ Вірус Герпесу 6 типу у випоті, визначення ДНК 250 грн Заказать услугу
276 Anti-HHV-6 IgG (антитіла класу IgG до герпесвірусу людини типу 6) 425 грн Заказать услугу
Герпетична інфекція: віруси простого герпесу людини 1 і 2 типів
122 Антитіла класу IgG до вірусу простого герпесу I та II типів 215 грн Заказать услугу
123 Антитіла класу IgМ до вірусу простого герпесу I та II типів 195 грн Заказать услугу
Інфекційний мононуклеоз: Вірус Епштейна-Барр (вірус герпесу людини 4 типу)
186 Антитіла класу IgM до капсидного антигена вірусу Епштейна-Барр 200 грн Заказать услугу
187 Антитіла класу LgG до капсидного антигена вірусу Епштейна-Барр 200 грн Заказать услугу
255 Антитіла класу LgG до раннього антигена вірусу Епштейна-Барр 200 грн Заказать услугу
351КР Вірус Епштейна-Барр, визначення ДНК в крові 240 грн Заказать услугу
351УРО Вірус Епштейна-Барр, визначення ДНК у зішкрібі епітеліальних клітин урогенитального тракту 240 грн Заказать услугу
351СП Вірус Епштейна-Барр, визначення ДНК у секреті простати, еякулянті 240 грн Заказать услугу
351СМЖ Вірус Епштейна-Барр, визначення ДНК у спинномозковій рідині 240 грн Заказать услугу
351СЛН Вірус Епштейна-Барр, визначення ДНК у слині 240 грн Заказать услугу
351РОТ Вірус Епштейна-Барр, визначення ДНК у зішкрібі епітеліальних клітин ротоглотки 240 грн Заказать услугу
351НОС Вірус Епштейна-Барр, визначення ДНК у зішкрібі епітеліальних клітин слизової носа 240 грн Заказать услугу
351МОЧ Вірус Епштейна-Барр, визначення ДНК у сечі 240 грн Заказать услугу
351ВПТ Вірус Епштейна-Барр, визначення ДНК у випоті 240 грн Заказать услугу
Цитомегаловірусна інфекція: вірус герпесу людини 5 типу
82 Антитіла класу IgG до цитомегаловірусу , ЦМВ, CMV 195 грн Заказать услугу
83 Антитіла класу IgМ до цитомегаловірусу , ЦМВ, CMV 195 грн Заказать услугу
310КОЖ Цитомегаловірус, визначення ДНК в зішкрібі епітеліальних клітин шкіри 220 грн Заказать услугу
310ГЛЗ Цитомегаловірус, визначення ДНК в зішкрібі епітеліальних клітин кон’юнктиви 220 грн Заказать услугу
310ВПТ Цитомегаловірус, визначення ДНК у випоті 220 грн Заказать услугу
310УРО Цитомегаловірус, визначення ДНК у зішкрібі епітеліальних клітин урогенітального тракту 220 грн Заказать услугу
310СП Цитомегаловірус, визначення ДНК в секреті простати, еякулянті 220 грн Заказать услугу
310СМЖ Цитомегаловірус, визначення ДНК у спинномозковій рідині 220 грн Заказать услугу
310СЛН Цитомегаловірус, визначення ДНК в слині 220 грн Заказать услугу
310РОТ Цитомегаловірус, визначення ДНК в зішкрібі епітеліальних клітин ротоглотки 220 грн Заказать услугу
310НОС Цитомегаловірус, визначення ДНК в зішкрібі епітеліальних клітин слизової носа 220 грн Заказать услугу
310МОЧ Цитомегаловірус, визначення ДНК в сечі 220 грн Заказать услугу
310КР Цитомегаловірус, визначення ДНК в крові 220 грн Заказать услугу
2AVCMV Авідність анти-CMV-IgG (Авідність IgG до цитомегаловірусу) 530 грн Заказать услугу
Кір
2500 Anti-Measles IgG (Антитіла класу IgG до вірусу кору) кількісний тест 215 грн Заказать услугу
251 Anti-Measles IgM (Антитіла класу IgM до вірусу кору) 255 грн Заказать услугу
Кліщовий енцефаліт
1227M Лабораторне дослідження кліща для виявлення ДНК збудників хвороб, що переносяться іксодовими кліщами: бореліоз (хвороба Лайма), анаплазмоз, ерліхіоз (Tick laboratory researche: RNA/DNA agent tickborne diseases (Lyme disease, anaplasmosis, ehrlichiosi 940 грн Заказать услугу
Краснуха
84 Антитіла класу IgG до вірусу краснухи 200 грн Заказать услугу
85 Антитіла класу IgМ до вірусу краснухи 200 грн Заказать услугу
Папіломавірусна інфекція
312 Диференційоване визначення ДНК ВПЛ (Вірус папіломи людини, Human papillomavirus, HPV) високого анкогенного ризику 2-х типів (16, 18) + КВМ у зішкрібі епітеліальних клітин урогенитального тракту 230 грн Заказать услугу
313УРО Диференційоване визначення ДНК ВПЛ високого онкогенного ризику 12 типів + КВМ у зішкрібі епітеліальних клітин урогенитального тракту 455 грн Заказать услугу
Аденовірусна інфекція
400 Рото-аденовірус, антиген 395 грн Заказать услугу
Грип (скрінінг)
489-ДНП Вірус групи А/В (Influenza A/B), антигенний тест 490 грн Заказать услугу
Вірусні кишкові інфекції
400 Ротавірус, аденовірус, антигенний тест 395 грн Заказать услугу
Кандидоз
442 Посів на Candida та чутливість до антимікотичних препаратів 235 грн Заказать услугу
3023 КАНДИДОЗ СКРИНІНГ: визначення ДНК Candida albicans; ДНК Fungi (клінічно-значимі мікроскопічні гриби) 225 грн Заказать услугу
Паразитарні інфекції
159ЯГ Аналіз калу на яйця гельмінтів 160 грн Заказать услугу
1810 ІМУНОБЛОТ ЕХІНОКОК IgG до Echinococcus granulosus / Echinococcus multilocularis 790 грн Заказать услугу
Гельмінтози
159 Аналіз калу на яйця гельмінтів (глистів) 50 грн Заказать услугу
Аскаридоз
237 Антитіла класу IgG до антигенів аскарид 340 грн Заказать услугу
Ентеробіоз
160ОСТ Аналіз калу на ентробіозу (яйца гостриць, глисти) 130 грн Заказать услугу
Ехінококоз
229 Антитіла класу IgG до антигенів ехінококу 255 грн Заказать услугу
Опісторхоз
230 Антитіла класу IgG до антигенів опісторхісу 240 грн Заказать услугу
Токсокароз
232 Антитіла класу IgG до антигенів токсокар 260 грн Заказать услугу
Трихінельоз
233 Антитіла класу IgG до антигенів трихінел 255 грн Заказать услугу
Лямбліоз
234 Антитіла до антигенів лямблій сумарні IgA, IgM, IgG 250 грн Заказать услугу
483 Антиген лямблії 255 грн Заказать услугу
Токсоплазмоз
80 Антитіла класу IgG до Тoxoplasma gondii 200 грн Заказать услугу
81 Антитіла класу IgМ до Тoxoplasma gondii 200 грн Заказать услугу
335СМЖ Токсоплазма, визначення ДНК у спинномозковій рідині 255 грн Заказать услугу
335ВПТ Токсоплазма, визначення ДНК у випоті 255 грн Заказать услугу
1AVTOXO Авідність антитіл IgG до токсоплазми 330 грн Заказать услугу
Трихомоніаз
261 Антитіла класу IgG до Trichomonas vaginalis 210 грн Заказать услугу
307УРО Трихомонада, визначення ДНК у зішкрібі епітеліальних клітин урогенитального тракту 220 грн Заказать услугу
307СП Трихомонада, визначення ДНК у секреті простати, еякулянті 220 грн Заказать услугу
307МОЧ Трихомонада, визначення ДНК у сечі 220 грн Заказать услугу
Урогенітальні інфекції
3153 Андрофлор, дослідження мікрофлори урогенитального тракту чоловіка методом ПЦР в режимі реального часу (якісний та кількісний формат) 1250 грн Заказать услугу
3152 Андрофлор, дослідження мікрофлори урогенитального тракту чоловіка методом ПЦР в режимі реального часу (якісний та кількісний формат) 1250 грн Заказать услугу
3151 Андрофлор, дослідження мікрофлори урогенитального тракту чоловіка методом ПЦР в режимі реального часу (якісний та кількісний формат) 1250 грн Заказать услугу

Сравнение специфических анализов крови in vitro с туберкулиновой кожной пробой для диагностики латентного туберкулеза перед терапией против TNF

Блокаторы TNFα одобрены для лечения иммуноопосредованных воспалительных заболеваний (IMID) и обеспечивают выраженную клиническую пользу. Однако они могут реактивировать инфекцию туберкулеза (ТБ) у пациентов, ранее контактировавших с бациллами ТБ. 1 ,2 Наличие покоящихся микобактерий определяет латентную туберкулезную инфекцию (ЛТБИ). 3 ,4 Таким образом, перед началом терапии блокаторами ФНО необходим скрининг на ЛТБИ. 5 Однако на сегодняшний день не существует идеального золотого стандарта для выявления ЛТБИ, и по-прежнему широко используется туберкулиновая кожная проба (ТКП).

Рекомендации по выявлению ЛТБИ во всем мире различаются. 3 ,6 ,7 Во Франции рекомендации были разработаны в 2002 году исследовательской группой RATIO (Исследования, ориентированные на переносимость биотерапевтических средств) для Французского агентства по санитарной безопасности продуктов Санте. 8 ,9 Считается, что пациенты с ЛТБИ нуждаются в профилактическом лечении антибиотиками перед началом анти-ФНО-терапии, если они ранее перенесли ТБ без адекватного лечения, первичную туберкулезную инфекцию, остаточные узловые туберкулезные поражения размером более 1 см 3 или старые поражения, указывающие на диагноз ТБ (паренхиматозные аномалии или утолщение плевры), как видно на рентгенографии грудной клетки, или волдыри диаметром более 10  мм в ответ на ТКП.Адекватное противотуберкулезное лечение определялось как лечение, начатое после 1970 г., продолжительностью не менее 6 месяцев и в том числе не менее 2 месяцев комбинацией рифампицин-пиразинамид. Выбор порога 10 мм для результата ТКП был установлен в 2002 году во Франции, поскольку программа вакцинации бациллой Кальметта-Герена (БЦЖ) была обязательной во Франции, и почти 100% населения было вакцинировано. Тем не менее, после июля 2005 г. порог был снижен до 5 мм, как и в большинстве других стран. 10

ТКП является текущим методом выявления ЛТБИ, но он имеет многочисленные недостатки. Действительно, TST требует повторного визита для ознакомления с результатом теста. Он имеет низкую специфичность, поскольку предыдущая вакцинация БЦЖ и воздействие микобактерий из окружающей среды могут привести к ложноположительным результатам у всех субъектов. 6 ,11 ,12 Такая низкая специфичность может привести к ненужному лечению антибиотиками со значительным риском лекарственной токсичности. 13 ,14 ,15 С другой стороны, ТКП в IMID часто может давать более негативную реакцию, чем в общей популяции, в основном из-за болезни или применения иммунодепрессантов. 16 ,17 Такая низкая чувствительность может привести к ложноотрицательным результатам с последующим риском реактивации ТБ при терапии анти-ФНО.

Идентификация генов в геноме микобактерии ТБ, отсутствующих в БЦЖ и большинстве микобактерий окружающей среды, дает возможность разработать более специфические тесты для исследования инфекции Mycobacterium tuberculosis ( M. tuberculosis ), особенно ЛТБИ. 18 Культуральный фибратный белок-10 (CFP-10) и ранний секреторный антиген-мишень-6 (ESAT-6) являются двумя такими генными продуктами, которые являются сильными мишенями клеточного иммунного ответа у больных туберкулезом.Анализ на основе специфических Т-клеток in vivo, исследующий высвобождение гамма-интерферона (IFNγ) или пролиферацию Т-клеток в присутствии этих специфических микобактериальных антигенов, может быть полезен для скрининга на ЛТИ перед терапией анти-ФНО. Новые тесты ex vivo на основе IFNγ с использованием CFP-10 и ESAT-6 (T-SPOT TB, Oxford Immunotec, Abingdon, UK) и QuantiFERON TB Gold (QFT-G; Cellestis, Carnegie, Australia) позволяют диагностировать активный ТБ, недавняя первичная инфекция или ЛТБИ. 12 Эти тесты кажутся более точными, чем ТКП для этой цели в общей популяции. 12 На сегодняшний день эффективность коммерческих анализов для выявления ЛТБИ у пациентов с IMID, получающих иммуносупрессивные препараты, не была продемонстрирована, и частота неопределенных результатов все еще обсуждается. 19 ,20 ,21

Мы стремились изучить эффективность самодельных анализов пролиферативной и иммуноферментной пятен анти-CFP-10 и анти-ESAT-6 (ELISPOT) при выявлении ЛТБИ у пациентов с IMID перед анти-TNFα терапией.Мы проанализировали две подгруппы пациентов: пациенты с подтвержденной ЛТИ независимо от результата ТКП и пациенты с ЛТИ, основанной исключительно на положительном результате ТКП от 6 до 10  мм.

Пациенты и методы

Пациенты

В период с апреля 2003 г. по май 2005 г. были взяты образцы крови у 68 пациентов с ревматоидным артритом (РА) (n = 29), спондилоартропатией (n = 25) или болезнью Крона (n = 14) до начала анти-ФНО терапии. Все пациенты соответствовали признанным международным критериям для этих заболеваний. 22 ,23 Некоторые пациенты также были включены в предыдущее опубликованное лонгитюдное исследование, изучавшее изменение микобактериального специфического иммунного ответа на лечение анти-ФНОα. 24 Пациенты были разделены на 2 группы в зависимости от отсутствия (группа I, n = 33) или наличия (группа II, n = 35) ЛТИ, определенной, как указано выше, с результатом ТКП ⩽10 мм, поскольку они были включены до июля 2005 г., после уровень отсечки был изменен. Характеристика больных представлена ​​в таблице 1.Ни у одного пациента не было активной туберкулезной инфекции. Все пациенты не получали лечения против TNF или другой биотерапии, и все были вакцинированы БЦЖ в детстве. Пациенты дали информированное согласие, и исследование было одобрено локальным комитетом по этике.

Таблица 1 II группа ЛТИ n 33 35 Возраст, средний (диапазон), лет 42.5 (17–82) 51 (31–79) IMID (RA/SA/CD), no. пациентов 10.11.12 15.18.2 Иммунодепрессанты (MTX/AZA/CT), шт. Пациенты 16/6/18 15/1/11 15/1/11 40095 Положительный результат TST (⩾10 мм), № пациентов 0 0/33 30/35 Известный размер TST результат, нет. Пациентов 23/33 23/35 27/35 0 ⩽5 мм 13/23 3/27 0 6-10 мм 10/23 0/27  >10 мм 0/23 24/27

Процедура ТКП

68 пациентов прошли ТКП в тот же день, когда был взят образец крови, с 5 туберкулиновыми единицами, соответствующими 5 единицам туберкулина.1 мл очищенного белкового производного (PPD) (Sanofi Pasteur, Франция) по внутрикожному методу Манту: через 72 ч после инокуляции опытный исследователь регистрировал основной диаметр уплотнения кожи (в миллиметрах). Положительный или отрицательный результат по 10-мм порогу уплотнения отмечен у всех пациентов, точный размер диаметра отмечен у 51 пациента (23 в I группе и 28 во II группе) (табл. 1). Среди 23 пациентов группы I с зарегистрированным результатом теста 10 имели результат от 6 до 10 мм и, таким образом, должны были быть включены в группу II в соответствии с модификацией французских рекомендаций после июля 2005 года.Среди пациентов группы II у 13 была подтверждена ЛТИ на основании клинических или рентгенологических данных, независимо от результата ТКП. Среди них 5 имели результат ТКП <10 мм. Двое из этих 5 пациентов (40%) получали преднизолон в дозе менее 10 мг/день, а 2 (40%) получали пероральный метотрексат.

Анализы in vitro

После выделения мононуклеарных клеток периферической крови в соответствии со стандартными процедурами с использованием градиента фиколла мы провели анализы включения тимидина (исследование через 5  дней культивирования) и анализы ELISPOT на высвобождение IFNγ (исследование через 18 ч культивирования 2 × 10 5 клеток на лунку) в присутствии рекомбинантного CFP-10 (0.5 мкг/мл) или ESAT-6 (5 мкг/мл) (подарок от Karin Weldingh, Statens Serum Institut, Дания). Анализы разбавления PKH-26 с помощью проточной цитометрии (исследование на 7  дней культивирования) проводились после воздействия CFP-10. Технические процедуры этих анализов были подробно описаны в другом месте. 24

Пороговое значение для положительного ответа было установлено на основании данных 21 контрольного донора без ЛТБИ и 24 пациентов с подтвержденной предшествующей активной инфекцией ТБ (неопубликованные данные), как описано Brock et al . 25 На основании анализа кривых рабочих характеристик приемника (ROC) оптимальными пороговыми значениями для диагностики ЛТИ были включение тимидина, индекс стимуляции (SI) 3,0 для CFP-10 и 4,5 SI для ESAT-6, 4,6% пролиферирующих клеток для Разведение CFP-10 PKH-26 и 10,0 и 5,0 IFN-γ-продуцирующих клеток/10 6 клеток для анализов CFP-10 и ESAT-6 ELISPOT соответственно. Всем испытуемым было проведено тестирование с использованием 3 тестов на антиген CFP-10, а 33 пациентам было проведено тестирование на антиген ESAT-6 (17 в группе I, 16 во II группе).

В качестве положительного контроля в тестировании ELISPOT использовали стимуляцию фитогемагглютинином (ФГА; 5 мкг/мл) (Murex Diagnostics, Париж, Франция). Пятна не подсчитывались при большинстве стимуляций ФГА и во всех случаях составляли более 50 пятен на лунку.

Все эксперименты проводились с ослеплением результатов предыдущих анализов крови, результатов ТКП и окончательного диагноза пациентов.

Статистический анализ

Результаты анализов крови in vitro были представлены графически со средними значениями ± стандартная ошибка среднего (SEM) и пропорциями положительных результатов.Групповые данные сравнивали с использованием критерия Манна-Уитни для количественных переменных и критерия χ 2 (или точного критерия Фишера, когда это уместно) для качественных переменных. Для всех статистических тестов значение p <0,05 считалось значимым. Статистический анализ включал использование SAS 9.1 (SAS Institute Inc., Кэри, Северная Каролина).

Результаты

Иммунный ответ на CFP-10 и ESAT-6 у пациентов с IMID

Ответы на специфические для ТБ антигены CFP-10 и ESAT-6 согласно 3 различным тестам представлены на рис. 1.Поскольку эти антигены специфичны для микобактерий ТБ и отсутствуют в БЦЖ, ответы на CFP-10 или ESAT-6, как и ожидалось, сильно различались между обеими группами с некоторыми различиями между разными тестами (таблица 2). Примечательно, что при комбинированном анализе ELISPOT ESAT-6 и CFP-10 у 3/14 пациентов (21,4%) в группе I и у 17/19 (89,5%) в группе II были положительные результаты (таблица 2). Использование IMID или связанного с ним иммуносупрессивного препарата не повлияло на результаты (данные не показаны).

Рисунок 1  Ответы на тесты на антигены CFP-10 и ESAT-6 у пациентов с IMID с (группа II, черные ящики) или без (группа I, прямоугольники с диагональными линиями) латентной туберкулезной инфекцией.Результаты включения тимидина, разведения PKH-26 и анализов ELISPOT представлены на рис. 1A, B, C соответственно и выражены как среднее ± стандартная ошибка среднего (SEM), индекс стимуляции (SI), доля пролиферирующих клеток (%) и количество IFNγ-продуцирующих клеток на 10 6 клеток соответственно. Исследуемые антигены отмечены над гистограммами, а количество пациентов указано под каждым. Результаты между двумя группами сравнивали для каждого анализа и каждого антигена (*p<0,0001, **p<0,0001, **p<0,0001).002).

Таблица 2 положительные результаты, полученные с анализами in vitro в группе I и II

антиген тест группа I II LTBI P P CFP -10 Thymidine 1/33 (3) * 23/35 (65,7) (65,7) <0,0001 phh-26 1/33 (3) * 16/35 (45.7) <0,0001 ELISPOT 1/32 (3.1) * 18/35 (51.4) <0,0001 ESAT-6 Thymidine 0/14 (0) 0/14 (0) 10/19 (52.6) 0 0.0014 ELISPOT 0 2/14 (14.3) 16/19 (84.2) <0.0001 CFP10 + ESAT-6 ELISPOT 3/14 (21.4) 17/19 (89.5) 0,0001

Сравнение между анализами крови in vitro и ТКП

В настоящее время не существует золотого стандарта для диагностики ЛТБИ.На самом деле, на сегодняшний день пациенты считаются больными ЛТБИ в основном из-за положительного результата ТКП, хотя ТКП может давать ложноотрицательные и ложноположительные результаты, поэтому в нашу группу II могут входить пациенты без истинного ЛТБИ. Таким образом, чтобы сравнить эффективность наших тестов in vitro с результатами ТКП, мы сосредоточились на 13 пациентах из группы II с подтвержденной ЛТИ на основании предыдущей первичной инфекции, предшествующего ТБ с неадекватным лечением или повторных поражений ТБ на рентгенограмме грудной клетки, как уже упоминалось. , независимо от результата TST.Пролиферативный ответ в анализе пролиферации тимидина с CFP-10 или ESAT-6 у 13 пациентов был сильным (в среднем 18,9 (7,1) и 21,2 (9,9) SI соответственно). Только у 2 из этих 13 пациентов (15,4%) были отрицательные результаты теста на пролиферацию тимидина (таблица 3). Анализ разведения PKH-26 только для CFP-10 дал больше отрицательных результатов, чем другие тесты (8/13 (61,5%) пациентов с отрицательными результатами). Для анализов ELISPOT у 7 пациентов, протестированных как на антигены CFP-10, так и на антигены ESAT-6, был положительный результат (таблица 4).

Таблица 3 Таблица 3 Результаты включения тимидина CFP-10 CFP-10 среди пациентов с определенным скрытым туберкулезом инфекция независимые от туберкульской кожи (TST) Результат

0
пациента TST результат CFP-10 Тимидинационное включение
пациента 1 NEG POS (3.0)
пациента 2 NEG POS (6.9)
пациента 3 NEG POS (6.2)
пациента 4 NEG POS (42.6)
пациента 5 NEG POS (35.7)
пациента 6 POS POS (28.1)
пациент 7 POS POS (90.1)
пациента 8 POS POS (3.1)
пациента 9 POS NEG (1.8)
пациента 10 Поз. Поз. (15.4)
пациента 11
POS NEG (1.3)
пациента 12 POS POS (3.0)
пациента 13 POS POS (8.1)
Всего 0 8/13 (61,5%) 11/13 (84,6%)

Таблица 4 Результаты для анализ ELISPOT среди пациентов с определенным скрытым туберкулезом инфекция независимо от TST результат

Pative TST результат CFP-10 ELISPOT CFP-10 ESAT-6 ELISPOT CFP-10 или ESAT-6 ELISPOT
пациента 3 NEG POS ( 30) Положительный (25) Положительный
Пациент 4 Отрицательный Положительный (76.7) NEG (0) POS
POS
POS NEG (1.7) POS (8.7) POS
пациента 7 POS NEG (5) POS (33.3) POS (33.3) POS 0
POS POS (11.7) POS (8.5) POS (8.5) POS 9009
пациентки 12 POS NEG (0) Поз. (366.5) Поз.
Пациент 13 Поз. Поз.3) POS (116.6) POS
Всего 0 8/13 (61,5%) 8/13 (61,5%) 4/7 (57,1%) 6/7 (85,7%) 7/7 (100%)

Среди этих 13 пациентов с подтвержденной ЛТБИ независимо от результата ТКП у 5 (38,5%) был отрицательный результат ТКП (⩽10 мм) (таблица 3). У всех 5 были положительные результаты теста на пролиферацию тимидина с CFP-10 (в среднем 18,9 (8,4) SI).У 2 пациентов с отрицательной ТКП, которые были протестированы с CFP-10 и ESAT-6 в тестах ELISPOT, были положительные результаты (таблица 4).

Значение промежуточного результата ТКП

Десять из 23 пациентов с точным размером уплотнения ТКП были включены в группу I (пациенты без ЛТИ) и имели результат ТКП от 6 до 10 мм. Эти пациенты с промежуточными результатами ТКП, в соответствии с последними французскими рекомендациями и большинством мировых рекомендаций, считались больными ЛТИ и, таким образом, включались в группу II только на основании результатов ТКП.

Мы сравнили результаты анализа in vitro у этих 10 пациентов с результатом ТКП от 6 до 10 мм, пациентов группы I, у которых результат ТКП ⩽5 мм, и пациентов группы II (группа ЛТБИ). Выявлено, что результаты тестов in vitro у 10 пациентов не отличаются от таковых у пациентов с результатом ТКП ⩽5 мм (p>0,3 для каждой пробы) и значительно ниже, чем у пациентов II группы — группы ЛТБИ (p <0,002, p<0,003 и p<0,05 для анализов CFP-10 на тимидин и CFP-10 и ESAT-6 ELISPOT соответственно) (рис. 2).Точно так же мы не наблюдали различий между пациентами с результатом ТКП от 6 до 10  мм и пациентами с результатом ⩽5  мм с точки зрения количества пациентов с положительным результатом для каждого анализа (таблица 5).

Рисунок 2  Результаты анализов крови in vitro у пациентов без латентной туберкулезной инфекции (ЛТБИ) и туберкулиновой кожной пробы (ТКП) ⩽5  мм (диагональные прямоугольники), без признаков ЛТБИ, но результат ТКП от 6 до 10 мм (черные ящики) и с ЛТБИ (соответствует II группе) (горизонтальные прямоугольники).Результаты включения тимидина, разведения PKH-26 и анализов ELISPOT представлены на рис. 1A, B, C соответственно и выражены как среднее значение ± стандартная ошибка среднего (SEM), индекс стимуляции (SI), доля пролиферирующих клеток (%) и количество IFNγ-продуцирующих клеток на 10 6 клеток соответственно. Антигены, протестированные для каждого теста, отмечены в верхней части гистограмм, а количество пациентов указано под каждым. Статистический анализ сравнил группу с промежуточной ТКП (6–10  мм) с двумя другими (*p<0.002; *р≤0,003; **р<0,05).

Таблица 5  Сравнение положительных результатов анализов in vitro у пациентов без латентной туберкулезной инфекции (ЛТИ) и результатов туберкулиновой кожной пробы (ТКП) ⩽5 мм, без признаков ЛТИ, за исключением результата ТКП от 6 до 10 мм (промежуточная ТКП) и с ЛТИ (соответствует группе II)

<0.0001

Коммерческие тесты на высвобождение IFNγ на основе Т-клеток in vitro (T-SPOT TB и QFT-G) были валидированы в невыбранных и ВИЧ-позитивных популяциях, 12 , но, несмотря на широко признанные ограничения, ТКП остается классическим биологический метод выявления туберкулезной инфекции перед анти-ФНО терапией.На сегодняшний день опубликовано лишь несколько отчетов об использовании тестов in vitro в IMID. 24 ,26 ,28 В нашем исследовании с участием 68 пациентов с IMID мы изучили анализ ELISPOT, высвобождающий IFNγ, который эквивалентен коммерческому анализу с комбинированным использованием антигенов CFP-10 и ESAT-6. , и эта тестовая платформа также может предоставить полезные дополнительные данные о специфическом микобактериальном иммунном ответе. Действительно, анализы пролиферации на включение тимидина и разведение PKH-26 исследуют реакцию центральной памяти, тогда как обычно считается, что тест на высвобождение IFNγ оценивает реакцию эффекторной памяти.Примечательно, что мы недавно сообщили о проспективном исследовании ex vivo , демонстрирующем, что лечение блокаторами TNF нарушало высвобождение IFNγ в ответ на антигены M.tuberculosis , в то время как пролиферативный ответ сохранялся. 24

В нашем исследовании у пациентов с IMID с ЛТБИ значения всех тестов были значительно выше, чем у пациентов с IMID без LTBI. Среди 14 пациентов в группе I, которые прошли тесты на пролиферацию и ELISPOT как против CFP-10, так и против ESAT-6, 3 (21.4%) имели положительный результат как минимум в одном анализе крови in vitro, но отрицательный результат ТКП. Этот вывод можно интерпретировать либо как лучшую чувствительность тестов in vitro по сравнению с ТКП и другими признаками ЛТИ, либо как ложноположительные результаты последних тестов.

Сравнение чувствительности и специфичности тестов с ТКП невозможно, поскольку в большинстве случаев для определения ЛТИ используется результат ТКП, а золотого стандарта для определения ЛТБИ не существует. Таким образом, мы сосредоточились на 13 пациентах с определенной ЛТБИ на основании клинических или рентгенологических данных, независимо от результатов ТКП.В целом у этих пациентов был положительный результат тестов in vitro, и только у 2 (15%) был отрицательный результат, тогда как у 5 (38,5%) был отрицательный результат ТКП, что свидетельствует о лучшей чувствительности тестов in vitro, чем ТКП. для ЛТБИ в IMID. Примечательно, что 2 пациента с отрицательными результатами анализов in vitro не были проверены на уровень антигена ESAT-6, и возможно, что у этих пациентов была неспособность реагировать на антиген CFP-10 из-за ограничения системы HLA. Кроме того, все 5 пациентов с отрицательными результатами ТКП имели положительный ответ анти-CFP-10 с включением тимидина.Поскольку T-SPOT TB проводится с использованием антигенов CFP-10 и ESAT-6 одновременно, и из-за вариабельности презентации антигена, связанной с системой HLA каждого пациента, только пациенты с определенным LTBI и которые были протестированы на эти оба антигена. был проанализирован. Интересно, что у всех 7 пациентов в этой ситуации были положительные анализы ELISPOT с учетом результатов CFP-10 или ESAT-6, тогда как у 2 была отрицательная ТКП (таблица 4). Таким образом, чувствительность тестов in vitro для диагностики ЛТИ выше, чем у ТКП, а анализы крови in vitro могут быть полезны для диагностики ЛТИ у пациентов с ИМИД даже в случаях иммунодепрессии.Примечательно, что все пациенты ответили на PHA, что свидетельствует об избирательном снижении ответа на PPD и об отсутствии глубокой анергии у наших пациентов с IMID, как это уже наблюдалось у пациентов с РА. 29

Во II группе (группа ЛТБИ) анализы крови in vitro дали положительные результаты с частотой от 45,7% до 84,2%. Анализ ELISPOT был эффективен для выявления ЛТБИ, особенно при сочетании CFP-10 и ESAT-6, с большей чувствительностью, чем анализы пролиферации. Тем не менее, среди 17 пациентов группы II с отрицательными результатами анализа анти-CFP10 ELISPOT у 7 был положительный результат анализа включения тимидина CFP-10.Среди 3/19 пациентов с отрицательными результатами анализа ESAT-6 ELISPOT у 1 был положительный результат анализа включения тимидина ESAT-6. Эти данные свидетельствуют о том, что комбинация анализов, таких как ELISPOT и анализы на тимидин, может быть полезной в определенных ситуациях. Требуются дальнейшие исследования, чтобы установить полезность анализа пролиферации тимидина, принимая во внимание его более длительную техническую процедуру. Доля пациентов из группы II с положительными результатами тестов in vitro показывает, что результаты этих тестов не полностью согласуются с общепринятыми рекомендациями, поскольку больные были включены в группу ЛТИ в основном на основании результата ТКП, который был положительным у 30 пациентов. группы II и может соответствовать ложноположительному результату в популяции, вакцинированной БЦЖ.

Мы продемонстрировали высокую частоту ложноположительных результатов ТКП между 6 и 10 мм, если выбрано пороговое значение 5 мм, принимая во внимание в качестве золотого стандарта результаты тестов in vitro у пациентов с промежуточными результатами ТКП. Во Франции до июля 2005 г. порог ТКП у пациентов с ИМИД составлял 10 мм, что отличалось от порога большинства других стран (5 мм) и оправдывалось почти 100% прививкой БЦЖ. 8 ,9 Согласно проспективному исследованию группы RATIO, у 4 из первых 13 случаев активного ТБ, получавших лечение блокаторами ФНО, результат ТКП составлял от 6 до 10 мм ( 10 и личное сообщение).Это наблюдение привело к снижению порога TST с 10 до 5  мм, что является пороговым значением, широко используемым в других странах для выявления ЛТБИ перед терапией против TNFα. 4 ,6 ,30 Но риск заключался в назначении избыточного количества антибиотиков пациентам с промежуточными результатами ТКП только из-за предыдущей вакцинации БЦЖ. Чтобы исследовать биологическую значимость этой рекомендации, мы проанализировали 10 пациентов с промежуточным результатом ТКП, которые получали бы антибиотики, если бы они начали терапию против TNFα после июля 2005 года.Результаты анализа in vitro для этих пациентов значительно отличались от результатов пациентов с ЛТБИ (группа II) и были аналогичны результатам ТКП ⩽5 мм по их количественным результатам. Только у 2 были положительные результаты с анализами CFP-10+ESAT-6 ELISPOT, и ни у одного не было положительных результатов с анализами пролиферации тимидина и разведения PKH-26. Этот результат свидетельствует о том, что такое изменение порогового уровня привело к снижению специфичности ТКП. Более того, используя анализ кривой ROC, мы определили оптимальные пороговые значения TST для диагностики ЛТБИ, учитывая, что положительное включение тимидина CFP-10 было золотым стандартом ЛТБИ.Интересно, что мы обнаружили, что оптимальное пороговое значение TST составляло 9 или 10  мм с использованием анализа включения тимидина CFP-10, что также свидетельствует о том, что пороговое значение 5 мм является слишком низким и может привести к избыточной диагностике ЛТИ (данные не показаны). Логическим последствием является возможность неправильного назначения антибиотиков, как было предложено другими, 31 и риск токсичности антибиотиков. 13 ,14 ,15 Таким образом, тесты in vitro, вероятно, имеют лучшую специфичность, чем ТКП в IMID для диагностики ЛТБИ, особенно с порогом 5 мм для ТКП.Примечательно, что у этих 10 пациентов, которых не лечили антибиотиками, не развилась дальнейшая активная туберкулезная инфекция при терапии анти-ФНО.

В общей популяции анализы на высвобождение IFNγ предлагают более точный подход, чем ТКП, для выявления лиц с ЛТБИ. Действительно, среди недавних контактов с больными ТБ и среди ВИЧ-позитивных пациентов результаты таких тестов выявили контакт с M. tuberculosis лучше, чем ТКП. 12 ,32 ,33 За исключением ВИЧ-положительного населения, пациенты с иммунодефицитом не подвергались исследованиям с анализом крови in vitro.Piana и соавт. обнаружили среди 96 пациентов с гематологическими нарушениями и отрицательными результатами ТКП 34 (35%) с положительным результатом T-SPOT TB. 21 Richeldi et al. также выявили субклиническую активную туберкулезную инфекцию у пациента с болезнью Крона с ложноотрицательным результатом туберкулёзной туберкулёза, 26 и совсем недавно Efthimiou et al. сообщили о двух случаях ЛТИ с отрицательной туберкулёзной пробой. результат и положительный результат теста QFT-G до терапии анти-ФНО. 27 Наши результаты и эти данные предполагают лучшую чувствительность и специфичность анализов крови in vitro, чем ТКП в IMID.Эти результаты должны быть подтверждены в более крупных исследованиях.

В заключение, новые анализы in vitro на основе Т-клеток, изучающие иммуноспецифический противотуберкулезный ответ, могут принести пользу пациентам с IMID, несмотря на состояние иммунодепрессии, и могут стать мощным новым инструментом в диагностике LTBI в популяции IMID. В нашем исследовании, по сравнению с ТКП, тесты in vitro имели как лучшую чувствительность, с положительными результатами у 5 пациентов с определенной ЛТБИ и отрицательными результатами ТКП, так и лучшую специфичность, с отрицательными результатами у большинства пациентов, имеющих промежуточные результаты ТКП (6- 10 мм) как единственный критерий ЛТИ.Эти тесты, и особенно коммерческие наборы, нуждаются в дальнейшей оценке у пациентов с IMID путем сравнения с результатами TST.

Профилактическое назначение противотуберкулезных антибиотиков перед терапией против TNF необходимо при наличии определенных клинических и/или рентгенологических признаков ЛТБИ. В отсутствие этих результатов специфические антитуберкулезные анализы крови in vitro могли бы заменить ТКП для принятия решения о профилактическом лечении антибиотиками.

Определение лекарственной чувствительности при туберкулезе: методы и достоверность результатов

Реферат

Потребность в надежных тестах на лекарственную чувствительность (ТЛЧ) возрастает с расширением эпиднадзора за устойчивостью к противотуберкулезным препаратам и необходимостью соответствующего лечения туберкулеза с множественной лекарственной устойчивостью, заболеваемость которым постепенно увеличивается во многих частях мира.Однако достоверность результатов ТЛЧ, полученных широко используемыми методами, не соответствует приемлемым уровням, за исключением ТЛЧ к изониазиду и рифампицину.

В целом, результаты чувствительности в высокой степени предсказуемы, в то время как результаты резистентности имеют низкую прогностическую ценность, когда распространенность резистентности составляет <10%. Низкая надежность связана со слабой корреляцией с клиническим ответом и низкой воспроизводимостью из-за плохой стандартизации сложных и хрупких тестовых процедур. Таким образом, in vitro критерии резистентности для тестирования чувствительности должны быть тщательно определены с репрезентативными клиническими образцами Mycobacterium tuberculosis , выделенными от пациентов, никогда не получавших противотуберкулезного препарата, и от пациентов, у которых лечение по схеме, содержащей тестируемый препарат, было неэффективным; Затем следует тщательно стандартизировать ТЛЧ для получения воспроизводимых результатов.

Критическая концентрация некоторых лекарств близка к минимальной ингибирующей концентрации для диких восприимчивых штаммов, и, таким образом, тестирование лекарственной чувствительности часто дает плохо воспроизводимые результаты. Эти вопросы требуют внимания врачей при использовании результатов тестирования на лекарственную чувствительность для ведения пациентов.

Во многих странах широкое использование стандартного короткого курса лечения привело к росту заболеваемости туберкулезом (ТБ) с множественной лекарственной устойчивостью (МЛУ), определяемым как устойчивость как минимум к изониазиду (INH) и рифампицину (RFP) 1– 3.Значительно высокие показатели МЛУ-ТБ наблюдались в некоторых частях мира не только среди ранее леченных больных ТБ из-за плохого ведения случаев, но и среди новых случаев из-за передачи инфекции в обществе. Ситуация превратилась в острую потребность в тестах на лекарственную чувствительность (ТЛЧ) для осуществления эпиднадзора за лекарственной устойчивостью (ДРС), а также для разработки эффективных схем адекватного лечения отдельных случаев. А.Торрес и Дж. Каминеро номер 4 в этой серии

В результате неправильного и/или неадекватного лечения резистентность к лекарству возникает путем селективного размножения резистентных мутантов в очагах поражения, несмотря на наличие ингибирующих рост концентраций лекарственного средства. Частота устойчивых к лекарственным средствам мутантов и уровни их устойчивости варьируют в зависимости от лекарственного средства и мутировавших генов и сайтов, фенотипические выражения которых включают следующее: изменения сайта связывания молекул-мишеней лекарственного средства; потеря ферментов, активирующих молекулы лекарств; изменение проницаемости препарата, в том числе эффлюкс; и производство ферментов, инактивирующих лекарственные средства, таких как β-лактамаза.Существует множество методов определения чувствительности Mycobacterium tuberculosis к противотуберкулезным препаратам, но ни один из них не является совершенным, а их результаты не удовлетворяют клиницистов для эффективного лечения больных туберкулезом.

Большинство используемых в настоящее время методов ТЛЧ страдают низкой предсказуемостью, связанной с клинической неуместностью результатов, и неприемлемо низкой надежностью, обусловленной плохой воспроизводимостью. В этом обзоре основное внимание уделяется общим характеристикам методов ТЛЧ, касающихся клинической значимости и воспроизводимости метода.

МЕТОДЫ ТЕСТИРОВАНИЯ НА ЛЕКАРСТВЕННУЮ ЧУВСТВИТЕЛЬНОСТЬ

Лекарственная чувствительность M.tuberculosis может быть определена либо путем наблюдения роста или ингибирования метаболизма в среде, содержащей противотуберкулезный препарат, либо путем обнаружения на молекулярном уровне мутаций в генах, связанных с действием препарата. С технической точки зрения чувствительность к лекарственным средствам определяется на основе ингибирования роста (или метаболизма), вызываемого лекарственным средством, посредством: 1) макроскопического наблюдения за ростом в средах, не содержащих и содержащих лекарство; 2) обнаружение или измерение метаболической активности или продуктов; 3) лизис микобактериофагом; и 4) обнаружение генетических мутаций с использованием молекулярных методов.

Традиционные методы культивирования с использованием сред на основе яиц или агара по-прежнему наиболее широко используются во многих странах 4, 5. Хотя долгое время обработки результатов ТЛЧ не нравится врачам для целей ведения пациентов, они подходят для ДРС. Стандартные методы с использованием среды Левенштейна-Йенсена включают метод пропорции, метод абсолютной концентрации и метод отношения резистентности, которые достаточно хорошо стандартизированы для клинических образцов, по крайней мере, для основных противотуберкулезных препаратов 4.Среди традиционных методов наиболее предпочтительным является пропорциональный метод, но метод абсолютной концентрации также широко используется из-за его технической простоты для приготовления инокулята и чтения результатов.

Чтобы сократить время обработки и сделать его более удобным для ведения пациентов, появилось множество новых методов, направленных на обнаружение задержки роста как можно раньше. Наиболее часто используются системы для определения производства CO 2 , такие как BACTEC 460 6 или MB/Bact 7, и потребления кислорода, такие как пробирка для индикатора роста микобактерий 8; есть и другие, находящиеся на стадии разработки, такие как окислительно-восстановительные индикаторы, такие как резазурин или бромид тетразолия 9, 10, и методы на основе фагов 11, 12.Иммуноанализ с подсчетом частиц 13 также может сократить время обработки за счет обнаружения низкого уровня размножения M. tuberculosis . Многие из этих новых методов трудно внедрить в странах, где они нужны больше всего, из-за высокой стоимости, технической сложности и отсутствия должным образом подготовленных людских ресурсов. Кроме того, им по-прежнему требуется клиническая оценка для подтверждения их заявленной эффективности в различных условиях. Прежде всего, ни один из этих методов не был хорошо откалиброван с репрезентативными клиническими образцами из M.tuberculosis для определения клинически значимых критериев резистентности (, т.е. пороговых значений).

Имеются многочисленные сообщения о молекулярных методах обнаружения генных мутаций, связанных с устойчивостью, включая гибридизацию 14–20 амплифицированных генных сегментов или другие методы, основанные на ПЦР. Однако не все гены, связанные с устойчивостью к различным противотуберкулезным препаратам, и места их мутации были обнаружены, за исключением мутаций гена rpoB, которые приводят к устойчивости к RFP.Эти молекулярные методы обычно требуют первичной амплификации, и, следовательно, когда они используются на регулярной основе в течение длительного периода времени, они не свободны от ложных результатов из-за загрязнения ампликонов и/или хромосомной ДНК.

НАДЕЖНОСТЬ РЕЗУЛЬТАТОВ РЕЗУЛЬТАТОВ НА ЛЕКАРСТВЕННУЮ ЧУВСТВИТЕЛЬНОСТЬ

Всемирная организация здравоохранения и Международный союз по борьбе с туберкулезом и болезнями легких учредили Наднациональную сеть референс-лабораторий по ТБ, с помощью которой они намереваются обеспечить квалификационное тестирование ТЛЧ в странах, внедряющих DRS 1–3.Результаты проверки квалификации по результатам девяти циклов, проведенных в 1994–2002 гг., показали, что средняя чувствительность для выявления устойчивости к изониазиду, РФП, стрептомицину (СМ) и этамбутолу (ЭМБ) составила 98,7%, 97,2%, 90,8% и 89,3% соответственно 3. Соответствующая чувствительность для выявления чувствительности к INH, RFP, SM и EMB составила 98,5%, 96,8%, 93,9% и 94,0% соответственно. 3. Прогностические значения результатов чувствительности ТЛЧ, рассчитанные на основе вышеупомянутых цифр , были высокими для всех четырех препаратов (>93%), даже при распространенности 40%, в то время как прогностические значения результатов ТЛЧ устойчивости сильно различались между четырьмя основными препаратами (рис. 1⇓ и 2⇓).При распространенности резистентности менее 10% прогностические значения для EMB и SM были значительно ниже, чем для INH и RFP. Прогностическая ценность резистентности при медиане распространенности резистентности к конкретным препаратам среди больных легочным ТБ, как было ранее опубликовано 3, составила 80,6% для изониазида при медиане распространенности резистентности 5,9%, 30,4% для РФП при 1,4%, 50,0 % для SM при 6,3% и 10,4% для EMB при 0,8%. Среди ранее леченных случаев прогностические значения были, конечно, выше из-за более высокой медианы распространенности резистентности, а именно: 91.6% для INH при медиане распространенности 14,4%; 74,6% для ЗП на уровне 8,4%; 65,8% для СМ при 11,4%; и 34,8% для EMB при 3,5%. Понятно, что результаты резистентности для ЭМБ и СМ менее надежны, чем для изониазида и РФП. Аналогичные результаты были получены с помощью систем быстрого обнаружения роста 8.

Рис. 1—

Прогностические значения результатов тестирования чувствительности к изониазиду (INH) и стрептомицину (SM). ○: чувствительность к INH; •: устойчивость к изониазиду; ⋄: восприимчивость к СМ; ♦: сопротивление СМ. Данные взяты с 3.

Рис.2—

Прогностические значения результатов тестирования чувствительности к рифампицину (RFP) и этамбутолу (EMB). □: восприимчивость к RFP; ▪: устойчивость к RFP; ▵: восприимчивость к ЭМБ; ▴: сопротивление EMB. Данные взяты с 3.

ФАКТОРЫ, ВЛИЯЮЩИЕ НА РЕЗУЛЬТАТЫ ТЕСТА НА ЛЕКАРСТВЕННУЮ ЧУВСТВИТЕЛЬНОСТЬ

Методы ТЛЧ и интерпретация их результатов сильно различаются; однако следует отметить, что для получения клинически значимых и надежных результатов для ведения больных вероятность неправильной классификации клинически чувствительных или клинически устойчивых штаммов должна быть минимальной или отсутствовать.Стремясь выполнить это требование, было предложено зафиксировать критерии на уровне минимальной ингибирующей концентрации (МИК) и 1% критической резистентности штаммов M.tuberculosis , выделенных от никогда не получавших лечения пациентов 4, 21. Однако первичные резистентность к лекарствам, включая естественную резистентность, будет мешать этому подходу. Другим методом могло бы быть сравнение клинических ответов штаммов, несущих все возможные уровни устойчивости, чтобы найти клинически значимый критический уровень устойчивости.Такой подход может показаться идеальным, но он нереалистичен. По этой причине рекомендуется определить критерии in vitro , которые можно использовать для прогнозирования клинической резистентности и чувствительности с приемлемой точностью, путем тестирования четко определенных и репрезентативных клинических штаммов M. tuberculosis 4, 22, выделенных от пациентов. лечение в хорошо контролируемых и должным образом зарегистрированных клинических условиях. Оцениваемый метод ТЛЧ должен быть откалиброван путем сравнения МИК вероятно чувствительных (PS) штаммов, полученных от пациентов, никогда не получавших лечения, с МИК вероятно устойчивых (PR) штаммов, полученных от пациентов, у которых явно была неэффективность лечения схемами, содержащими соответствующий препарат.Разница в кумулятивных процентах чувствительности между клиническими изолятами PS и PR (в различных концентрациях) была больше при 0,2 мкг·мл -1 с INH и при 40,0 мкг·мл -1 с RFP 23; значения мощности дискриминации составили 75,8% и 85,8% соответственно (рис. 3⇓ и 4⇓). При тех же концентрациях критическая устойчивая пропорция 1% могла наиболее разумно различать PS и PR для обоих препаратов, показывая способность различения 77,1% для INH и 85,6% для RFP 23. Mitchison 24 обнаружил, что устойчивые к SM штаммы отличались от восприимчивых. штаммы при 16 мкг·мл -1 с разницей 52.4%. Леффорд и Митчисон 22 сообщили, что резистентность к этионамиду (ЭТН) различалась при 40,0 мкг·мл -1 с разницей в 46,7%. Также интересно отметить, что наиболее разумные критерии устойчивости могут различаться в разных лабораториях, даже если они применяют один и тот же метод. Штаммы EMB PR были отличены от штаммов PS при 2 мкг·мл -1 в лаборатории Корейского института туберкулеза, Сеул, Южная Корея, в то время как они лучше отличались при 4 мкг·мл -1 в лаборатории Королевской медицинской школы последипломного образования, Лондон, Великобритания, используя ту же среду и метод и тестируя те же штаммы PR (личное сообщение, D.A. Mitchison, Отдел лабораторных исследований туберкулеза Совета медицинских исследований, Королевская медицинская школа последипломного образования, больница Хаммерсмит, Лондон, Великобритания; инжир. 5⇓). Эти данные, по-видимому, указывают на то, что различия в критической концентрации могли быть результатом различных уровней восприимчивости штаммов PS и различий в тестовой среде. Уровни устойчивости штаммов PR сильно различаются, за исключением RFP; поэтому невозможно определить приемлемую точку отсечки без тщательной калибровки чувствительности штаммов PS.Эти исследования ясно показывают, что различие между штаммами PR и PS более надежно для INH и RFP, чем для других препаратов. Также ясно, что разработка метода ТЛЧ, способного на 100 % различать штаммы PR и PS, на самом деле неосуществима из-за технических вариаций, возникающих из-за физико-химически лабильной среды теста.

Рис. 3—

Определение а) критической концентрации и б) критической доли устойчивости к изониазиду (INH) с использованием вероятно чувствительных (—–; n = 99) и вероятно устойчивых штаммов (сплошная линия; n = 117 ).МИК: минимальная ингибирующая концентрация. # : 13,1% как устойчивый; : 75,8%; + : 11,1% как восприимчивые; § : 77,1%. Данные взяты из 23.

Рис. 4—

Определение а) критической концентрации и б) критической доли резистентности к рифампицину (RFP) с использованием вероятно чувствительных (—–; n = 99) и вероятно резистентных штаммов (сплошные линия; n = 108). МИК: минимальная ингибирующая концентрация. # : 85,8%; : 85,6%. Данные взяты с 23.

Рис. 5—

Сравнение критических концентраций этамбутола, наблюдаемых в лабораториях а) Корейского института туберкулеза, Сеул, Южная Корея (вероятно чувствительные корейские штаммы: —–, n = 104; вероятно устойчивые британские штаммы ( BPR): сплошная линия, n = 124) и b) Королевская медицинская школа последипломного образования, Лондон, Великобритания (вероятно восприимчивые гонконгские штаммы: ·····, n = 333; BPR: n = 106), применяя те же метод. МИК: минимальная ингибирующая концентрация. # : 41.9%; : 38,8%. Данные получены из личного общения с Д.А. Mitchison (Отдел лабораторных исследований туберкулеза Совета медицинских исследований, Королевская медицинская школа последипломного образования, больница Хаммерсмит, Лондон, Великобритания).

Недавнее исследование текущей практики ТЛЧ к препаратам второго ряда в 10 наднациональных референс-лабораториях выявило важные различия в отношении критических концентраций препаратов и критических долей резистентности 25, подчеркнув необходимость стандартизации методов и критериев с целью оптимизации клинической значимости результатов ТЛЧ.

Развитие лекарственной устойчивости путем селективного размножения резистентных мутантов, существующих в популяции диких бацилл, определяется начальным размером активно размножающихся организмов в очагах поражения, временем воздействия препарата и концентрацией препарата 4, 24, 26, 27. Абсорбция, диффузия в очаги поражения и поддерживающий уровень лекарственного средства являются важными факторами возникновения лекарственной устойчивости. INH и RFP, результаты тестирования чувствительности которых достаточно надежны, показывают пиковую концентрацию в сыворотке более чем в 100 раз выше, чем MIC, и, безусловно, возможно поддерживать их на достаточно высоком уровне в поражениях на протяжении всего лечения, если только пациент не прерывает лечение. прием наркотиков (рис.6⇓) 27, 28. И наоборот, пиковые уровни в сыворотке циклосерина, EMB, ципрофлоксацина, офлоксацина и ETH ближе к MIC (рис.   6⇓). Как следствие, у некоторых пациентов период ингибирующей концентрации лекарственного средства в очагах поражения может быть коротким и/или уровень лекарственного средства может оставаться субингибирующим в течение большей части времени. В целом результаты ТЛЧ к последним препаратам малонадежны.

Рис. 6—

Приблизительное отношение среднего пика в сыворотке к минимальной ингибирующей концентрации (МПК) противотуберкулезных препаратов.Данные представлены как средние (высокие/низкие). ▪: ципрофлоксацин; □: офлоксацин; •: этионамид; о: этамбутол; ♦: изониазид; ⋄: циклосерин; ▴: рифампицин; ▵: стрептомицин; ▾: парааминосалициловая кислота; ▿: капреомицин; : канамицин. Данные взяты с 27, 28.

Многие из недавно разработанных методов ТЛЧ не были тщательно откалиброваны для определения in vitro критериев резистентности с соответствующими клиническими образцами, репрезентативными для клинического исхода пациента в текущих клинических условиях; вместо этого эти критерии часто выбирались произвольно с использованием лабораторных штаммов.Если не будет проведена тщательная калибровка, клиническая значимость результатов ТЛЧ остается неопределенной.

На воспроизводимость результатов in vitro ТЛЧ в значительной степени влияет физико-химическая среда теста 4, 28, что требует соответствующей стандартизации и контроля процедуры теста. Плохая воспроизводимость обычно связана с процедурной сложностью; таким образом, его можно улучшить за счет процедурного упрощения.

Соответствующая стандартизация подготовки инокулята является важной предпосылкой для получения надежных результатов ТЛЧ, поскольку количество (размер), дисперсия и жизнеспособность микроорганизмов в инокуляте оказывают значительное влияние на результаты ТЛЧ.Частые субкультуры могут искажать уровни чувствительности к лекарственным препаратам и структуру штаммов по сравнению с таковыми из первичных культур. Питательные среды должны обеспечивать адекватный рост всех инокулированных организмов; однако, когда они содержат некоторые антагонистические соединения или химические вещества, препятствующие действию лекарства, результаты будут ненадежными, если только эти вещества не будут удалены или сведены к минимуму. Различия в концентрации лекарственного средства, включенного в среду, возникают из-за связывания с белком, тепловой инактивации, потери различных количеств лекарственного средства во время стерилизации фильтром, неполного растворения из-за использования неподходящих растворителей, неточного расчета эффективности и неточного разбавления.pH среды, температура инкубации и время инкубации также являются важными факторами, влияющими на результаты ТЛЧ. Тщательная стандартизация и контроль этих физико-химических факторов тестовой среды необходимы для достижения приемлемой воспроизводимости результатов ТЛЧ.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Тестирование лекарственной чувствительности по-прежнему широко используется в качестве инструмента для выбора эффективных схем для успешного лечения больных туберкулезом (особенно туберкулезом с множественной лекарственной устойчивостью), а также для оценки эффективности программ и разработки стратегий решения проблемы наркотиков. -резистентный туберкулез.Однако для получения надежных результатов оцениваемый для рутинного использования метод определения лекарственной чувствительности должен быть тщательно откалиброван с репрезентативными клиническими изолятами штаммов Mycobacterium tuberculosis , чтобы определить тестовых критериев in vitro , которые можно использовать для прогнозирования , в лучшем случае, клинический исход пациента. Процедура испытаний затем должна быть стандартизирована с максимальным упрощением, чтобы получить результаты с приемлемой воспроизводимостью в отношении этих критериев.

Сноски

  • Предыдущие статьи из этой серии: № 1: Кардона П.-Дж., Руис-Мансано Дж. О природе Mycobacterium tuberculosis -латентных бацилл. Евро Респир J 2004; 24: 1044–1051. № 2: Rieder H. Ежегодный риск заражения Mycobacterium tuberculosis . Евро Респир J 2005; 25: 181–185. № 3: Митчисон Д.А. Лекарственная устойчивость при туберкулезе. Евро Респир J 2005; 25: 376–379.

  • Получено 25 сентября 2004 г.
  • Принято 6 октября 2004 г.

Список литературы

  1. Всемирная организация здравоохранения. Устойчивость к противотуберкулезным препаратам в мире. Глобальный проект ВОЗ/IUATLD по эпиднадзору за устойчивостью к противотуберкулезным препаратам (WHO/TB/97.229). Женева, документ Всемирной организации здравоохранения, 1997 г.

  2. Всемирная организация здравоохранения. Устойчивость к противотуберкулезным препаратам в мире.Отчет № 2: распространенность и тенденции. Глобальный проект ВОЗ/IUATLD по надзору за устойчивостью к противотуберкулезным препаратам (WHO/CDC/TB/2000.278). Женева, документ Всемирной организации здравоохранения, 2000 г.

  3. Всемирная организация здравоохранения. Устойчивость к противотуберкулезным препаратам в мире. Третий глобальный отчет. Глобальный проект ВОЗ/IUATLD по надзору за устойчивостью к противотуберкулезным препаратам (WHO/CDC/TB/2004). Женева, документ Всемирной организации здравоохранения, 2004 г. (в печати)

  4. Канетти Г., Фокс В., Хоменко А., и др. Достижения в методах тестирования чувствительности микобактерий к лекарствам и использование тестов на чувствительность в программах борьбы с туберкулезом. Bull World Health Organ 1969; 41:21–43.

  5. Кент ТК, Кубица ГП. Микобактериология общественного здравоохранения. Руководство для лаборатории уровня III. Атланта, Центр контроля заболеваний, 1985 г.

  6. Хокинс Дж. Э., Уоллес Р. Дж. Мл., Браун Б. А. Тесты на чувствительность к антибактериальным препаратам: микобактерии. In : Balows A, Hausler WJ, Herrmann KL, Isenberg HD, Shadommy HJ, ред. Руководство по клинической микробиологии. 5-е изд. Вашингтон, округ Колумбия, Американское общество микробиологии, 1991 г.; стр. 1138–1152

  7. Диас-Инфантес М.С., Руис-Серрано М.Дж., Мартинес-Санчес Л., и др. Оценка системы обнаружения микобактерий MB/BacT для определения чувствительности Mycobacterium tuberculosis . J Clin Microbiol 2000; 38:1988–1989.

  8. Бемер П., Паликова Ф.Р., Руш-Гердес С., Другеон Х.Б., Пфиффер Г.Е.Многоцентровая оценка полностью автоматизированной системы BACTEC Mycobacteria Growth Indicator Tube 960 для тестирования чувствительности Mycobacterium tuberculosis . J Clin Microbiol 2002;40:150–154.

  9. Palomino JC, Martin A, Camacho M, Guerra H, Swings J, Portaels F. Планшет для микротитрования резазурина: простой и недорогой метод определения лекарственной устойчивости у Mycobacterium tuberculosis . Противомикробные агенты Chemotherap 2002;46:2720–2722.

  10. Abate G, Mshana RN, Miörner H. Оценка колориметрического анализа на основе бромида 3-(4,5-диметил-2-ил)-2,5-дифенилтетразолия для быстрого выявления устойчивости к рифампицину у Mycobacterium tuberculosis . Int J Tuberc Lung Dis 1998; 2:1011–1016.

  11. Риска П.Ф., Су Ю., Бардаров С., и др. Экспресс-пленочное определение чувствительности к антибиотикам штаммов Mycobacterium tuberculosis с использованием репортерного фага люциферазы и Bronx box.Дж. Клин Миробиол 1999; 37:1144–1149.

  12. Гали Н., Домингес Дж., Бланко С., и др. Использование собственного анализа на основе микобактериофагов для быстрого выявления устойчивости к рифампицину в клинических изолятах Mycobacterium tuberculosis . J Clin Microbiol 2003;41:2647–2649.

  13. Дроварт А., Камбиасо С.Л., Хьюген К., и др. Обнаружение устойчивости к рифампицину и изониазиду штаммов Mycobacterium tuberculosis с помощью иммуноанализа с подсчетом частиц.Int J Tuberc Lung Dis 1997; 1: 284–288.

  14. Лебрун Л., Гёнюллю Н., Бутрос Н., и др. Использование анализа INNO-LIPA для быстрой идентификации микобактерий. Diagn Microbiol Infect Dis 2003;46:151–153.

  15. El-Haji HH, Marras SAE, Tyagi S, Kramer FR, Alland D. Обнаружение устойчивости к рифампицину у Mycobacterium tuberculosis в одной пробирке с молекулярными маяками.J Clin Microbiol 2001;39:4131–4137.

  16. Ким Б.Дж., Ли К.Х., Парк Б.Н., и др. Обнаружение устойчивых к рифампицину Mycobacterium tuberculosis в мокроте с помощью вложенного ПЦР-сцепленного одноцепочечного конформационного полиморфизма и секвенирования ДНК. J Clin Microbiol 2001;39:2610–2617.

  17. Лин Ю.П., Бер М.А., Смолл П.М., Курн Н. Генотипическое определение устойчивости к антибиотикам Mycobacterium tuberculosis с использованием нового метода обнаружения мутаций, ингибирования миграции ветвей M.Туберкулез тест на устойчивость к антибиотикам. J Clin Microbiol 2000;38:3656–3662.

  18. Мокроусов И., Оттен Т., Филипенко М., и др. Обнаружение штаммов Mycobacterium tuberculosis , устойчивых к изониазиду, с помощью мультиплексного аллель-специфического ПЦР-тестирования вариации кодона 315 kat G. J Clin Microbiol 2002;40:2509–2512.

  19. Торрес М.Дж., Криадо А., Паломарес Х.К., Аснар Х.Использование ПЦР в реальном времени и флуориметрии для быстрого выявления мутаций, связанных с устойчивостью к рифампину и изониазиду, в Mycobacterium tuberculosis . J Clin Microbiol 2000;38:3194–3199.

  20. Ван Дер Занден А.Г., Те Коппеле-Визе Э.М., Виджая Бхану Н., Ван Сулинген Д., Шоулс Л.М. Использование экстрактов ДНК из окрашенных по Цилю-Нильсену слайдов для молекулярного обнаружения устойчивости к рифампину и сполиготипирования Mycobacterium tuberculosis .J Clin Microbiol 2003;41:1101–1108.

  21. Pfyffer GE, Bonato DA, Ebrahimzadeh A, et al. Многоцентровая лабораторная валидация тестирования чувствительности Mycobacterium tuberculosis к классическим противомикробным препаратам второго ряда и более новым с использованием радиометрического метода BACTEC 460 и пропорционального метода с твердыми средами. J Clin Microbiol 1999;37:3179–3186.

  22. Леффорд М.Дж., Митчисон Д.А.Сравнение методов определения чувствительности Mycobacterium tuberculosis к этионамиду. Туберкул 1966; 47: 250–262.

  23. Корейский институт туберкулеза, Корейская национальная противотуберкулезная ассоциация. Определение лекарственной чувствительности микобактерий методом пропорции. Отчет об исследовании, 1994 г.

  24. Митчисон Д.А. Что такое лекарственная устойчивость? Туберкул 1969; 50: 44–47.

  25. Kim SJ, Espinal MA, Abe C, et al. Надежно ли определение чувствительности к противотуберкулезным препаратам второго ряда? Int J Tuberc Lung Dis 2004; 8: 1157–1158.

  26. Канетти Г. Лекция Дж. Бернса Амберсона: представить аспекты бактериальной резистентности при туберкулезе. Am Rev Respir Dis 1966; 92: 687–703.

  27. Иваински Х. Механизм действия, биотрансформация и фармакокинетика противотуберкулезных препаратов у животных и человека. В : Бартманн К., изд.Противотуберкулезные препараты. Нью-Йорк, Springer-Verlag, 1988; стр. 399–553

  28. Хейфец ЛБ. Лекарственная чувствительность при химиотерапии микобактериальных инфекций. Бока-Ратон, CRC Press, 1991

Границы | Скрининг соединений на противотуберкулезную активность и оценка потенциальных кандидатов in vitro и in vivo

Введение

Туберкулез (ТБ), вызываемый Mycobacterium tuberculosis ( Mtb ), представляет собой опасную для жизни инфекционную болезнь, которая была причиной 1.3 миллиона смертей во всем мире в 2020 г. [Всемирная организация здравоохранения (ВОЗ) (2020 г.)]. Всемирная организация здравоохранения сообщила, что примерно 23% (1,7 миллиарда) населения мира латентно инфицированы Mtb , и ежегодно у 1,5 миллиона человек развивается активный туберкулез. Схема лечения туберкулеза в основном включает антибиотики, такие как рифампицин (RIF), изониазид (INH), этамбутол, пиразинамид и аминогликозиды (Fatma et al., 2020). Терапию этими антибиотиками необходимо проводить от 6 месяцев до 2 лет, что может привести к возникновению лекарственной устойчивости и плохим терапевтическим результатам (Adams et al., 2011; Акос и др., 2015; Кастро и др., 2020). С появлением штаммов с множественной лекарственной устойчивостью (МЛУ) и широкой лекарственной устойчивостью (ШЛУ) (Tao et al., 2017; Arthur et al., 2019) борьба с этим заболеванием с использованием доступных в настоящее время терапевтических схем становится огромной проблемой (Koul et al. al., 2011; Huynh and Marais, 2019; Fuad et al., 2020). Поэтому существует острая потребность в новых эффективных противотуберкулезных препаратах, которые могут сделать бактерии более восприимчивыми к лечению.

За последние несколько десятилетий были предприняты многочисленные попытки разработать препараты для борьбы с лекарственно-устойчивыми штаммами Mtb (Soutter et al., 2016; Янсен и Ри, 2017 г.; Мосаи и др., 2018). Гены, необходимые для роста микобактерий (Sabine et al., 2015; Zuniga et al., 2015), ферменты, связанные с синтезом жирных кислот (Tiago et al., 2019) и репликацией ДНК, стали мишенью для новых вариантов лечения (Aggarwal et al. ., 2017; Прадхан и Синха, 2018). Однако клинические исследования показали, что основными механизмами лекарственной устойчивости Mtb являются генные мутации и образование биопленок (Poushali et al., 2021; Saba et al., 2021). Таким образом, скрининг натуральных продуктов и их производных (Guzman et al., 2012), новых низкомолекулярных ингибиторов (Mishra et al., 2018) и одобренных FDA препаратов предлагает новый подход к разработке новых противотуберкулезных препаратов ( Igarashi, 2017; Luo et al., 2017; Igarashi et al., 2018; Nadav et al., 2018). Виртуальный скрининг с использованием программ стыковки использовался для идентификации молекул потенциальных лекарств из виртуальной библиотеки, содержащей 461 397 соединений. После этого была оценена биологическая активность идентифицированных молекул in vivo на модели рыбок данио (Adams et al., 2011; Такаки и др., 2012).

В последние годы хинолоны (Kumar et al., 2009) широко используются в клинической терапии благодаря их высокой эффективности и антибактериальной активности широкого спектра действия (Grossman et al., 2014; Peraman et al., 2016; Correia et al. ., 2017; Самикша и др., 2019). Терапевтическая схема с использованием моксифлоксацина, производного фторхинолона, была разработана для лечения пациентов с МЛУ- и ШЛУ-ТБ (Huynh and Marais, 2019; Nunn et al., 2019). Однако механизм действия и детали взаимодействий между лекарством и Mtb остаются неясными.

В этом исследовании мы проверили библиотеку из более чем 4000 малых молекул, включая натуральные продукты, одобренные FDA лекарства и пептиды, на наличие соединений, проявляющих активность против Mtb . Было обнаружено, что орбифлоксацин, третье поколение фторхинолонов, проявляет мощную активность против Mtb , как in vitro , так и in vivo , путем нацеливания на субъединицу A ДНК-гиразы (GyrA). Кроме того, мы определили мутации GyrA D94G и молекулярные механизмы, лежащие в основе устойчивости к орбифлоксацину.

Материалы и методы

Заявления об этике

Это исследование было проведено в соответствии со стандартами, установленными Управлением по уходу за животными и их использованию для исследований и Министерством здравоохранения Китая. Животные содержались в среде, свободной от специфических патогенов, в центре лабораторных животных Хуачжунского сельскохозяйственного университета. Все эксперименты были одобрены Комитетом по этике экспериментов на животных Колледжа ветеринарной медицины Хуачжунского сельскохозяйственного университета (HZAUMO-2019-038).

Бактериальный штамм и условия культивирования

Mtb h47Ra, используемый в этом исследовании, был получен из Американской коллекции типовых культур (ATCC25177) и выдержан в бульоне Difco Middlebrook 7H9 (Becton Dickinson), дополненном 0,5% глицерина, 0,05% Tween 80 и 10% альбумина на основе олеиновой кислоты. декстрозокаталаза (OADC, BD, США) при 37°С. Для бактериального посева и инфекции все эксперименты проводились в лаборатории уровня биобезопасности 2 в соответствии с соответствующими стандартными операционными процедурами биобезопасности.

Библиотека лекарств

В общей сложности 4476 соединений из библиотеки натуральных продуктов, клинической библиотеки NIH, одобренной FDA библиотеки, библиотеки коллекции спектров, библиотеки CYX, библиотеки LXD и библиотек пептидов были приобретены в Шанхайском институте Materia Medica Китайской академии наук и Куньмин. Аликвоты соединений вносили в 96-луночные микропланшеты при исходной концентрации 10 мМ. Для скрининга лекарственных средств эти соединения разбавляли в 10 раз фосфатно-солевым буфером (PBS) для оценки их биологической активности и безопасности.

Микропланшет для анализа Alamar Blue

Mycobacterium tuberculosis h47Ra культивировали до средней логарифмической фазы с оптической плотностью (OD) 0,6 (~5 × 10 7 колониеобразующих единиц [КОЕ]/мл) при 600 нм. В каждую лунку 96-луночного микропланшета добавляли по сто микролитров (5×10 4 КОЕ) бактериальной суспензии. Затем в каждую лунку добавляли 10 мкМ соединения. В качестве отрицательного контроля использовали ДМСО, а в качестве положительного контроля использовали рифампицин (RIF).Планшеты запечатывали и инкубировали при 37°С в течение 6 дней. Затем в каждую лунку добавляли 10% (об./об.) раствор Alamar Blue. Эффект каждого соединения против Mtb определяли на основании изменения цвета. Соединение считалось неактивным в отношении Mtb , если цвет менялся с синего на красный.

Определение минимальной ингибирующей концентрации отдельных соединений

Для анализа минимальной ингибирующей концентрации (МИК) 100 мкл бактериальной суспензии готовили, как указано выше, и добавляли в лунки 96-луночного планшета.В указанную лунку добавляли 10 мкл двукратных серийных разведений исследуемых препаратов (от 0,012 до 12,8 мкг/мл) и пептидов (от 1 до 512 мкг/мл). Бактериальный рост оценивали визуально после культивирования в течение 1 недели.

Тест в шахматном порядке противомикробных комбинаций орбифлоксацина

Методы шахматной доски с Mtb h47Ra использовались для оценки синергической активности орбифлоксацина в комбинации с противотуберкулезными препаратами первого ряда, как описано в предыдущих исследованиях (Bonapace et al., 2002; Бхусал и др., 2005). Активность орбифлоксацина тестировали в комбинации с РИФ, изониазидом, стрептомицином, канамицином, этамбутолом и этионамидом. Всего 100 мкл бактериальной суспензии добавляли в 96-луночные микропланшеты, как описано ранее. В каждый ряд добавляли серийные двукратные разведения орбифлоксацина в диапазоне от 1/8-кратной МИК до четырехкратной МИК, а в каждую колонку добавляли другие препараты, разведенные от 1/8-кратной МИК до четырехкратной МИК. Каждая комбинация тестировалась в трех экземплярах на биологическую статистику.Планшеты инкубировали при 37°С в течение 7 дней и визуально оценивали рост бактерий. Индекс фракционной ингибирующей концентрации (FIC) для каждой комбинации препаратов рассчитывали следующим образом:

FICindex(FICI)=комбинация MICA/A+

Комбинация MICB/B

Комбинация MIC представляет собой концентрацию одного лекарственного средства в смеси, которая может ингибировать рост бактерий. A или B – это МИК препарата при его применении отдельно. Значения индекса FIC интерпретировали следующим образом: индекс FIC ≤ 0.5, синергетический эффект; 0,5 < индекс FIC < 1, аддитивный эффект; 1 < индекс FIC < 2, индифферентный эффект; и индекс FIC ≥ 2, антагонистический эффект.

Культура клеточной линии и цитотоксические анализы

Клетки

RAW264.7 (ATCC, TIB-71) поддерживали в модифицированной по Дульбекко среде Игла с высоким содержанием глюкозы (DMEM, Gibco), а клетки THP-1 культивировали в среде RPMI-1640 с добавлением 10% эмбриональной бычьей сыворотки (FBS, Gibco), 50 единиц/мл пенициллина и 50 мкг/мл стрептомицина (Gibco) при 37°C в инкубаторе с 5% CO 2 .Для анализа цитотоксичности 5 × 10 3 клеток RAW264.7 или THP-1 высевали в 96-луночные микропланшеты и инкубировали в течение ночи. Клетки обрабатывали различными препаратами или пептидами в диапазоне концентраций (от 0 до 64 мкг/мл) в течение 48 ч, а также применяли для определения значения 50% эффективной цитотоксической концентрации (CC 50 ). Затем добавляли 10 мкл раствора реагента набора MTS. В качестве отрицательного контроля использовали ДМСО. Через 4 часа инкубации жизнеспособность клеток и цитотоксичность измеряли с помощью CellTiter 96 AQ ueous One Solution Cell Proliferation Assay (MTS, Promega, Cat# G3580), а поглощение регистрировали при 490 нм с помощью 96-луночного анализатора. считыватель микропланшетов.Все эксперименты с клетками проводили с использованием не более четырех поколений субкультур после оттаивания клеточных запасов. Тест на отсутствие микоплазмы проводили с использованием детектора микоплазмы myco-blue (D101-02, Vazyme, Нанкин, Китай).

Тестирование на чувствительность к лекарственным средствам против внутриклеточного

Mtb

Для исследований антимикробной активности in vitro , 2 × 10 5 клеток RAW264.7 высевали в 12-луночные планшеты в течение ночи и инфицировали h47Ra с множественностью инфицирования 5 в течение 4 ч при 37°C при 5% CO 2 атмосфера.Клетки трижды промывали стерильным PBS для остановки инфекции. В каждую лунку наносили свежую среду DMEM с добавлением 10% FBS, содержащую орбифлоксацин (4 мкг/мл), пептид (12,8 мкг/мл) и комбинацию орбифлоксацина и пептида. Канамицин использовали в качестве положительного контроля против внеклеточного Mtb . После инкубации в течение 48 часов клетки промывали PBS и лизировали стерильным 0,1% Tween 80. Клеточные лизаты разводили и высевали на агаровые чашки 7h21. КОЕ подсчитывали через 3–4 недели инкубации.

Полногеномное секвенирование лекарственно-устойчивых мутантов

Лекарственная устойчивость индуцировалась у Mtb h47Ra путем совместного культивирования с орбифлоксацином в концентрации от 1/4 до 10-кратной МИК в течение трех поколений до тех пор, пока в последнем поколении не наблюдался видимый рост Mtb в присутствии 10-кратной МИК. орбифлоксацина. Мутанты, устойчивые к лекарственным средствам, выделяли из одной колонии и выращивали на чашках с агаром 7:21, содержащих 10-кратную МИК концентрацию орбифлоксацина. Геномную ДНК экстрагировали методом цетилтриметиламмония бромид–фенолхлороформ.Вкратце, бактериальные осадки повторно суспендировали в буфере для лизиса GTE (50 мМ глюкозы, 25 мМ Трис, 10 мМ ЭДТА, pH 8,0), содержащем лизоцим в конечной концентрации 100 мкг/мл, и инкубировали при 37°C в течение ночи. Добавляли РНКазу А (10 мкг/мл), 2% раствор ДСН и протеазу К (10 мкг/мл), смесь инкубировали при 56°С в течение 2 ч. Затем для выделения и очистки геномной ДНК использовали хлороформ-изопентанол и 75% этанол. Выделенную ДНК количественно определяли на спектрофотометре Nanodrop 2000 (Thermo Fisher, США).ДНК (2 мкг) фрагментировали ультразвуком и очищали с помощью набора для гель-экстракции (кат. № D2500-02, OMEGA Bio-tek, США). Фрагментированную ДНК репарировали с использованием модуля Hieff NGS Fast-Pace End Repair/dA-Tailing (кат. № 12608, YEASEN, Соединенное Королевство) и лигировали с помощью Y-адаптера. Библиотеки ДНК с парными концами были сконструированы с использованием 14-цикловой ПЦР-амплификации для секвенирования Illumina следующего поколения (платформа Hiseq 2000). Качество библиотеки ДНК измеряли с помощью флуорометра Qubit 4 (Invitrogen), и библиотеку ДНК отправляли в Annoroad Gene Technology Company (Пекин) для высокопроизводительного секвенирования ДНК.

Определение структуры комплекса лиганд-рецептор методом молекулярного докинга

Структуру орбифлоксацина в виде комплекса с Mtb GyrA определяли с помощью программы Discovery Studio 2018 на основании свойств взаимодействия рецептор–лиганд. Рентгеновская кристаллическая структура Mtb GyrA (код PDB: 5BS8) была получена из банка данных белков RCSB. Трехмерная структура орбифлоксацина (идентификатор PubChem: 60605) была загружена из открытой базы данных по химии PubChem.Аминокислотный остаток Asp94 белка дикого типа был заменен на Gly94 для создания мутантной кристаллической структуры GyrA с использованием модуля программного обеспечения Build and Edit Protein. Модель связывания лекарственного средства с белком была предсказана с использованием док-модуля CDOCKER на основе свойств взаимодействия рецептор-лиганд. Молекулы воды в исходной кристаллической структуре были удалены до молекулярного докинга. Было обнаружено, что сайт связывания белка и орбифлоксацина представляет собой полость активного центра GyrA, которая состоит из A:Ala90, A:Asp94/Gly94, B:Gly459, B:Arg482, B:Thr500; B:Glu501, C:Arg128 и C:Ptr129.Использовались настройки CDOCKER по умолчанию. Результаты докинга анализировали и визуализировали с помощью модуля «Просмотр взаимодействий» в свойствах взаимодействия рецептор-лиганд.

Клонирование точечного мутанта и гена дикого типа

gyrA (Rv0006) Праймеры

были разработаны на основе последовательностей, полученных из Национального центра биотехнологической информации (NCBI). Полноразмерный ген gyrA (Rv0006), амплифицированный из штамма, устойчивого к орбифлоксацину, и штамма дикого типа, встраивали в плазмиду pMV261-GroEL для получения pMV261-GroEL-Mutant gyrA и pMV261-GroEL- WT gyrA соответственно.Рекомбинантные плазмиды электропорировали в компетентные клетки Mtb h47Ra с использованием электроимпульсной машины в течение 20 мс при рабочей программе 2,5 кВ, 1000 Ом и 25 мкФ, а затем высевали на чашки с агаром Миддлбрук 7h21, содержащие канамицин (100 мкг/мл). мл) или орбифлоксацин (пятикратная МИК, 1 мкг/мл). Отдельные колонии выращивали для определения МИК через 4 недели культивирования, содержащего выбранный антибиотик.

Эксперименты на животных

мыши C57BL/6 (самки мышей в возрасте 6–8 недель, 20 ± 2 г) были приобретены у Пекинской лаборатории животных Vital River Technology и выращены в особых условиях, свободных от патогенов, в Центре лабораторных животных Хуажонгского сельскохозяйственного университета.Все животные были случайным образом разделены на три группы по 6–8 мышей в каждой. Мышей заражали внутривенно 0,2 мл суспензии Mtb h47Ra в дозе 5×10 6 КОЕ/мл в течение 4 дней. Затем инфицированным мышам перорально вводили орбифлоксацин в дозе 50 мг/кг в сутки. Изониазид использовали в качестве положительного контроля в дозе 12,5 мг/кг, а PBS использовали в качестве отрицательного контроля. Препараты вводили мышам в течение 7 дней после заражения. Мышей подвергали эвтаназии через 18 дней после заражения.Легкие использовали для гистопатологического анализа и анализа КОЕ. Часть левого легкого фиксировали в 4% параформальдегиде на 48 ч, ткани заливали в парафин для приготовления срезов для окрашивания гематоксилином и эозином. Гомогенаты легких высевали на агар Middlebrook 7h21, содержащий обогащение OADC и антибиотики BBL MGIT PENTA (кат. № 245114, BD, США), для подсчета бактериальной нагрузки. КОЕ подсчитывали через 3–4 недели инкубации при 37°С.

Анализ цитокинов

РНК экстрагировали из легких мышей методом хлороформ-изопропанол.РНК подвергали обратной транскрипции с использованием ReverTra Ace qPCR RT Master Mix с набором для удаления gDNA (код № FSQ-301, TOYOBO, Япония) в соответствии с инструкциями производителя. SYBR Select Master Mix (Cat# 4472919, Thermo Fisher, США) применяли для определения мышиного фактора некроза опухоли α (TNF-α), интерлейкина (IL) 4, IL-1β, IL-6, IL-10, и интерферон-β (IFN-β), а в качестве гена домашнего хозяйства использовали глицеральдегид-3-фосфатдегидрогеназу (GAPDH). ПЦР в реальном времени проводили на системе ПЦР в реальном времени QuantStudio 6 (ABI, США), и экспрессию изменения кратности рассчитывали с использованием метода 2 -ΔΔ C t , нормализованного к GAPDH (Emily et al., 2021).

Доступность данных

Необработанные данные полногеномной последовательности были отправлены в архив чтения последовательностей (SRA) на веб-сайте NCBI (номер доступа BioProject: PRJNA661429).

Статистический анализ

Численные данные трех независимых экспериментов были проанализированы с использованием GraphPad Prism 6.0 (La Jolla, CA, United States) и представлены как среднее ± стандартное отклонение или стандартная ошибка среднего. Достоверность различий между группами оценивали с помощью однофакторного дисперсионного анализа или критерия Стьюдента t .Статистические различия считали достоверными при p < 0,05; p значения <0,05, <0,01, <0,001 и <0,0001 обозначаются как , ∗∗ , ∗∗∗ , и **** , 91

Результаты

Проверка библиотеки малых молекул на соответствие

Mtb

Библиотека соединений, включающая 502 небольшие молекулы природного происхождения и их производные, 299 и 269 биоактивных соединений, выделенных из рецептов традиционной китайской медицины, семь малых пептидов и 640 одобренных FDA препаратов, была проверена на их противотуберкулезную активность на основе их влияние на рост Mtb in vitro (рис. 1А, В).Крупномасштабный скрининг соединений в микропланшетах (дополнительная фигура 1А) показал, что антибиотики, включая орбифлоксацин, прулифлоксацин, надифлоксацин, дисульфирам и митрамицин, а также противомикробные пептиды, включая AK15, AK15-7COOH, LZ1 и ZY4, проявляли значительные анти- Mtb. активность (рис. 1C). Было обнаружено, что среди протестированных соединений фторхинолоны (орбифлоксацин, прулифлоксацин и надифлоксацин) и митрамицин проявляют наилучшую противотуберкулезную активность, показывая МИК, равный 0.2–0,4 мкг/мл. Пептид AK15 также проявлял благоприятную активность в отношении Mtb с МИК 128 мкг/мл, а оставшийся пептид (AK15-7COOH, LZ1 и ZY4) проявлял активность в отношении Mtb с МИК 256 мкг/мл (рис. 1D). ). Эти данные показали, что лекарства и пептиды могут обладать потенциальной противомикробной активностью в отношении Mtb . Структуры двух биоактивных пептидов, AK15 и 15AK-7COOH, показаны на дополнительной фигуре 1B. Химические структуры малых молекул были получены из базы данных PubChem (см. сноску 2 к тексту) и показаны на рисунке 1E.

Рисунок 1. Скрининг in vitro библиотек лекарственных препаратов против Mycobacterium tuberculosis h47Ra. (A) Распределение каждой группы соединений в библиотеках лекарств. (B) Процедура скрининга лекарств: определенную концентрацию каждого соединения из библиотек инокулировали суспензией Mtb в 96-луночные микропланшеты в течение 7 дней, и антибактериальные эффекты определяли с помощью анализа Alamar Blue. (C) Графическое изображение антибактериального действия выбранных соединений. (D) Определение МИК выбранных соединений и пептидов, как описано в таблице. В качестве положительного контроля использовали рифампицин (RIF). Эти результаты представлены как среднее значение ± стандартное отклонение для трех повторностей. Для анализа использовали двусторонний непарный критерий Стьюдента t -критерий: Н.Д., не выявляется; * р < 0,05; ** р < 0,01; *** р < 0,001; **** р < 0.0001. (E) Химическая структура орбифлоксацина, прулифлоксацина, надифлоксацина и митрамицина.

Внутриклеточный бактерицидный эффект орбифлоксацина

Цитотоксичность выбранных антибиотиков (орбифлоксацин, прулифлоксацин, надифлоксацин и митрамицин) и пептидов (AK15, AK15-7COOH, LZ1 и ZY4) тестировали методом MTS. Снижение OD 490 нм указывало на цитотоксичность по отношению к клетке RAW264.7. Мы обнаружили, что орбифлоксацин и прулифлоксацин не были цитотоксичны при концентрации 8 мкг/мл, тогда как надифлоксацин и митрамицин были цитотоксичны при концентрации 16 мкг/мл по отношению к RAW264.7 (рис. 2А), но показал отчетливую цитотоксичность по отношению к клеткам THP-1 даже при низких концентрациях (дополнительная фигура 2А). Орбифлоксацин также показал очень высокую безопасную цитотоксическую концентрацию для клеток Raw264.7 с 115,42 мкМ (МИК = 0,51 мкМ) (дополнительная фигура 3). Пептиды AK15, AK15-7COOH и ZY4 не проявляли цитотоксичности до 64 мкг/мл; максимальная безопасная концентрация LZ1 составила 16 мкг/мл (рис. 2В).

Рисунок 2. Обнаружение цитотоксичности и внутриклеточная активность отдельных препаратов против Mycobacterium tuberculosis . (A,B) Анализ клеточной пролиферации использовали для определения токсичности орбифлоксацина, прулифлоксацина, надифлоксацина, митрамицина и пептидов на макрофагах RAW264.7. (C) Процедура внутриклеточного теста на чувствительность к лекарственным средствам в клетках RAW264.7 и подсчет КОЕ Mtb в мышиных макрофагах, обработанных отдельными лекарственными средствами в течение 48 часов после инфицирования. (D) Комбинированные эффекты орбифлоксацина с пептидами против Mtb in vitro . (E) Комбинированные эффекты прулифлоксацина с пептидами против Mtb in vitro .Эти эксперименты были выполнены в двух повторностях и проанализированы с использованием теста множественных сравнений в GraphPad Prism: ns, незначительно; ** р < 0,01; **** p <0,0001 (среднее значение ± стандартное отклонение из трех повторов).

Затем мы исследовали влияние этих препаратов на клиренс внутриклеточного Mtb в макрофагах с помощью анализа КОЕ (рис. 2С). Мы обнаружили, что количество КОЕ в клетках, обработанных орбифлоксацином, было значительно ниже, чем в контроле, обработанном ДМСО.Примечательно, что не было никаких существенных различий между КОЕ, наблюдаемыми в группе орбифлоксацина по сравнению с группой изониазида. Значительная разница наблюдалась между группами орбифлоксацина и канамицина (контроль внеклеточного ингибирования Mtb ). Комбинация орбифлоксацина с изониазидом приводила к значительному снижению числа КОЕ по сравнению с лечением одним из этих препаратов (рис. 2D). Пептиды AK15, AK15-7COOH, LZ1 и ZY4 не влияли на клиренс внутриклеточного Mtb , несмотря на их эффективность in vitro (фиг. 2C).Интересно, что комбинация этих пептидов с орбифлоксацином значительно усиливала действие орбифлоксацина на выведение внутриклеточного Mtb (рис. 2D). Однако подобного эффекта не наблюдалось при их использовании в комбинации с прулифлоксацином (рис. 2Д). Кроме того, мы оценили активность орбифлоксацина в сочетании с антибиотиками первой линии (рифампицин, изониазид и этамбутол) и обнаружили, что комбинация этих препаратов обладает в четыре раза более мощной бактерицидной активностью, чем любое из лекарств по отдельности (дополнительная фигура 2B).

In vivo Активность орбифлоксацина

Для дальнейшего подтверждения анти- Mtb эффекта орбифлоксацина in vivo мы инфицировали мышей C57BL/6 Mtb h47Ra и вводили препараты через 4 дня после заражения, в общей сложности 7 дней. Затем мышей умерщвляли на 18-й день после заражения для гистопатологического и бактериального анализа (рис. 3А). Мыши в группах орбифлоксацина и INH (изониазид использовался в качестве положительного контроля препарата) продемонстрировали небольшую потерю веса (рис. 3B) со значительным снижением количества КОЕ по сравнению с контрольной группой PBS.Не было существенной разницы между группами, получавшими орбифлоксацин и изониазид (рис. 3В). Гистопатологическое исследование тканей легких показало, что у мышей, получавших PBS, наблюдалась умеренно более высокая инфильтрация воспалительными клетками, такими как макрофаги и лимфоциты, по сравнению с мышами, получавшими препараты (рис. 3C). У мышей, получавших PBS, в легких наблюдали утолщение альвеолярной стенки, сужение альвеолярного пространства и накопление некоторого количества эритроцитов в полости. Напротив, поражения были намного мягче, и в альвеолярной полости мышей, получавших орбифлоксацин, присутствовало меньше макрофагов (рис. 3С).Мы также проанализировали уровни экспрессии цитокинов в легких мышей. Экспрессия IL-6 и IL-1β была значительно ниже в группе, получавшей орбифлоксацин, чем в группе, получавшей PBS (рис. 3F, H). Не было никаких существенных различий в экспрессии TNF-α ни в одной из групп (рис. 3D). Экспрессия IL-4, репрезентативного цитокина ответа Th3, показала небольшое снижение у мышей, получавших орбифлоксацин (фиг. 3E). Экспрессия IL-10 и IFN-β была значительно выше в группе, получавшей орбифлоксацин, чем в группах, получавших INH или PBS (рис. 3G, I), что свидетельствует о том, что орбифлоксацин может защищать мышей от сильного воспалительного ответа.В целом, наши результаты показывают, что орбифлоксацин проявляет сильную активность in vivo против Mtb и может рассматриваться как потенциальное лекарство для лечения туберкулеза.

Рисунок 3. Эффекты орбифлоксацина in vivo против Mycobacterium tuberculosis в модели на мышах. (A) Схематическое представление процедуры анализа in vivo на мышах C57BL/6 ( n = 7 или 8 в каждой группе). (B) Наблюдали изменения массы тела и определяли бактериальную нагрузку в легких инфицированных мышей путем посева лизата органов на чашки 7 ч 21 мин после обработки орбифлоксацином или PBS в течение 7 дней.Данные представлены как среднее значение ± стандартное отклонение. (C) Окрашивание гематоксилином и эозином срезов легких репрезентативных мышей, инфицированных Mtb-, из группы, получавшей лекарство, и контрольной группы. (D–I) Экспрессию различных генов цитокинов определяли с помощью количественной ПЦР в гомогенатах целых легких мышей из группы, получавшей лекарство, и контрольной группы. нс, не значимо; * р < 0,05; ** р < 0,01; *** р < 0,001; **** р < 0.0001.

Мутация

GyrA D94G связана с устойчивостью к орбифлоксацину у

Mtb

Чтобы понять причину устойчивости к орбифлоксацину у Mtb , мы индуцировали образование устойчивости к орбифлоксацину в штамме Mtb и подтвердили устойчивость с помощью анализа МИК (рис. 4А). Поскольку комбинированная терапия с использованием орбифлоксацина и изониазида усиливает бактерицидное действие, мы стремились обнаружить любую потенциальную перекрестную устойчивость к изониазиду путем культивирования устойчивых к орбифлоксацину штаммов Mtb в присутствии изониазида.Эти мутировавшие штаммы не проявляли устойчивости к INH (фиг. 4B). Затем пять колоний устойчивого к орбифлоксацину штамма Mtb подвергли полногеномному секвенированию, и было обнаружено 17 однонуклеотидных точечных мутаций по сравнению со штаммом дикого типа ATCC25177 (рис. 4C, круговая карта). Примечательно, что мутации gyrA наблюдались во всех пяти устойчивых штаммах. Таким образом, мы предположили, что ген gyrA может быть ключом к пониманию устойчивости к орбифлоксацину на Mtb .Поэтому мы проанализировали последовательность гена gyr A и обнаружили единственную точечную мутацию на 94-м аминокислотном остатке, где аспарагиновая кислота была заменена глицином (GyrA D94G) (рис. 4D).

Рисунок 4. Анализ полногеномного секвенирования штамма, устойчивого к орбифлоксацину. (A) Дикий тип Mtb h47Ra обрабатывали орбифлоксацином в концентрациях от 1/4-кратной МИК до 10-кратной МИК для индуцирования лекарственной устойчивости. (B) Приобретенная устойчивость мутантного штамма к орбифлоксацину была подтверждена путем сравнения его роста на среде 7H9, дополненной 10-кратной МИК орбифлоксацина, с ростом штамма дикого типа. (C) На графике Circos представлена ​​полногеномная последовательность штамма дикого типа и пяти штаммов, устойчивых к орбифлоксацину. (D) Точечная мутация GAC в GGC в гене Rv0006 ( gyrA ) показана как подтвержденная секвенированием по Сэнгеру. (E) Сверхэкспрессия гена gyrA дикого типа и мутантного гена gyrA в Mtb дикого типа и рост бактерий в присутствии 1 мкг/мл орбифлоксацина. В качестве контролей использовали pMV261-пусто и pMV261-WT gyrA . (F) MIC орбифлоксацина в штамме Mtb , экспрессирующем мутант gyrA [получено из чашек на панели (D) ].

Чтобы подтвердить, ответственна ли эта точечная мутация за устойчивость к орбифлоксацину, мы ввели точечную мутацию D94 в G94 в гене gyrA в Mtb дикого типа, как указано выше. Мы обнаружили, что мутантный штамм Mtb может расти на чашке с агаром Middlebrook 7h21 с добавлением пятикратной МИК концентрации орбифлоксацина (1 мкг/мл), тогда как штамм Mtb , трансфицированный плазмидным контролем или диким типом gyrA ген не мог (рис. 4E).Для дальнейшего подтверждения устойчивости мы вырастили одну колонию Mtb , содержащую мутацию gyrA , в 96-луночном планшете в присутствии орбифлоксацина и обнаружили, что МИК увеличилась с 0,2 до 3,2 мкг/мл, что показало более сильная резистентность к орбифлоксацину (рис. 4F). Эти данные позволяют предположить, что ген gyrA Mtb является мишенью для орбифлоксацина и что мутация gyrA D94G может быть ответственна за устойчивость к орбифлоксацину.

Анализ взаимодействия лиганд-рецептор с помощью структурного докинга

Чтобы изучить молекулярный механизм действия орбифлоксацина через его действие на gyrA , мы сначала смоделировали кристаллическую структуру мутантной субъединицы гиразы A, используя Discovery Studio 2018 (рис. 5B), на основе структуры дикого типа. Гираза Mtb (рис. 5А). Впоследствии модели связывания орбифлоксацина с гиразой дикого типа и мутантной гиразой были смоделированы с использованием модуля стыковки CDOCKER на основе свойств взаимодействия рецептор-лиганд.Было замечено, что орбифлоксацин занимает активный центр белка GyrA дикого типа (рис. 5C). Было обнаружено, что связывание орбифлоксацина контролируется остатками Asp94, Arg128, Ptr129, Gly483, Glu459 и Asp532 в сайте связывания (фиг. 5D). Ptr129 и Glu459 играли важную роль в этом связывании, образуя водородные связи с орбифлоксацином. Программное обеспечение также предсказало благоприятное π-катионное взаимодействие между бензольным кольцом орбифлоксацина и нитридом водорода основной цепи Arg128. Кроме того, один ион магния в активном центре связывает гидроксильный кислород Asp94 с четвертым и шестым атомами кислорода орбифлоксацина.Однако из-за различий между боковыми цепями Asp и Gly (рис. 5E, F) соответствующее благоприятное взаимодействие было нарушено в мутантном белке GyrA, детали которого изображены на рисунках 5G, H. Наши данные предполагают, что D94G нарушает связывание орбифлоксацина с белком GyrA, что может объяснить механизм устойчивости к орбифлоксацину у Mtb .

Рисунок 5. Структурный анализ комплекса GyrA-орбифлоксацин и сравнение связывания орбифлоксацина с GyrA дикого типа и GyrA D94G. (A,B) Общая структура дикого типа (A) и реконструированного мутантного белка gyrA (B) . gyrA D94G был создан путем замены 94-го аминокислотного остатка, Asp, на Gly в GyrA дикого типа. (C) Мультипликационное изображение комплекса GyrA дикого типа с орбифлоксацином. Связывание орбифлоксацина в основном контролируется остатками в полости активного центра GyrA дикого типа. (D) Подробное описание взаимодействий и ключевых контактных площадок комплекса.Остатки, взаимодействующие с орбифлоксацином, отмечены. (E,F) Аминокислотные изменения в GyrA D94G по сравнению с GyrA дикого типа. Боковые цепи 94-го аминокислотного остатка в GyrA дикого типа и GyrA D94G помечены. (G,H) Сравнение связывающих взаимодействий между GyrA дикого типа и орбифлоксацином и GyrA D94G и орбифлоксацином. Взаимодействие ионного мостика магния между гидроксильным кислородом Asp94 в gyrA с четвертым и шестым кислородом орбифлоксацина. Это взаимодействие в gyrA дикого типа нарушается мутацией D94G.

Обсуждение

Туберкулез — это белая чума, которая ежегодно уносит жизни миллионов людей. На протяжении десятилетий было разработано несколько препаратов, которые применялись в клинической практике для лечения туберкулеза (Yuan and Sampson, 2018). Для эффективного лечения инфекции обычными препаратами требуется более полугода; однако многие пациенты не могут завершить курс лечения из-за его серьезных побочных эффектов. Кроме того, длительное применение этих антибиотиков привело к возникновению лекарственной устойчивости, что представляет огромную угрозу для жизни человека.Инфекции MDR и XDR Mtb были зарегистрированы во всем мире (Seung et al., 2015; Sander et al., 2020). В этом исследовании мы обнаружили, что орбифлоксацин обладал высокой биоактивностью против Mtb in vitro с низкой МИК 0,2 мкг/мл и защищал мышей от инфекции in vivo . Интересно, что применение орбифлоксацина в сочетании с изониазидом и рифампицином показало более сильную бактерицидную активность против Mtb in vitro . Такая комбинированная терапия не только снижает необходимую дозу и кратность введения препарата, но и сокращает продолжительность лечения, что снижает побочные эффекты и риск развития лекарственной устойчивости.Таким образом, комбинированная терапия с участием орбифлоксацина может быть дополнительно оценена как новый режим лечения ТБ.

Антибиотики без перекрестной устойчивости, а также комбинированная терапия оценивались в клинических испытаниях для лечения пациентов с ТБ, устойчивым к изониазиду (Hu et al., 2017; Tweed et al., 2019). В текущем исследовании мы обнаружили, что мутация 94-й аминокислоты белка GyrA, вероятно, отвечает за устойчивость к орбифлоксацину, не влияя на восприимчивость к INH из-за другой мишени механизма действия, такой как ген katG или inhA. (Араш и др., 2019; Фленти и др., 2019). Хотя мутации в гене gyrA были связаны с устойчивостью к фторхинолонам Mtb , таким как моксифлоксацин (Aldred et al., 2016; Blower et al., 2016; Petrella et al., 2019), подробный механизм Mtb резистентность к орбифлоксацину не выяснена. При низкой частоте излечения и высокой частоте рецидивов лекарственно-устойчивого ТБ открытие мишеней для орбифлоксацина и выяснение механизмов устойчивости к орбифлоксацину облегчают эффективную терапию ТБ без перекрестной лекарственной устойчивости и могут стать хорошей основой для рационального дизайна лечения лекарственно-устойчивый ТБ.Данные вычислительных исследований на рисунке 5 демонстрируют взаимодействие Mtb с орбифлоксацином через магниевый мостик от Asp94 в активном центре. Было также предсказано, что это взаимодействие является механизмом, лежащим в основе устойчивости к фторхинолонам (Yu et al., 2017; Rhastin et al., 2020). Понимание этого механизма обеспечивает многообещающую стратегию для изучения и разработки синтетических лекарств с использованием орбифлоксацина и его производных для решения проблем лекарственной устойчивости.

В этом исследовании мы провели скрининг библиотеки малых молекул и пептидов и определили орбифлоксацин как потенциальное лекарство-кандидат для лечения туберкулеза. Перекрестной резистентности между изониазидом и орбифлоксацином не наблюдалось из-за разных мишеней; этот препарат может быть полезен для лечения или комбинированной терапии туберкулеза, устойчивого к изониазиду. Более того, используя модель фермента орбифлоксацин-GyrA, мы обнаружили, что одна мутация в gyrA (субъединица A гиразы D94G) способна уменьшать взаимодействие орбифлоксацина с белком GyrA.Эти данные могут способствовать разработке производных орбифлоксацина, которые могут связываться с этим мутантным сайтом с высокой эффективностью против лекарственно-устойчивых Mtb и, таким образом, использоваться для лечения устойчивых к фторхинолонам Mtb . В заключение, наше исследование выявило потенциальное противотуберкулезное лекарство-кандидат и выяснило его механизм действия, что может способствовать рациональной разработке более сильнодействующих противотуберкулезных препаратов и помочь в борьбе с МЛУ- и ШЛУ-ТБ.

Заявление о доступности данных

Наборы данных, представленные в этом исследовании, можно найти в онлайн-репозиториях.Названия репозитория/репозиториев и регистрационные номера можно найти ниже: https://www.ncbi.nlm.nih.gov/, PRJNA661429.

Заявление об этике

Исследование на животных было рассмотрено и одобрено комитетом по этике экспериментов на животных колледжа ветеринарной медицины Хуачжунского сельскохозяйственного университета (HZAUMO-2019-038).

Вклад авторов

WZ, BY, YZ, KR, XC и GC: обработка данных. ZF, XC и GC: привлечение финансирования. WZ и BY: расследование и написание первоначального проекта.WZ, BY и GC: администрирование проекта. РЛ: ресурсы. ЗФ и ГК: авторский надзор. WZ: проверка. YZ, KR, XJC, YL, XC и GC: написание обзора и редактирование. Все авторы внесли свой вклад в статью и одобрили представленную версию.

Финансирование

Эта работа была поддержана Национальной ключевой программой исследований и разработок Китая в рамках гранта № 2017YFD0500303; Национальный фонд естественных наук Китая по грантам №№ 31602061, 31872470 и 31

0; Китайский фонд докторантуры по гранту No.2018M640718; и Фонд естественных наук для молодежи китайской провинции Хубэй в рамках гранта № 2019CFB126.

Конфликт интересов

Авторы заявляют, что исследование проводилось при отсутствии каких-либо коммерческих или финансовых отношений, которые могли бы быть истолкованы как потенциальный конфликт интересов.

Благодарности

Мы хотели бы поблагодарить Государственную ключевую лабораторию сельскохозяйственной микробиологии и Центр лабораторных животных Хуачжунского сельскохозяйственного университета.

Дополнительный материал

Дополнительный материал к этой статье можно найти в Интернете по адресу: https://www.frontiersin.org/articles/10.3389/fmicb.2021.658637/full#supplementary-material

.

Дополнительная таблица 1 | Праймеры, используемые для qRT-PCR.

Сокращения

ТБ, туберкулёз; Mtb , Mycobacterium tuberculosis ; РИФ, рифампицин; INH, изониазид; МЛУ, множественная лекарственная устойчивость; XDR, с широкой лекарственной устойчивостью; gyrA , субъединица А ДНК-гиразы; МИК, минимальная ингибирующая концентрация; КОЕ, колониеобразующая единица; PBS, фосфатно-солевой буфер; FIC, фракционная ингибирующая концентрация.

Сноски

Каталожные номера

Адамс К.Н., Такаки К., Коннолли Л.Е., Виденхофт Х., Уингли К., Гумберт О. и др. (2011). Толерантность к лекарствам у размножающихся микобактерий, опосредованная макрофагально-индуцированным механизмом оттока. Моб. 145, 39–53. doi: 10.1016/j.cell.2011.02.022

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Аггарвал, А., Параи, М.К., Шетти, Н., Уоллис, Д., Вулхайзер, Л., Hastings, C., et al. (2017). Разработка нового электрода, нацеленного на поликетидсинтазу M. tuberculosis 13. Cell 170, 249–259. doi: 10.1016/j.cell.2017.06.025

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Акос С., Вера Б., Рико Х., Гвидо В. Б. и Эрик С. Б. (2015). Мутация, связанная с перекрестной устойчивостью к клофазимину и бедаквилину при МЛУ-ТБ после лечения бедаквилином. евро. Дыхание Дж. 45, 554–557. дои: 10.1183/0

2. дои: 10.1183/13993003.02502-2019

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Фленти, К., Харрисон, Г.А., Тюкенмез, Х., Ливни, Дж., Гуд, Дж. А. Д., Саркар, С., и соавт. (2019). Химическое обезвреживание устойчивости к изониазиду у Mycobacterium tuberculosis . Проц. Натл. акад. науч. США 116, 10510–10517. doi: 10.1073/pnas.1818009116

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Фуад, М., Керри, В., Нгуен, Н.Л., Лисе, Г.А., Медея, Г., Эрнесто, Дж., и др. (2020). Рекомендации Всемирной организации здравоохранения по лечению лекарственно-устойчивого туберкулеза, обновление 2020 г. евро. Дыхание J. doi: 10.1183/13993003.03300-2020 [Epub перед печатью].

Полнотекстовая перекрестная ссылка | PubMed Резюме | Академия Google

Гроссман, Р. Ф., Сюэ, П. Р., Гиллеспи, С. Х., и Блази, Ф. (2014). Внебольничная пневмония и туберкулез: дифференциальная диагностика и применение фторхинолонов. Междунар. Дж. Заразить. Дис. 18, 14–21. doi: 10.1016/j.ijid.2013.09.013

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Гусман, Дж.Д., Гупта А., Букар Ф., Гиббонс С. и Бхакта С. (2012). Антимикобактерии из природных источников: древние времена, эра антибиотиков и новые каркасы. Фронт. Бионауч. 17:1861–1881. дои: 10.2741/4024

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Hu, Y.Q., Zhang, S., Zhao, F., Gao, C., Feng, L.S., Lv, Z.S., et al. (2017). Производные изониазида и их противотуберкулезная активность. евро. Дж. Мед. хим. 133, 255–267. doi: 10.1016/j.ejmech.2017.04.002

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Huynh, J., и Marais, BJ (2019). Инфекция и заболевание туберкулезом с множественной лекарственной устойчивостью у детей: обзор новых и перепрофилированных препаратов. Тер. Доп. Заразить. Дис. 6, 1–16. дои: 10.1177/2049936119864737

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Игараси М., Ишизаки Ю. и Такахаши Ю. (2018). Новые противотуберкулезные препараты на основе натуральных продуктов: современные перспективы и проблемы разработки противотуберкулезных препаратов. Дж. Антибиот. 71, 15–25. doi: 10.1038/ja.2017.126

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Янсен, Р. С., и Ри, К. Ю. (2017). Новые подходы к разработке противотуберкулезных препаратов: дома в метаболоме. Trends Pharmacol. науч. 38, 393–405. doi: 10.1016/j.tips.2017.01.005

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Коул, А., Арно, Э., Лунис, Н., Гийемон, Дж., и Андрис, К. (2011).Проблема открытия новых лекарств от туберкулеза. Природа 469, 483–490. doi: 10.1038/nature09657

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Луо, X., Чжоу, X., Линь, X., Цинь, X., Чжан, Т., Ван, Дж., и др. (2017). Противотуберкулезные соединения глубоководного гриба Aspergillus sp. SCSIO Ind09F01. Нац. Произв. Рез. 31, 1958–1962 гг. дои: 10.1080/14786419.2016.1266353

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Мишра, А., Мамиди А.С., Раджмани Р.С., Рэй А., Рой Р. и Суролия А. (2018). Аллостерический ингибитор Mycobacterium tuberculosis ArgJ: значение для новой комбинаторной терапии. EMBO Мол. Мед. 10:e8038. doi: 10.15252/emmm.201708038

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Мосаеи Х., Молодцов В., Кепплингер Б., Харботтл Дж., Мун К.В., Дживс Р.Э. и соавт. (2018). Механизм действия канглемицина а, природного продукта ансамицина, который активен в отношении устойчивых к рифампицину микобактерий туберкулеза . Мол. Клетка. 72, 263–274. doi: 10.1016/j.molcel.2018.08.028

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Надав, Э., Сильвия, Б., Йоав, П., Шира, А., Джейкоб, Г., Гал, Р., и др. (2018). Структура синтазы жирных кислот Mycobacterium tuberculosis типа I с разрешением 3,3 Å. Нац. общ. 9:3886. doi: 10.1038/s41467-018-06440-6

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Нанн, А. Дж., Phillips, P.P.J., Meredith, S.K., Chiang, C.Y., Conradie, F., Dalai, D., et al. (2019). Испытание более короткого режима лечения устойчивого к рифампину туберкулеза. Н. англ. Дж. Мед. 380, 1201–1213. дои: 10.1056/NEJMoa1811867

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Пераман, Р., Куппусами, Р., Килли, С.К., и Редди, Ю.П. (2016). Новые конъюгаты хиноксалина как сильнодействующие противотуберкулезные и антибактериальные средства. Междунар. Дж. Мед. хим. 2016:6471352.дои: 10.1155/2016/6471352

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Петрелла, С., Кэптон, Э., Рейнал, Б., Жиффард, К., Туро, А., Боннет, Ф., и др. (2019). Общая структура ДНК-гиразы Mycobacterium tuberculosis раскрывает роль Corynebacteriales GyrB-специфичной вставки в АТФазной активности. Структура 27, 579–589. doi: 10.1016/j.str.2019.01.004

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Поушали, К., Сапна Б., Дипак К., Бишан Д. Р. и Ашвани К. (2021). Образование биопленки в легких способствует вирулентности и лекарственной устойчивости Mycobacterium tuberculosis . Нац. коммун. 12:1606. doi: 10.1038/s41467-021-21748-6

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Прадхан, С., и Синха, К. (2018). Высокопроизводительный скрининг против пантотенатсинтетазы идентифицирует амидные ингибиторы против Mycobacterium tuberculosis и Staphylococcus aureus . Силикон. Фармакол. 6:9. doi: 10.1007/s40203-018-0046-4

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Растин, А.Д.К., Аманда, Р., Луджеко, К., Мириам, Р., Хлоя, Л., Джулия, Ф., и другие. (2020). Генетический фон модулирует эволюцию устойчивости микобактерий туберкулеза к фторхинолонам. Мол. биол. Эвол. 37, 195–207. doi: 10.1093/molbev/msz214

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Саба, Н., Шрути Д., Сатья Н. Н., Дивья А., Лакшья В. С., Прадип К. и соавт. (2021). Нарушенный путь эксцизионной репарации основания у Mycobacterium tuberculosis придает хозяину превосходную адаптивность. PLoS Патог. 17:e1009452. doi: 10.1371/journal.ppat.1009452

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Samiksha, G., Bhagwan, M., Erwin, M.J., Jos, G.W.K., Gokarna, R.G., Daan, J.T., et al. (2019). Фармакокинетика, фармакодинамика и исход левофлоксацина у больных туберкулезом с множественной лекарственной устойчивостью. евро. Дыхание Дж. 54:1802107. дои: 10.1183/13993003.02107-2018

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Сандер, Н. Г., Саманта, Л. С., и Аннелис, В. Р. (2020). Механизмы лекарственной толерантности у Mycobacterium tuberculosis . клин. микробиол. Ред. 34:e00141-20. doi: 10.1128/CMR.00141-20

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Сын, К. Дж., Кешавджи, С., и Рич, М.Л. (2015). Туберкулез с множественной лекарственной устойчивостью и туберкулез с широкой лекарственной устойчивостью. Гавань Колд Спринг. Перспектива. Мед. 5:а017863. doi: 10.1101/cshperspect.a017863

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Soutter, H.H., Centrella, P., Clark, M.A., Cuozzo, J.W., Dumelin, C.E., Guie, M.A., et al. (2016). Открытие кофактор-специфических, бактерицидных Mycobacterium tuberculosis ингибиторов InhA с использованием технологии ДНК-кодируемых библиотек. Проц. Натл. акад. науч. США 113, E7880–E7889. doi: 10.1073/pnas.1610978113

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Такаки, ​​К., Косма, К.Л., Тролль, М.А., и Рамакришнан, Л. (2012). Платформа in vivo для быстрого открытия высокопроизводительных противотуберкулезных препаратов. Cell Rep. 2, 175–184. doi: 10.1016/j.celrep.2012.06.008

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Тао, Н. Н., Хе, X. С., Чжан, X.X., Liu, Y., Yu, CB, and Li, HC (2017). Лекарственно-устойчивый туберкулез среди детей, Китай, 2006-2015 гг. Экстренный. Заразить. Дис. 23, 18:00–18:05. дои: 10.3201/eid2311.170234

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Тьяго Б., Кэтрин О., Дивья Т., Кертис А. Э., Шон В., Дженна А. и др. (2019). Пластичность дыхательной цепи Mycobacterium tuberculosis и ее влияние на разработку противотуберкулезных препаратов. Нац. коммун. 10:4970. doi: 10.1038/s41467-019-12956-2

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Tweed, C.D., Dawson, R., Burger, D.A., Conradie, A., Crook, A.M., Mendel, C.M., et al. (2019). Бедаквилин, моксифлоксацин, претоманид и пиразинамид в течение первых 8 недель лечения пациентов с лекарственно-чувствительным или лекарственно-устойчивым туберкулезом легких: многоцентровое открытое частично рандомизированное исследование фазы 2b. Ланцет Респ. Мед. 7, 1048–1058.дои: 10.1016/S2213-2600(19)30366-2

Полнотекстовая перекрестная ссылка | Академия Google

Ю. П., Чжао Дж. З., Фэн М. Х., Вэй Дж., Йи Ф. М., Линг Л. и соавт. (2017). In Vitro Лекарственная чувствительность бедаквилина, деламанида, линезолида, клофазимина, моксифлоксацина и гатифлоксацина при туберкулезе с широкой лекарственной устойчивостью в Пекине, Китай. Антимикроб. Агенты Чемотер. 61, e00900–e00917. doi: 10.1128/AAC.00900-17

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Тесты на микобактерии туберкулеза (диагностика in vitro) —

Нью-Йорк, 31 июля 2020 г. (GLOBE NEWSWIRE) — Reportlinker.com объявляет о выпуске отчета «Тесты Mycobacterium Tuberculosis (диагностика in vitro) — модель анализа и прогнозирования глобального рынка (влияние COVID-19 на рынок)» — https://www.reportlinker.com/p05948872/?utm_source=GNW

В модели подробно обсуждается влияние COVID-19 на рынок тестов на микобактерии туберкулеза в 2020 году и далее. Инфекция туберкулеза (ТБ) имеет два режима существования: латентный ТБ и активный ТБ.

При латентном ТБ микобактерия находится в организме в состоянии покоя.У большинства людей симптомы не проявляются, но считается, что эти пациенты подвержены риску развития активной туберкулезной инфекции.

Туберкулез можно обнаружить с помощью ряда различных тестов, включая кожную пробу на туберкулез (TST), анализы крови на высвобождение гамма-интерферона (IGRA), тесты амплификации нуклеиновых кислот (NAAT), тесты микроскопии мазка мокроты и культуральные тесты. Дополнительно , рентген грудной клетки также часто используется для диагностики туберкулезной инфекции.

Туберкулез с множественной лекарственной устойчивостью представляет собой все более серьезную угрозу искоренению туберкулеза во всем мире.Трудно поставить диагноз из-за непоследовательной инфраструктуры тестирования и отсутствия лабораторных специалистов и клиницистов.

МЛУ-ТБ определяется как бацилла ТБ, устойчивая как минимум к изониазиду и рифампицину, в то время как ШЛУ-ТБ устойчива к большему количеству лекарств, включая фторхинолон, и к одному из трех инъекционных препаратов (амикацину, канамицину и капреомицину). Диагностические тесты Mycobacterium Tuberculosis включают тесты IGRA и NAAT.

Каждая из охватываемых 39 рыночных моделей с цветовой кодировкой и полным набором поставщиков оснащена эпидемиологическими показаниями с указанием объема процедур.Чтобы повысить прозрачность данных, интерактивные результаты Excel охватывают установленную базу, новые объемы продаж, использование продукта, средние цены продажи, размер рынка и анализ доли/рейтинга компании (где это доступно).

Кроме того, комментарии аналитиков с качественным пониманием предлагают контекст для количественных данных.

Основные элементы рыночной модели: –

Продаваемые в настоящее время тесты на микобактерии туберкулеза и меняющаяся конкурентная среда –
– Проницательный обзор ключевых тенденций отрасли.
– Годовой общий доход от рынка Mycobacterium Tuberculosis Tests по сегментам и прогнозам рынка с 2015 по 2030 год.
– Подробные данные об общих процедурах, единицах, средних ценах продажи и рыночной стоимости по сегментам.

Глобальная, региональная и страновая рыночная информация –
– Доступна качественная рыночная информация с глобальными тенденциями, которые далее разбиваются на региональные тенденции. Кроме того, аналитики предоставляют уникальную информацию о рынке для конкретной страны.
– SWOT-анализ рынка тестов на микобактерии туберкулеза.
– Анализ динамики и тенденций конкуренции на рынке Тесты на микобактерии туберкулеза.

Улучшите понимание рынка, получая полную картину, включая обзор системы здравоохранения. Кроме того, сегмент Market Access позволяет вам глубже изучить динамику рынка с информацией о политике возмещения расходов и нормативно-правовой базе.
– Обзор системы здравоохранения в конкретной стране.
– Политика возмещения расходов для конкретной страны.
— Нормативная база медицинских технологий для конкретной страны.

Надежные методологии и источники позволяют модели обеспечивать обширный и точный обзор рынка. Первичные источники спроса и предложения интегрированы в синдицированные модели, включая ключевых лидеров мнений.

Кроме того, для определения рыночных тенденций используются реальные источники данных; к ним относятся базы данных государственных процедур, базы данных больничных закупок и собственные онлайн-базы данных.

Охваченные компании: Qiagen NV , Oxford Immunotec Ltd , Danaher Corp , F. Hoffmann-La Roche Ltd , Hologic Inc и другие

Охваченные страны: США, Великобритания, Германия, Франция, Италия, Испания, Бразилия, Китай, Индия, Россия, Япония, Австралия, Канада, Мексика, Южная Корея, Дания, Ирландия, Нидерланды, Новая Зеландия, Южная Африка, Швеция, Швейцария, Австрия, Бельгия, Финляндия, Израиль, Норвегия, Польша, Португалия, Тайвань, Чехия, Греция, Венгрия, Турция, Египет, Саудовская Аравия, Объединенные Арабские Эмираты, Аргентина и Чили.

Scope
Эта модель рынка дает важную экспертную информацию, которую вы не найдете ни в одном другом источнике.

Модель иллюстрирует качественные и количественные тенденции на указанном рынке. Эта модель необходима для прочтения –
– руководителям CMO, которые должны иметь глубокое понимание рынка тестов Mycobacterium Tuberculosis для принятия решений по стратегическому планированию и инвестированию.
– Руководители отдела снабжения и закупок, которые должны понимать важнейшие компоненты базы снабжения, чтобы принимать решения о выборе поставщиков и управлении ими.
— частные инвесторы, которым необходимо более глубокое понимание рынка для определения и оценки потенциальных объектов инвестиций.

Причины купить
Модель позволит вам –
– Понять влияние COVID-19 на рынок тестов на микобактерии туберкулеза.
— Разработайте и спроектируйте свои стратегии внутреннего и внешнего лицензирования путем анализа продуктов и технологий, находящихся в стадии разработки, и путем определения компаний с наиболее надежными процессами.
– Разрабатывайте бизнес-стратегии, понимая тенденции, формирующие и управляющие тестами Mycobacterium Tuberculosis.
– Увеличивайте доходы за счет понимания ключевых тенденций, инновационных продуктов и технологий, сегментов рынка и компаний, которые могут повлиять на рынок Mycobacterium Tuberculosis Tests в будущем.
– Сформулируйте эффективные стратегии продаж и маркетинга, понимая конкурентную среду и анализируя долю компании среди лидеров рынка.
— Определите новых игроков с потенциально сильным портфелем продуктов и разработайте эффективные контрстратегии, чтобы получить конкурентное преимущество.
— Отслеживайте продажи устройств на глобальном и страновом рынке тестов на микобактерии туберкулеза в период с 2015 по 2030 год.
– Организуйте свои продажи и маркетинг, определяя рыночные категории и сегменты, которые предоставляют максимальные возможности для консолидации, инвестиций и стратегического партнерства.
Прочтите полный отчет: https://www.reportlinker.com/p05948872/?utm_source=GNW

О программе Reportlinker
ReportLinker — отмеченное наградами решение для исследования рынка. Reportlinker находит и упорядочивает последние отраслевые данные, чтобы вы могли получить все необходимые исследования рынка — мгновенно и в одном месте.

__________________________

 

Тесты на микобактерии туберкулеза (диагностика in vitro)

Тесты на микобактерии туберкулеза (диагностика in vitro) — модель глобального анализа и прогнозирования рынка (влияние COVID-19 на рынок) создана для визуализации количественных рыночных тенденций в рамках терапевтической диагностики in vitro площадь.

В модели подробно обсуждается влияние COVID-19 на рынок тестов на микобактерии туберкулеза в 2020 году и далее. Инфекция туберкулеза (ТБ) имеет два режима существования: латентный ТБ и активный ТБ.При латентном туберкулезе микобактерии находятся в организме в состоянии покоя. У большинства людей симптомы не проявляются, но считается, что эти пациенты подвержены риску развития активной туберкулезной инфекции.

Туберкулез можно обнаружить с помощью ряда различных тестов, включая кожную пробу на туберкулез (TST), анализы крови на высвобождение гамма-интерферона (IGRA), тесты амплификации нуклеиновых кислот (NAAT), тесты микроскопии мазка мокроты и культуральные тесты. Кроме того, рентген грудной клетки также часто используется для диагностики туберкулезной инфекции.Туберкулез с множественной лекарственной устойчивостью представляет собой все более серьезную угрозу искоренению туберкулеза во всем мире. Трудно поставить диагноз из-за непоследовательной инфраструктуры тестирования и отсутствия лабораторных специалистов и клиницистов.

МЛУ-ТБ определяется как бацилла ТБ, устойчивая как минимум к изониазиду и рифампицину, в то время как ШЛУ-ТБ устойчива к большему количеству лекарств, включая фторхинолон, и к одному из трех инъекционных препаратов (амикацину, канамицину и капреомицину). Диагностические тесты Mycobacterium Tuberculosis включают тесты IGRA и NAAT.

Каждая из охватываемых 39 рыночных моделей с цветовой кодировкой и полным набором поставщиков оснащена эпидемиологическими показаниями с указанием объема процедур. Чтобы повысить прозрачность данных, интерактивные результаты Excel охватывают установленную базу, новые объемы продаж, использование продукта, средние цены продажи, размер рынка и анализ доли/рейтинга компании (где это доступно). Кроме того, комментарии аналитиков с качественным пониманием предлагают контекст для количественных данных.

Основные элементы рыночной модели: –

Продающиеся в настоящее время тесты на микобактерии туберкулеза и меняющаяся конкурентная среда –

  • Проницательный обзор ключевых тенденций отрасли.
  • Суммарный доход от рынка Mycobacterium Tuberculosis Tests в годовом исчислении по сегментам и прогнозы рынка с 2015 по 2030 год.
  • Подробные данные по общим процедурам, единицам, средним ценам продажи и рыночной стоимости по сегментам.
Глобальная, региональная и страновая рыночная информация –
  • Доступна качественная рыночная информация с глобальными тенденциями, которые далее разбиваются на региональные тенденции. Кроме того, аналитики предоставляют уникальную информацию о рынке для конкретной страны.
  • SWOT-анализ рынка тестов на микобактерии туберкулеза.
  • Информация о конкурентной динамике и тенденциях рынка Тесты на микобактерии туберкулеза.
Улучшите понимание рынка, получая полную картину, включая обзор системы здравоохранения. Кроме того, сегмент Market Access позволяет вам глубже изучить динамику рынка с информацией о политике возмещения расходов и нормативно-правовой базе.
  • Обзор системы здравоохранения в конкретной стране.
  • Политика возмещения расходов для конкретной страны.
  • Нормативная база медицинских технологий в конкретной стране.
Надежные методологии и источники позволяют модели обеспечивать обширный и точный обзор рынка. Первичные источники спроса и предложения интегрированы в синдицированные модели, включая ключевых лидеров мнений. Кроме того, для определения рыночных тенденций используются источники данных из реального мира; к ним относятся базы данных государственных процедур, базы данных больничных закупок и собственные онлайн-базы данных.

Охваченные компании: Qiagen NV , Oxford Immunotec Ltd , Danaher Corp , F. Hoffmann-La Roche Ltd , Hologic Inc и другие

Охваченные страны: США, Великобритания, Германия, Франция, Италия, Испания, Бразилия , Китай, Индия, Россия, Япония, Австралия, Канада, Мексика, Южная Корея, Дания, Ирландия, Нидерланды, Новая Зеландия, Южная Африка, Швеция, Швейцария, Австрия, Бельгия, Финляндия, Израиль, Норвегия, Польша, Португалия, Тайвань, Чехия, Греция, Венгрия, Турция, Египет, Саудовская Аравия, Объединенные Арабские Эмираты, Аргентина и Чили.

Область применения

Эта модель рынка дает важную экспертную информацию, которую вы не найдете ни в одном другом источнике. Модель иллюстрирует качественные и количественные тенденции на указанном рынке. Эта модель необходима для прочтения –

  • руководителям CMO, которые должны иметь глубокое понимание рынка тестов Mycobacterium Tuberculosis для принятия решений по стратегическому планированию и инвестированию.
  • Руководители отдела снабжения и снабжения, которые должны понимать важнейшие компоненты базы снабжения, чтобы принимать решения о выборе поставщиков и управлении ими.
  • Инвесторы частного капитала, которым необходимо более глубокое понимание рынка для определения и оценки потенциальных объектов инвестиций.
Причины купить

Модель позволит вам –

  • Понять влияние COVID-19 на рынок тестов на микобактерии туберкулеза.
  • Разработайте и спроектируйте свои стратегии внутреннего и внешнего лицензирования путем анализа продуктов и технологий, находящихся в стадии разработки, и путем выявления компаний с наиболее надежными процессами.
  • Разрабатывайте бизнес-стратегии, понимая тенденции, формирующие и стимулирующие тесты на микобактерии туберкулеза.
  • Увеличивайте доходы за счет понимания ключевых тенденций, инновационных продуктов и технологий, сегментов рынка и компаний, которые могут повлиять на рынок Mycobacterium Tuberculosis Tests в будущем.
  • Разработка эффективных стратегий продаж и маркетинга на основе понимания конкурентной среды и анализа доли компании среди лидеров рынка.
  • Определите новых игроков с потенциально сильным портфелем продуктов и разработайте эффективные контрстратегии, чтобы получить конкурентное преимущество.
  • Отслеживание продаж устройств на глобальном рынке и рынке тестов на микобактерии туберкулеза в 2015-2030 гг.
  • Организуйте свои продажи и маркетинг, определяя рыночные категории и сегменты, которые предоставляют максимальные возможности для консолидации, инвестиций и стратегического партнерства.

T-SPOT®.TB

Переосмыслите свое тестирование на туберкулез.

Превзойдите столетние субъективные кожные тесты с более высоким стандартом анализа крови на латентный туберкулез (ТБ) с помощью T-SPOT. ТБ

Независимо от того, работаете ли вы в частной практике или в организации, являетесь частью системы здравоохранения или отвечаете за проверку здоровья сотрудников/профессионального здоровья, есть много причин выбрать анализ крови на туберкулез, а не тестирование кожи.

T-SPOT. TB Тест , предоставляемый Quest Diagnostics, требует только одного визита, экономичен и дает объективные результаты для более широкой группы населения.

a Компания Quest Diagnostics утвердила использование этого анализа в рамках CLIA для обработки образцов спустя более 8 часов после сбора, вплоть до 54 часов.

Загрузите выбранные документы ниже.

Точность

Т-ОБРАЗНОЕ. TB дает очень точные результаты, особенно среди пациентов, привитых бациллой Кальметта-Герена (БЦЖ), и пациентов с ослабленным иммунитетом.

Выучить больше

Т-ОБРАЗНОЕ. ТБ предложений:

  • Низкий уровень ложноположительных результатов по сравнению с кожными тестами у вакцинированных БЦЖ лиц 1
  • Неопределенные/недействительные тарифы
  • Точность у пациентов с ослабленным иммунитетом 2

Доступность

Т-ОБРАЗНОЕ. TB может помочь всем, включая пациентов старше 2 лет, пройти тестирование на латентный ТБ с доступом к сбору образцов в более чем 2250 центрах обслуживания пациентов.

Узнать больше

T-SPOT. TB подходит для:

  • Пациенты с ослабленной иммунной системой 1
  • Вакцинированные БЦЖ больных 1
  • Пациенты, посещающие наши центры обслуживания пациентов, где внедрены дополнительные протоколы безопасности COVID-19

Эффективность

Экономя время благодаря одному посещению офиса и объективным результатам, T-SPOT. TB помогает предотвратить ненужные последующие тесты и расходы, связанные с ложноположительными результатами кожных тестов.

Узнать больше

T-SPOT. ТБ поддерживается:

  • 50% меньше личных посещений
  • Внутрисетевой доступ к большинству основных планов медицинского страхования

Что является первичным скрининговым тестом на инфекцию туберкулеза (ТБ)?

Автор

Томас Э. Херчлайн, доктор медицины  , профессор медицины, Государственный университет Райта, Медицинская школа Бунсхофта; Медицинский консультант, общественное здравоохранение, Туберкулезная клиника округа Дейтон и Монтгомери (Огайо)

Томас Э. Херчлайн, доктор медицинских наук, является членом следующих медицинских обществ: Alpha Omega Alpha, Общество инфекционных заболеваний Америки, Общество инфекционных заболеваний штата Огайо

Раскрытие информации: Нечего раскрывать.

Соавтор (ы)

Джудит К. Амороза, доктор медицины, FACR  Клинический профессор радиологии и заместитель председателя по развитию факультета и медицинскому образованию, Медицинская школа имени Роберта Вуда Джонсона в Рутгерсе

Джудит К. Амороза, доктор медицины, FACR является членом следующих медицинских обществ: Американский колледж радиологии, Американское общество рентгеновских лучей, Ассоциация университетских рентгенологов, Радиологическое общество Северной Америки, Общество торакальной радиологии

Раскрытие информации: Нечего раскрывать.

Главный редактор

Майкл Стюарт Бронз, доктор медицинских наук  Дэвид Росс Бойд Профессор и заведующий кафедрой медицины Стюарта Дж. Вольфа Заведующий кафедрой внутренних болезней медицинского факультета Центра медицинских наук Университета Оклахомы; магистр Американского колледжа врачей; член Американского общества инфекционистов; Член Королевского колледжа врачей, Лондон,

. Майкл Стюарт Бронз, доктор медицинских наук, является членом следующих медицинских обществ: Альфа-Омега-Альфа, Американский колледж врачей, Американская медицинская ассоциация, Ассоциация профессоров медицины, Американское общество инфекционистов, Медицинская ассоциация штата Оклахома, Южное общество клинических исследований

Раскрытие информации: Нечего раскрывать.

Благодарности

Эрика Бэнг Государственный университет Нью-Йорка Медицинский центр Даунстейт Медицинский колледж

Раскрытие: Нечего раскрывать.

Диана Брейнард, MD Консультирующий персонал, отделение инфекционных заболеваний, Massachusetts General Hospital

Раскрытие: Нечего раскрывать.

Памела С. Чавис, доктор медицины Профессор кафедры офтальмологии и неврологии Медицинского колледжа Медицинского университета Южной Каролины

Памела С. Чавис, доктор медицинских наук, является членом следующих медицинских обществ: Американской академии неврологии, Американской академии офтальмологии и Североамериканского общества нейроофтальмологии

.

Раскрытие: Нечего раскрывать.

Дирк М. Элстон, MD Директор Академии дерматопатологии Аккермана, Нью-Йорк

Дирк М. Элстон, доктор медицинских наук, является членом следующих медицинских обществ: Американская академия дерматологии

.

Раскрытие: Нечего раскрывать.

Теодор Дж. Гаэта, DO, MPH, FACEP Клинический адъюнкт-профессор, отделение неотложной медицины, Медицинский колледж Вейла Корнелла; заместитель председателя и программный директор резидентуры по неотложной медицинской помощи, отделение неотложной медицинской помощи, Нью-Йоркская методистская больница; Академический председатель, адъюнкт-профессор, отделение неотложной медицины, Медицинский факультет Университета Святого Георгия

Теодор Дж. Гаэта, DO, MPH, FACEP является членом следующих медицинских обществ: Альянс за клиническое образование, Американский колледж врачей скорой помощи, Директора клерков по неотложной медицине, Совет директоров резидентур по неотложной медицине, Нью-Йоркская медицинская академия и Общество академической неотложной медицины

Раскрытие: Нечего раскрывать.

Аарон Глатт, доктор медицины Профессор клинической медицины Нью-Йоркского медицинского колледжа; Президент и главный исполнительный директор, бывший главный врач отделения медицины и инфекционных заболеваний больницы Св. Иосифа (бывшая больница Нью-Айленд)

Аарон Глатт, доктор медицинских наук, является членом следующих медицинских обществ: Американского колледжа пульмонологов, Американского колледжа врачей-руководителей, Американского колледжа врачей, Американского колледжа врачей-Американского общества внутренних болезней, Американской медицинской ассоциации, Американского общества микробиологии. , Американское торакальное общество, Американская ассоциация венерических заболеваний, Американское общество инфекционных заболеваний, Международное общество по СПИДу и Американское общество медицинской эпидемиологии

Раскрытие: Нечего раскрывать.

Simon K Law, MD, PharmD Клинический профессор медицинских наук, кафедра офтальмологии, Глазной институт Жюля Штейна, Калифорнийский университет, Лос-Анджелес, Медицинская школа Дэвида Геффена

Simon K Law, MD, PharmD является членом следующих медицинских обществ: Американской академии офтальмологии, Американского общества глаукомы и Ассоциации исследований зрения и офтальмологии

.

Раскрытие: Нечего раскрывать.

John M Leedom, MD Почетный профессор медицины Медицинской школы Кека Университета Южной Калифорнии

John M Leedom, MD, является членом следующих медицинских обществ: Alpha Omega Alpha, Американский колледж врачей-Американское общество внутренних болезней, Американское общество микробиологии, Американское общество инфекционных заболеваний, Международное общество по СПИДу и Phi Beta Kappa

Раскрытие: Нечего раскрывать.

Джеймс Ли, доктор медицины Бывший доцент отделения неотложной медицины Гарвардской медицинской школы; Совет директоров, Дистанционная медицина

Раскрытие: Нечего раскрывать.

Джеффри Мефферт, доктор медицины , ассистент клинического профессора дерматологии, Медицинский факультет Техасского университета в Сан-Антонио

Джеффри Мефферт, доктор медицинских наук, является членом следующих медицинских обществ: Американской академии дерматологии, Американской медицинской ассоциации, Ассоциации военных дерматологов и Техасского дерматологического общества

.

Раскрытие: Нечего раскрывать.

Монте С. Мельцер, MD Начальник дерматологической службы, Union Memorial Hospital

Монте С. Мельцер, доктор медицинских наук, является членом следующих медицинских обществ: Alpha Omega Alpha и Американской академии дерматологии

.

Раскрытие: Нечего раскрывать.

Susannah K Mistr, MD Врач-резидент, отделение офтальмологии, Медицинский центр Университета Мэриленда

Susannah K Mistr, MD, является членом следующих медицинских обществ: Американская академия офтальмологии, Американский колледж хирургов, Американская медицинская ассоциация, Американская ассоциация студентов-медиков/Фонд, Американское общество катарактальной и рефракционной хирургии и Медицинская ассоциация Южной Каролины

.

Раскрытие: Нечего раскрывать.

Кэрол А. Нэйси, доктор философии Адъюнкт-профессор кафедры биологии Католического университета Америки; Адъюнкт-профессор кафедры тропической медицины и микробиологии Университета Джорджа Вашингтона

Кэрол Нэйси, доктор философии, является членом следующих медицинских обществ: Американской академии микробиологии и Американского общества микробиологии

.

Раскрытие информации: Sequella, Inc. Доля участия Занятость; Sequella, Inc. Долевой инвестор

Дж. Джеймс Роуси, доктор медицины , бывший директор службы роговицы, Институт катаракты и лазера Святого Луки

J James Rowsey, MD, является членом следующих медицинских обществ: Американская академия офтальмологии, Американская ассоциация содействия развитию науки, Американская медицинская ассоциация, Ассоциация исследований в области зрения и офтальмологии, Медицинская ассоциация Флориды, Панамериканская ассоциация офтальмологов. , Sigma Xi и Южная медицинская ассоциация

Раскрытие: Нечего раскрывать.

Hampton Roy Sr, MD Адъюнкт-профессор, кафедра офтальмологии, Арканзасский университет медицинских наук

Хэмптон Рой-старший, доктор медицинских наук, является членом следующих медицинских обществ: Американской академии офтальмологии, Американского колледжа хирургов и Панамериканской ассоциации офтальмологов

.

Раскрытие: Нечего раскрывать.

John D Sheppard Jr, MD, MMSc Профессор офтальмологии, микробиологии и молекулярной биологии, клинический директор Центра офтальмологической фармакологии Томаса Р. Ли, директор ординатуры по офтальмологии, Медицинская школа Восточной Вирджинии; Президент Virginia Eye Consultants

John D Sheppard Jr, MD, MMSc является членом следующих медицинских обществ: Американская академия офтальмологии, Американское общество микробиологии, Американское общество катарактальной и рефракционной хирургии, Американское общество увеита и Ассоциация исследований зрения и офтальмологии

Раскрытие: Нечего раскрывать.

Ричард Х. Синерт, DO Профессор неотложной медицины, клинический ассистент профессора медицины, директор по исследованиям, Медицинский колледж Государственного университета Нью-Йорка; Консультирующий персонал, отделение неотложной медицины, Больничный центр округа Кингс

Richard H Sinert, DO является членом следующих медицинских обществ: Американский колледж врачей и Общество академической неотложной медицины

Раскрытие: Нечего раскрывать.

Франсиско Талавера, PharmD, PhD Адъюнкт-профессор, Фармацевтический колледж Медицинского центра Университета Небраски; Главный редактор Medscape Drug Reference

Раскрытие информации: Заработная плата Medscape

Кит Цанг, MD Врач-резидент, клинический помощник инструктора, отделение неотложной медицины, Государственный университет штата Нью-Йорк, Больница округа Кингс

Кит Цанг, доктор медицинских наук, является членом следующих медицинских обществ: Американского колледжа врачей скорой помощи, Ассоциации резидентов скорой помощи и Общества академической неотложной медицины

.

Раскрытие: Нечего раскрывать.

Шьям Верма, MBBS, DVD, FAAD Доцент кафедры дерматологии Университета Вирджинии; Адъюнкт-профессор кафедры дерматологии Государственного университета Нью-Йорка в Стонибруке, адъюнкт-профессор кафедры дерматологии Пенсильванского университета

Шьям Верма, MBBS, DVD, FAAD является членом следующих медицинских обществ: Американская академия дерматологии

Раскрытие: Нечего раскрывать.

Ричард П. Винсон, доктор медицины Ассистент клинического профессора, кафедра дерматологии, Центр медицинских наук Техасского технологического университета, Медицинская школа Пола Л. Фостера; Консультант, дерматология Маунтин-Вью, PA

Ричард П. Винсон, доктор медицинских наук, является членом следующих медицинских обществ: Американской академии дерматологии, Ассоциации военных дерматологов, Техасского дерматологического общества и Техасской медицинской ассоциации

.

Раскрытие: Нечего раскрывать.

Эрик Л. Вайс, MD, DTM&H Медицинский директор, Управление непрерывности обслуживания и планирования на случай стихийных бедствий, Директор по стипендиям, Стипендия по медицине катастроф Медицинского центра Стэнфордского университета, Председатель Целевой группы SUMC и LPCH по биотерроризму и готовности к чрезвычайным ситуациям, клинический младший преподаватель, Департамент Хирургия (неотложная медицинская помощь), Медицинский центр Стэнфордского университета

Эрик Л. Вайс, доктор медицинских наук, DTM&H, является членом следующих медицинских обществ: Американский колледж врачей скорой помощи, Американский колледж медицины труда и окружающей среды, Американская медицинская ассоциация, Американское общество тропической медицины и гигиены, Врачи за социальную ответственность, Юго-восточное хирургическое общество. Конгресс, Южная ассоциация онкологии, Южное клиническое неврологическое общество и Медицинское общество дикой природы

Раскрытие: Нечего раскрывать.

.

Добавить комментарий

Ваш адрес email не будет опубликован. Обязательные поля помечены *

© МУНИЦИПАЛЬНОЕ АВТОНОМНОЕ ОБЩЕОБРАЗОВАТЕЛЬНОЕ УЧРЕЖДЕНИЕ СРЕДНЯЯ ОБЩЕОБРАЗОВАТЕЛЬНАЯ ШКОЛА №3
Антиген Тест Пациенты без ЛТИ и ТКП ⩽5 мм Пациенты с ТКП 6–10 мм P 1 P 2
CFP-10 Тимидин 1/1/111097) * 0/10 (0) 23/35 (65.7) 0.99 <0,0001
Phr-26 1/13 (7.7) * 0/10 (0) 16/35 (45.7) 0.99 0.008
ELISPOT 0 0/13 (0) 1/10 (10) 18/35 (51.4) 0.04 0.03
ESAT-6 Тимидин 0/8 (0) 0/3 (0) 10/19 (52.6) 1.0 0.22
ELISPOT 0 1/8 (12.5) (12.5) 1/3 (33.4) 16/19 (84.2) 0.50 0.12
36.00142914

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Олдред, К. Дж., Блоуэр, Т. Р., Кернс, Р. Дж., Бергер, Дж. М., и Ошерофф, Н. (2016). Взаимодействия фторхинолонов с гиразой Mycobacterium tuberculosis : усиление активности препарата в отношении гиразы дикого типа и резистентной гиразы. Проц. Натл. акад. науч. США 113, E839–E846. doi: 10.1073/pnas.1525055113

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Араш, Г., Элиза Т., Эранга К., Стефан Н., Дженнифер П., Клаудио У.К. и соавт. (2019). Устойчивость к изониазиду у Mycobacterium tuberculosis представляет собой гетерогенный фенотип, состоящий из перекрывающихся распределений МИК с различными лежащими в основе механизмами устойчивости. Антимикроб. Агенты Чемотер. 63:e00092-19. doi: 10.1128/AAC.00092-19

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Артур, П. К., Амар, В., Крамер, П., Аркаифи, Г. Б., Блесси, Э.J.S., Fuseini, M.S., et al. (2019). Характеристика двух новых штаммов Mycobacterium smegmatis с множественной лекарственной устойчивостью: инструменты для рутинного скрининга in vitro новых антимикобактериальных агентов. Антибиотики 8:4. doi: 10.3390/антибиотики8010004

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Бхусал, Ю., Шиохира, К.М., и Ямане, Н. (2005). Определение синергизма in vitro при комбинировании трех противомикробных препаратов против Mycobacterium tuberculosis . Междунар. Дж. Антимикроб. Агенты 26, 292–297. doi: 10.1016/j.ijantimicag.2005.05.005

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Блоуэр, Т. Р., Уильямсон, Б. Х., Кернс, Р. Дж., и Бергер, Дж. М. (2016). Кристаллическая структура и стабильность расщепленных комплексов гиразы-фторхинолона Mycobacterium tuberculosis. Проц. Натл. акад. науч. США 113, 1706–1713. doi: 10.1073/pnas.1525047113

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Бонапас, К.Р., Боссо, Дж. А., Фридрих, Л. В., и Уайт, Р. Л. (2002). Сравнение методов интерпретации тестирования синергии шахматной доски. Диагн. микробиол. Заразить. Дис. 44, 363–366. doi: 10.1016/S0732-8893(02)00473-X

Полнотекстовая перекрестная ссылка | Академия Google

Кастро, Р.А.Д., Соня, Б., и Себастьен, Г. (2020). Эволюция внутрихозяинной устойчивости к противомикробным препаратам Mycobacterium tuberculosis . FEMS Microbiol. Ред. 71, 1–27. дои: 10.1093/фемсрэ/фуаа071

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Коррейя С., Поэта П., Хебрауд М., Капело Дж. Л. и Игрехас Г. (2017). Механизмы действия и резистентности хинолонов: где мы находимся? J. Med. микробиол. 66, 551–559. doi: 10.1099/jmm.0.000475

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Эмили, округ Колумбия, Урсула, М., и Жоао, С. К. Ф. (2021). Экспрессия генов BMP-6 и SMAD4 изменена в клетках кумулюса у женщин с бесплодием, связанным с эндометриозом. Acta Obstet. Гинекол. Сканд. 100, 868–875. doi: 10.1111/aogs.13931

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Фатьма, К., Лор, Ф.Л.Р., Орели, К., Винсент, Дж., Насер, Л., Коэн, А., и др. (2020). Полностью еженедельный противотуберкулезный режим: исследование, подтверждающее концепцию. евро. Дыхание Дж. 56:1